Határok a farmakológiában

Transzlációs farmakológia

Ez a cikk a kutatási téma része

Metabolomika, farmakometabonómia és farmakológia Az összes 8 cikk megtekintése

Szerkesztette

Houkai Li

Sanghaji Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem, Kína

Felülvizsgálta

Jinjun Shan

Nanjing Kínai Orvostudományi Egyetem, Kína

Ke Lan

Szecsuáni Egyetem, Kína

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

Cikk letöltése
- PDF letöltése
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Kiegészítő
  Anyag
Exportálás
- EndNote
- Referencia menedzser
- Egyszerű TEXT fájl
- BibTex

OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

1 Gyógyszerészeti Iskola, Sanghaj Jiao Tong Egyetem, Sanghaj, Kína
2 Sanghaji kulcsfontosságú cukorbetegség-laboratórium és a Transzlációs Orvostudományi Központ, Sanghaji Jiao Tong Egyetem Társult Hatodik Népi Kórház, Sanghaj, Kína
3 University of Hawaii Cancer Center, Honolulu, HI, Egyesült Államok

Bevezetés

Az elhízás, mint a metabolikus szindróma kulcsfontosságú összetevője, szorosan összefügg a szív- és érrendszeri betegségek, a 2-es típusú cukorbetegség és még sokféle rák kialakulásának kockázatával (Kolotkin és mtsai, 2001; Ogden és mtsai, 2014). Az elhízás kialakulásában és fenntartásában számos lehetséges patofiziológiai mechanizmus létezik. Korábbi tanulmányok azt sugallták, hogy az elhízás szoros összefüggésben van az FFA-kkal, amelyek lipolízis útján adipocitákból származnak (Boden és Shulman, 2002; Boden, 2011). Nemrégiben csoportunk számos plazma FFA-t jelentett megbízható markerként az elhízott betegek jövőbeni metabolikus rendellenességeinek előrejelzésében, például dihomo-gamma-linolénsav (DGLA), sztearinsav/palmitinsav (SA/PA) arány, olajsav/sztearinsav sav (OA/SA) és arachidonsav/dihomo-γ-linolénsav (AA/DGLA) arány (Ni et al., 2015; Zhao et al., 2016, 2017).

Pu-erh tea, erjesztett fekete tea, amelynek fiatal levelei készültek Camellia sinensis, egyedülálló aromájáról és ízéről ismert. A bizonyítékok összegyűjtése azt mutatta, hogy a Pu-erh tea csökkentheti a testtömeget, elnyomhatja a hiperlipidémiát, alacsonyabb triglicerid-, összkoleszterin- és alacsony sűrűségű lipoprotein-koleszterinszintet, és növelheti a nagy sűrűségű lipoprotein-koleszterinszintet (Chu et al., 2011; Qiong és Xishuang, 2014; Cai és mtsai, 2017). A Pu-erh tea FA-anyagcserére gyakorolt specifikus hatását azonban vizsgálják, és feltételezzük, hogy mechanikus összefüggés van az FA-anyagcsere és a Pu-erh tea elhízás elleni hatása között. Így elvégeztük ezt a tanulmányt a Pu-erh tea elhízás és hipolipidémiás hatásának vizsgálatára egy kövér egér modellben, amelyet magas zsírtartalmú étrend (HFD) vált ki.

Különböző Pu-erh teatermékeket állítanak elő, amelyek különböző fermentációs eljárásokkal és/vagy különböző ültetvényhelyekről gyűjtött tea levelekkel készülnek. A fitokémiai komponensek a Pu-erh tea különböző termékeiben/tételeiben nagymértékben változhatnak. Ebben a tanulmányban kiválasztottunk egy azonnali Pu-erh teaterméket, amelyet jól bevált, szabványosított fermentációs és extrakciós eljárás alkalmazásával állítottunk elő, hogy a Pu-erh tea különböző tételei között állandó kémiai összetevőket tartsunk fenn, és reprodukálható eredményeket érjünk el. A vizsgálatunk során használt instant Pu-erh tea tartalmazta az érett Pu-erh tea legtöbb összetevőjét, és a Pu-erh teatermékek korábbi értékelése alapján homogénebb volt a teainfúzió adagolásának szabályozásában.

