Mangosztán (Garcinia mangostana) a húspótlás enyhíti a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízott patkányok biokémiai és morfológiai változásait a májban és a vesében

Absztrakt

Háttér

A mangosztán őshonos gyümölcs Délkelet-Ázsiából. Gazdag fenolos vegyületekben, például xantonokban, antocianinokban és fenolsavakban. A mangosztánperikarp-kivonat gátló hatást mutatott a hasnyálmirigy lipáza ellen, és potenciálisan felhasználható az elhízás kezelésére. A mangosztán húsának az elhízással szembeni jótékony hatásairól azonban korlátozott számú tanulmány készült. Ennek a tanulmánynak a célja a Garcinia mangostana hús (GMF) a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízott patkányok máj- és vese biokémiai és morfológiai változásairól.

Mód

Negyven egészséges Sprague-Dawley patkányt öt csoportba randomizáltak (n = 8) négy csoportban magas zsírtartalmú étrendet (HFD) tápláltak 10 hétig, a kontroll csoportot pedig patkány-chow táplálékkal. Elhízott patkányokban a GMF-kiegészítést 7 hétig folytatták a 10. héttől kezdve a HFD megkezdése után különböző dózisokban (200 mg/kg, 400 mg/kg és 600 mg/kg). A pozitív és negatív kontroll patkányoknak desztillált vizet adtak orális szondán keresztül. A plazma lipidprofilt, az antioxidáns enzimeket és a gyulladásgátló markereket kereskedelmi készletekkel határoztuk meg. A máj és a vese szerkezetét a szövettan határozta meg.

Eredmények

A 10 hétig HFD-vel táplált patkányok megnövelték a plazma LDL-koleszterinszintjét, csökkentették a plazma glutation-peroxidáz szintjét, és testtömegük lényegesen magasabb volt, mint a normál kontroll patkányokban (o

Háttér

Az elhízás gazdasági terhe, ideértve a tárgyi és immateriális költségeket is, az előrejelzések szerint évente nőni fog [1]. Ezért az újszerű, biztonságos és hatékony természetes terápia kifejlesztése nagyon fontos az elhízás globális közegészségügyi válságának és az ezzel járó társbetegségeknek az enyhítése érdekében. Eddig csak kevés vényköteles gyógyszer áll rendelkezésre és hagyta jóvá az Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatóság (FDA) az elhízás kezelésére [10]. Az elhízás elleni gyógyszerek alkalmazása azonban csak kicsi és következetlen súlycsökkenést eredményez súlyos káros hatásokkal, beleértve a hasi fájdalmat, a széklet sürgetését és az inkontinenciát [11]. Alternatív megoldásként az étrendi beavatkozás, beleértve a növényi kivonat használatát, az elhízás és társbetegségei következetes csökkenését eredményezheti, kevesebb mellékhatással.

Garcinia mangostana vagy mangosztán néven sötétlila gyümölcs enyhén savas és édes ízű hússal. A gyümölcs általában az ázsiai régióban található, mint Malajzia, India és Thaiföld. A gyümölcsperikarpokat ősi idők óta hagyományosan használják különféle egészségügyi állapotok kezelésére, mint például hasi fájdalom, sebek és bőrfertőzés [12]. A mangosztán különböző részeiből számos bioaktív vegyületet izoláltak [13]. Köztük vannak xantonszármazékok, amelyek a pericarpus fő alkotóelemei. Széleskörű kutatásokat végeztek a mangosztán perikarpon, és sokféle tevékenységet mutattak be, beleértve a gombaellenes, antioxidáns, elhízás elleni és antidiabetikus szereket [14].

Mód

A növény azonosítása

A hivatalos formális azonosítása G. mangostana botanikus, Dr. Mohd Firdaus Ismail, a Malajziai Universiti Putra Biológiai Tudományok Intézetének Biológiai Sokféleség Egységéből vezette az utalványmintával szemben. Számú utalvány az SK 3283/18. A mintát a malajziai Universiti Putra Biológiai Tudományok Intézetének herbáriumába is letétbe helyezték.

Előkészítése G. mangostana hús

Érett G. mangostana sötétlila héjak és kellemes illat jellemezte [23]. A gyümölcsöket a helyi piacról, a malajziai Selangorból vásárolták. A gyümölcsöket vízzel öblítették, és a szívburokat eltávolították. A gyümölcs húsát -80 ° C-on tárolták és fagyasztva szárították a nedvességtartalom eltávolítása érdekében. Szárított G. mangostana húsát (GMF) finom porrá őrölték, és légmentesen lezárt edényben tartották 4 ° C-on. A kiegészítési időszak alatt a GMF-et naponta frissen készítették desztillált vízzel három koncentrációban (200 mg/kg, 400 mg/kg és 600 mg/kg) hígítva, mielőtt a kísérleti állatoknak beadták.