Anyagok és metódusok

Vegyszerek és reagensek

A kontroll étrend 10% lipidet, 19% fehérjét és 71% szénhidrátot tartalmazott, míg a HFD 45% lipidet, 19% fehérjét és 36% szénhidrátot tartalmazott (Trophic Animal Feed High-tech Co. Ltd., Nantong, Kína). A Pu-erh tea infúziókat úgy készítettük el, hogy 600 mg Pu-erh teaport (kereskedelmi termék, Deepure, a Tasly Pharmaceutical Co. Ltd.-től (Tianjin, Kína) szereltünk fel) 200 ml tiszta, sterilizált vízben oldottunk. Összesen 54 FFA-szabványt szereztek be a Sigma-Aldrich, a TRIzol Reagent (Invitrogen, Life Technology, Egyesült Államok), a Prime Script RT Reagent Kit (TAKARA, Kusatsu, Japán) és a Power Up SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, Egyesült Államok). A teaport vízzel, illetve metanollal extraháltuk, és az azonnali Pu-erh teában lévő domináns vegyületeket UPLC-QTOF-MS módszerrel elemeztük (1. kiegészítő ábra és 1. kiegészítő táblázat). A domináns vegyületek közé tartozik az L-arginin, az Epicatechin-gallát, a Gallocatechin-gallát, a Myricetin, a koffein és a teofillin, amelyet pozitív ion módban azonosítottak, valamint a gallinsav, a Catechin, az Epcatechin, a Gallocatechin, az Epigallocatechin, a Catechin-gallát, a Kaferferol, a Quercetin, a Quercetin-3.-O-Glu és Kaempferol-3-O-Negatív ion módban azonosított glu.

Állatvizsgálat és mintagyűjtés

Ezt a tanulmányt a Sanghaji Jiao Tong Egyetem, a Sanghaji Jiao Tong Egyetem kapcsolt hatodik népkórházának (Kína) nemzeti jogszabályainak és helyi irányelveinek megfelelően végezték el. A jegyzőkönyvet a Kínai Sanghaji Sanghaji Jiao Tong Egyetem Társult Hatodik Népi Kórház laboratóriumi állatok központjának intézményi állatgondozási és felhasználási bizottsága vizsgálta felül és hagyta jóvá.

A C57BL/6J egereket (hím, 3 hetesek) a Shanghai Laboratory Animal Co. Ltd.-től (SLAC, Sanghaj, Kína) vásároltuk. Az összes egeret specifikus kórokozóktól mentes (SPF) környezetben tartottuk, 12 órás fény/sötét ciklus ellenőrzött körülmények között, 20–22 ° C-on és 45 ± 5% páratartalom mellett. Az egereket kontroll chow-étrendhez igazítottuk ad libitum 1 héten át, majd véletlenszerűen három csoportra osztva: a kontroll csoport normál chow-t (kontroll étrend), HFD-t és HFD-t kapott Pu-erh tea infúziós csoporttal, napi 450 mg/kg dózisban (HFD + Pu-erh tea) . A Pu-erh tea infúziókat 3 mg/ml koncentrációra készítettük 600 mg teapor 200 ml tiszta, sterilizált vízzel történő feloldásával. Az összes egeret szabadon hozzáférhettük a kontroll chow/HFD és a víz/tea infúzióhoz, és testtömegüket hetente egyszer, 22 héten keresztül rögzítettük. E kísérletek végén az egereket egy éjszakán át éheztettük, mielőtt elpusztítottuk őket. A vérmintákat összegyűjtöttük, majd fél órán át szobahőmérsékleten tartottuk, majd 4 ° C-on, 5000 fordulat/perc mellett 10 percig centrifugáltuk, hogy megkapjuk a szérummintákat. A májat, a hasi zsírszövetet, a perirenális zsírt és a szubkután zsírt gondosan összegyűjtöttük, folyékony nitrogénben tartottuk, majd az elemzésig -80 ° C-on tároltuk.

Minta előkészületek és FFA elemzés

A szérum- és májszövetekben található FFA-t kivontuk és mennyiségileg meghatároztuk a korábban leírtak szerint (Zheng et al., 2016). Röviden, a mintákat lemérjük és izopropanol és foszfátot tartalmazó hexán keverékével homogenizálással és centrifugálással extraháljuk. A felülúszót összekevertük belső standarddal (nonadecilsav-D37), majd hexánnal és vízzel extraháltuk. Az elegyet ezután egy új csőbe helyeztük, vákuumban szárítottuk, majd metanollal helyettesítettük az UPLC-QTOF-MS műszeres analíziséhez (Waters Corp., Milford, MA, Egyesült Államok).

Az elemzés instrumentális paramétereit az alábbiak szerint állítottuk be. A mozgófázis víz (A) és acetonitril/izopropanol (v/v = 80/20, B). A vegyületek elválasztásához BEH C18 (2,1 mm × 100 mm, 1,7 μm) kromatográfiás oszlopot alkalmaztunk 0,4 ml/perc áramlási sebességgel és 40 ° C hőmérsékleten. Az elúciós gradiens 70% B (0–2 perc), 70–75% B (2–5 perc), 75–80% B (5–10 perc), 80–90% B (10–13 perc) volt, 90–99% B (13–16 perc), és 5 percig 99% B értéken tartották, mielőtt visszatértek a kezdeti állapotra. Az MS-t negatív elektrospray ion üzemmódban, 2,5 kV kapilláris feszültséggel, mintavételi kúpot 55 V, extrakciós kúpot 4 V, forrás forráshőmérsékletet 150 ° C és deszolvációs hőmérsékletet 450 ° C hőmérsékleten működtettük. A kalibrációs görbe elkészítéséhez egy standard kalibráló oldatot 54 FFA standarddal, 11 különböző koncentrációs szinten elemeztünk. A csúcsjelölést és a kvantálást a TargetLynx alkalmazáskezelő végezte (Waters Corp., Milford, MA, Egyesült Államok).

A máj metszetének szövettani festése

A májszöveteket 10% semleges pufferelt formalinban rögzítettük, paraffin blokkokba ágyazottuk, és a rutin H&E festés céljából feldolgoztuk. A festett szakaszokat ezt követően megvizsgálták hisztopatológiai változások szempontjából.

Biokémiai paraméterek és máj lipidek mérése

A szérum TC-t, TG-t, HDL-t és LDL-t TBA-40FR automatikus biokémiai analizátorral (TOSHIBA, Japán) mértük, a gyártó protokollja szerint. A máj lipidjeit Folch módszerrel extraháltuk. Röviden: a májszöveteket kloroform/metanol (2/1, v/v) oldattal homogenizáltuk a szövetminta 20-szorosának végső térfogatáig, majd diszperziós, keverési és centrifugálási lépéseket követtünk. A máj összes koleszterinszintjét (TC) és trigliceridjét (TG) Elisa készletek (BluGene Biotech, Shanghai, Kína) segítségével mértük a gyártó utasításainak megfelelően.

Orális glükóz tolerancia teszt (OGTT) és inzulin tolerancia teszt (ITT)

Az OGTT-t és az ITT-t 12, illetve 4 órás éhgyomorra végeztük. Körülbelül 1 g/kg glükózt adtak orális szondával az OGTT teszthez, és 0,75 egység/kg inzulint adtak intraperitoneális injekcióval. A vérmintákat 0, 15, 30, 60 és 120 perc múlva gyűjtöttük a farokvénából. Megmértük a vércukorszintet, és kiszámoltuk a görbe alatti területet (AUC) az OGTT és az ITT teszt során.

Valós idejű kvantitatív PCR

A májszöveteket homogenizáltuk, és a teljes RNS-t izoláltuk TRIzol Reagens alkalmazásával. A teljes RNS-koncentrációt NanoDrop 2000C spektrofotométerrel (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Egyesült Államok) mértük. A teljes RNS-t véletlenszerű hexamer-láncindítókkal fordítottuk át, így létrejöttek a cDNS-templátok, Prime Script RT Reagent Kit alkalmazásával. A kvantitatív, valós idejű PCR reakcióelegyet Power Up SYBR Green PCR Master Mix alkalmazásával állítottuk össze, és a reakciót egy ABI 7900HT valós idejű PCR rendszerben (Applied Biosystems Instruments, Thermo Fisher Scientific, Egyesült Államok) hajtottuk végre. Az összes eljárást a gyártó utasításainak betartásával hajtották végre. A GAPDH-t használták házmegőrző génként, és a célgének relatív expresszióját az összehasonlító Ct megközelítés (dCT) segítségével számolták ki, és végül a relatív expressziót használták a kontrollcsoporthoz viszonyított többszörös változásokként.

Statisztikai analízis

Az FFA mennyiségi meghatározásának nyers adatait a MassLynx v4.1 alkalmazásával nyertük, és a TargetLynx v4.1 elemzéssel elemeztük (Waters, Milford, MA, Egyesült Államok). A vizsgálat összes oszlopdiagramját a GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, Egyesült Államok), a differenciál analízist pedig Mann – Whitney segítségével készítettük. U A tesztet az SPSS 20.0 (IBM SPSS, Egyesült Államok) alkalmazásával végeztük, szignifikáns kritériumként a ∗-t határoztuk meg o-érték ∗ o ∗ o ∗ o ∗ o ∗ o Kulcsszavak: Pu-erh tea, szabad zsírsavak, lipidcsökkentő hatás, zsírsav-β-oxidáció, elhízás

Idézet: Huang F, Wang S, Zhao A, Zheng X, Zhang Y, Lei S, Ge K, Qu C, Zhao Q, Yan C és Jia W (2019) A Pu-erh tea magas zsírtartalmú egerekben szabályozza a zsírsav anyagcserét. Zsíros étrend. Elülső. Pharmacol. 10:63. doi: 10.3389/fphar.2019.00063

Beérkezett: 2018. november 28 .; Elfogadva: 2019. január 18 .;
Publikálva: 2019. február 05.

Houkai Li, Sanghaji Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem, Kína

Ke Lan, Szecsuán Egyetem, Kína
Jinjun Shan, Nanjing Kínai Orvostudományi Egyetem, Kína