Kísérleti állatok

A kísérleti eljárásokat a Malajziai Egyetem Putra Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága (ACUC) által jóváhagyott etikai normák szerint hajtották végre (UPM/IACUC/AUP-R014/2014). Negyven hím Sprague Dawley patkányt (8-10 hetesek, súlya 250 ± 5 g) az A Sapphire Enterprise-tól (Malajzia) vásároltunk. A beszállító szerint minden patkány egészséges volt. A patkányokat egyenként egy normál ketrecben helyezték el az Universiti Putra Malaysia állattartóban, 28 ± 2 ° C-on szabályozott hőmérsékleten, 12 órás világos és sötét ciklus mellett. A hím patkányok egy része agresszív volt. Ezért külön-külön voltak elhelyezve, de ugyanabban a helyiségben, hogy biztosítsák a szaglási, hallási és vizuális érintkezést más patkányokkal, és így nem voltak teljesen izolálva. Az akklimatizálást egy hétig végeztük ad libitum víz és patkány-chow pellet adásával.

Elhízás kiváltása

A magas zsírtartalmú étrendet (HFD) a Levin és Dunn-Meynell által korábban közölt étrend-összetétel alapján adaptálták [13]. A HFD 68% normál patkány chow pelletből, 20% instant tejporból (Dutch Lady), 6% ghíből (Crispo) és 6% érmeolajból (Krystal) állt. Az elegyet homogenizáltuk és egy éjszakán át 65 ° C-on sütöttük. A HFD 414,0 kcal/100 g energiát biztosít 43% szénhidráttal, 17% fehérjével és 40% zsírral. Eközben a patkány-chow pellet 306,2 kcal/100 g energiát tartalmaz 75% szénhidráttal, 22% fehérjével és 3% zsírral.

Állatok csoportosítása

A patkányokat véletlenszerűen 5 csoportra osztottuk táplálékuk szerint: patkány-chow pellet (normál kontroll, NC; n = 8), HFD (elhízott kontroll, OC; n = 8), HFD + 200 mg/kg GMF (GMF 200; n = 8), HFD + 400 mg/kg GMF (GMF 400; n = 8) és HFD + 600 mg/kg GMF (GMF 600; n = 8). A megfelelő dózisok Adiputro és mtsai tanulmányán alapultak. [23]. A 10 hétig HFD-t kapott patkányok testtömege és testtömeg-indexe (BMI) szignifikánsan magasabb volt, és elhízottaknak sorolták őket [14]. GMF-kiegészítést 7 hétig adtak elhízott patkányokban a HFD megkezdése után a 10. héttől kezdve. Eközben az NC és az OC csoportok placebót, inaktív anyagot (desztillált vizet) kaptak erőszakos táplálással (szájon át történő szoptatással) 7 hétig a 10. héttől kezdve a normál étrend megkezdése után, illetve a HFD után, mivel a kezelés teljes térfogata kevesebb, mint 5 ml/kg. Az összes mérést, beleértve a testtömeget és egyéb kísérleteket, könnyű fázisban végeztük.

Ételbevitel, testtömeg és testtömeg-index (BMI)

A patkányok egészségi állapotának figyelemmel kíséréséhez napi táplálékfelvételt vettek. A 24 órán belül visszamaradt ételt elektromos mérleg segítségével lemértük, majd levontuk az eredeti élelmiszer-súlyról. A testtömeg mérését hetente rögzítették, míg a naso-anális hosszának (orr és végbél) mérését a 10. héten rögzítették a BMI meghatározásához. A BMI-t úgy számoltuk ki, hogy elosztottuk a testsúlyt (g) az naso-anális hosszával (cm2). A normál BMI felnőtt patkányokban 0,45 ± 0,02 g/cm 2 és 0,68 ± 0,05 g/cm 2 között mozgott [14].

Plazma biokémiai elemzés

Szövettani vizsgálat

A vizsgálat végén a patkányokat exanginációval eutanizálták. A májat és a vesét jéghideg, 0,95 NaCl-oldatokban mossuk, és 10% pufferelt formalint tartalmazó mintatartályban tartjuk. Miután rögzítették, a szöveteket paraffinba ágyazták, és festették a hematoxilint és az eozint (H&E). Végül tárgylemezeket készítettünk, és 20-szoros nagyításban figyeltük meg őket fénymikroszkóppal.

Statisztikai analízis

Valamennyi adatot elemeztük a Social Science szoftverhez tartozó Statisztikai csomag (SPSS 22. verzió) segítségével. Az adatokat átlag ± SEM-ben fejeztük ki. Összesen 5 csoportot elemeztek egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA). Mindegyik csoport nyolc patkányból áll, és a kísérleti egység egy-egy patkány volt. Az összes csoport adatait varianciavizsgálatnak vetettük alá Bartlett tesztjével. Azok a változók, amelyek normálisan nem voltak elosztva, a statisztikai elemzés előtt transzformálódtak (log 10 függvény segítségével). Amikor az interakció és/vagy a fő hatások szignifikánsak voltak, az átlagokat Newman-Keuls többszörös összehasonlító post hoc teszt alkalmazásával hasonlítottuk össze. Ahol a transzformációk nem eredményeztek normalitást vagy állandó varianciát, Kruskal-Wallis nemparametrikus tesztet hajtottak végre. Az adatokat statisztikailag szignifikánsnak tekintették a o

Eredmények

Étrendi bevitel és testtömeg

A GMF-kiegészítés táplálékfelvételre, testtömegre és BMI-re gyakorolt ​​hatását a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízott patkányokban az 1. táblázatban mutatjuk be. 10 hét HFD után az elhízott patkányok alacsonyabb táplálékfelvételt mutattak a normál kontroll patkányokhoz képest (o 1. táblázat A GMF-kiegészítés hatása az étrendi bevitelre, a testsúlyra és a BMI-re

A GMF kiegészítése elhízott patkányokban 7 hétig csökkentette a táplálékfelvételt az NC és OC csoportokhoz képest (1. táblázat). Az energiafogyasztás alacsonyabb volt a GMF-kiegészített patkányokban minden dózisnál (GMF 200, GMF 400 és GMF 600) az OC-csoporthoz képest, míg az NC-csoporté volt a legkevesebb energiafogyasztás (o 2. táblázat A GMF-kiegészítés hatása a plazma glükóz- és lipidprofiljára

Antioxidáns enzimek és teljes antioxidáns kapacitás

A 10 és 17 hétig tartó HFD-etetés csökkentette a GPx-szintet az NC patkányokhoz képest (o 3. táblázat A GMF-kiegészítés hatása a plazma antioxidáns enzimekre és a teljes antioxidáns állapotra

Gyulladásos markerek

Az NC patkányokkal összehasonlítva az OC csoportban megemelkedett a plazma TNF-α és IL-6 értéke 17 hét HFD után (o 0,05) (4. táblázat).

Szövettani vizsgálat

A májszövetek kórszövettani vizsgálata 17 hét HFD-etetés után megnagyobbodott hepatocitákat és zsírcseppek megjelenését mutatta OC patkányokban (1b. Ábra). Ezzel szemben az NC patkányok normális májsejteket mutattak ki, kevés zsírral és gyulladásos sejtek nélkül (1a. Ábra). A GMF 200 csoport kevesebb zsírsejt-felhalmozódást mutatott (1c. Ábra), míg a GMF 400 és a GMF 600 csoport normalizálta az OC-csoport hepatocyta-rendellenességeit (1d. És e. Ábra).

mangostana

A máj hisztopatológiája NC, OC és GMF-kiegészített patkányokban. A májszövetek haematoxilin- és eozinfestése megnagyobbodott hepatocitákat és zsírcseppeket („fd” jelöléssel) (× 20) és kitágult központi vénát („dc” jelöléssel) (× 20) mutat. CV, központi véna; a, normál vezérlés (NC); b, elhízott kontroll (OC); c, 200 mg G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 200); d, 400 G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 400); e, 600 G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 600)

A veseszövetek szövettani vizsgálata 17 hétig tartó HFD-etetés után a glomerulus dilatációját eredményezte az NC patkányokkal összehasonlítva (2a. És b. Ábra). A GMF-tel kiegészített patkányok minden dózisban normális veseműszerkezetet mutattak (2c., D. És e. Ábra).

A vese hisztopatológiája NC, OC és GMF-kiegészített patkányokban. Tágult glomerulust mutató vese szövetek haematoxilin- és eozinfestése („dg” jelöléssel) (× 20). G, Glomeruli Bowman-kapszulával; D, disztális tubulus; P, proximális tubulus; A, normál vezérlés (NC); B, elhízott kontroll (OC); C, 200 mg G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 200); D, 400 G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 400); E, 600 G. mangostana hús/testtömeg kg (GMF 600)

Vita

Elhízás esetén a hasi zsírszövetek megemelkedett szintje rengeteg szabad zsírsavat (FFA) termel a májba. Ezek a nem észterezett zsírsavak (NEFA) a trigliceridekben gazdag lipoprotein (TG) részecskék, például a nagyon kis sűrűségű lipoprotein (VLDL) túlzott termelését okozták. Következésképpen a máj, a vázizomzat és a szív lipotoxikus állapotnak volt kitéve, és az inzulinfüggő anyagcsere folyamat károsodását okozta [28]. A megnövekedett VLDL az aterogén LDL fokozott szintézisével jár. A nagy sűrűségű lipoprotein-koleszterin (HDL) megvédheti az érelmeszesedés kialakulását azáltal, hogy a koleszterin transzportja az érfalból vissza a májba, és csökkentheti a gyulladást azáltal, hogy megvédi az LDL-t az oxidációtól [29]. Az elhízásban azonban csökkent a HDL [30]. Ennek oka a lipolízis csökkenése és a trigliceridekben gazdag lipoprotein clearance akadályozása. Ezért ez az állapot hiperinsulinémiát, glükóz-intoleranciát és alacsony plazma HDL-szintet vált ki [31, 32].

Ezenkívül az elhízás a reaktív oxigénfajok túltermeléséhez vezet a növekvő mechanikai terhelés és a szívizom anyagcseréje miatt, ami végül megnöveli az oxigénfogyasztást. Ennek eredményeként az oxidáns és az antioxidáns egyensúlya megbomlik a biológiai rendszerben. Az endogén antioxidáns védekező rendszer csökken, mivel a rendszer az oxidánsok mellett áll [33]. Ennek eredményeként a lipidek, a fehérjék és a DNS sejtszerkezete károsodik. Ezen túlmenően, az elhízott embereknél az adipociták megnövekedése a makrofágok felesleges termelését okozza, amely egy moribundus adipocita, amely felelős gyulladásos citokinek, például indukálható nitrogén-monoxid-szintáz (iNOS) és interleukin-6 (IL-6) termeléséért [34]. . Beszámoltak arról, hogy az elhízott patkányok, akiket 10 hétig tápláltak magas zsírtartalmú étrenddel, csökkentették glutation-peroxidáz (GPx) és szuperoxid-diszmutáz (SOD) szintjüket [35]. Hasonlóképpen, a jelenlegi vizsgálat azt is kimutatta, hogy az elhízott patkányoknak csökkent a plazma GPx és SOD értéke az antioxidáns enzimek markereiként, valamint a plazma TNF-α és IL-6 szintje gyulladáscsökkentő markerként emelkedett. Ezért a HFD által kiváltott modellünk metabolikus és strukturális rendellenességeket mutatott, amelyek utánozzák az emberi elhízást.

A máj és a vese hisztopatológiai vizsgálata elhízott patkányokban hasonló eredményeket tárt fel, mint a korábbi kutatások, amelyekben a HFD-vel táplált patkányokban (30%) 8-12 hétig tágulást figyeltek meg a máj központi vénájában és a kapu vénájának ágaiban [36]. A megállapítás azt sugallja, hogy a HFD a máj steatosisának fő oka lehet. Ezenkívül a jelen vizsgálat eredményei összhangban vannak az előző vizsgálattal, jelezve, hogy azoknak a patkányoknak a veséje, amelyek 3 hónapig HFD-t kaptak, tágult ereket és Bowman-kapszulát, mononukleáris sejtek beszivárgását és degenerációt mutattak nephronokban [37]. Humán vizsgálatok emellett glomeruláris hipertrófiát és glomeruláris kapilláris dilatációt is kimutattak elhízott személyeknél [38]. Azt javasoljuk, hogy a glomerulus HFD utáni tágulása az elhízott patkányok metabolikus igényeinek növekedéséből fakadjon, ami ennek következtében glomeruláris hiperfiltrációhoz vezetne [39]. Ez a megállapítás széles körben alátámasztja ezen a területen végzett egyéb tanulmányok munkáját, amelyek összekapcsolják az elhízást és a glomeruláris méretet [40, 41], valamint az adipozitást és a glomeruláris hiperfiltrációt [42].

Következtetés

Ennek a vizsgálatnak az eredményei azt mutatják, hogy a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízott patkányokban a GMF kiegészítése csökkentette az elhízott patkányok testtömegét és gyengítette az anyagcsere és a szerkezeti változásokat a májban és a vesében. Ezért a GMF potenciálisan enyhítheti patkányokban a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízással kapcsolatos szövődményeket. Az eredmények azonban további kutatásokat indokolnak a farmakokinetikában és a farmakodinamikában, valamint a molekuláris megközelítést alkalmazó mögöttes mechanizmusban, különös tekintettel a GMF-ben található specifikus bioaktív vegyületek elhízásra gyakorolt ​​hatásaira. Továbbá elengedhetetlen meghatározni a GMF hasnyálmirigy lipáz aktivitására gyakorolt ​​hatását is, mivel aktivitásának gátlása csökkentheti a zsír felszívódását és jótékony hatással lehet az elhízásra.