A gluténmentes étrend klinikai és szerológiai hatása epileptoid görcsös szindrómás határterrierekben

Davies állatorvosi szakemberek, Hitchin, Egyesült Királyság

Levelező szerző: M. Lowrie, RCVS és az állatorvosi neurológia európai szakembere, Davies állatorvosi szakemberek, Manor Farm Business Park, Higham Gobion, Hitchin SG5 3HR, Egyesült Királyság; e-mail: [email protected]. Keresse meg a szerző további cikkeit

Klinikai Tudományok és Szolgáltatások Tanszék, Royal Veterinary College, Hatfield, Hertfordshire, Egyesült Királyság

Neurológiai Osztály, Royal Hallamshire Kórház, Sheffield, Egyesült Királyság

Farmakológiai Tanszék, UCL Gyógyszerészeti Iskola, London, Egyesült Királyság

Gasztroenterológiai Osztály, Royal Hallamshire Kórház, Sheffield, Egyesült Királyság

Powell Torrance Diagnostic Services, Higham Gobion, Egyesült Királyság

Davies állatorvosi szakemberek, Hitchin, Egyesült Királyság

Klinikai Tudományok és Szolgáltatások Tanszék, Royal Veterinary College, Hatfield, Hertfordshire, Egyesült Királyság

Neurológiai Osztály, Royal Hallamshire Kórház, Sheffield, Egyesült Királyság

Farmakológiai Tanszék, UCL Gyógyszerészeti Iskola, London, Egyesült Királyság

Gasztroenterológiai Osztály, Royal Hallamshire Kórház, Sheffield, Egyesült Királyság

Powell Torrance Diagnostic Services, Higham Gobion, Egyesült Királyság

Davies állatorvosi szakemberek, Hitchin, Egyesült Királyság

Absztrakt

Háttér

A kutyák epileptoid görcsös szindróma (CECS) a határterrierek (BT) paroxizmális mozgászavarai. Ezek a kutyák válaszolhatnak a gluténmentes étrendre.

Célkitűzések

A vizsgálat célja a gluténmentes étrend klinikai és szerológiai hatásának vizsgálata volt a CECS-ben szenvedő BT-kben.

Állatok

Hat kliens tulajdonú BT klinikailag igazolt CECS-szel.

Mód

Olyan kutyákat vettek fel prospektívan, akiknek a megfigyelt fenomenológia alapján (videó segítségével) legalább 6 hónapos CECS-kórtörténet volt, és különböző napokon legalább 2 különálló epizódot mutattak be. A kutyákon anti-transzglutamináz 2 (TG2 IgA) és anti-gliadin (AGA IgG) antitesteket vizsgáltak a szérumban bemutatáskor, valamint 3, 6 és 9 hónappal a gluténmentes étrend bevezetése után. A nyombél biopsziáját 1 kutyán végeztük.

Eredmények

A szérum TG2 IgA titer 6/6 BT-ben nőtt (P = .006) és az AGA IgG-titereket 5/6 BT-ben növelték bemutatáskor a kontrollokéhoz képest (P = .018). 9 hónap elteltével klinikai és szerológiai javulás volt tapasztalható minden BT-ben, akiknél a CECS szigorúan betartotta a gluténmentes étrendet (5/5). Egy kutya tartósan megnövekedett antitest-titerrel rendelkezik. Ez a kutya lótrágyát pergetett. A gluténmentes étrend szigorú bevezetésekor ennek a kutyának klinikai és szerológiai válasza is javult. Az étrenddel kapcsolatos javulás 2 kutyánál visszafordítható volt a vizsgálat befejezését követően, mindkettőnél a glutén újbóli bevezetése során a CECS visszaesett.

Következtetések

A kutyák epileptoid görcsös szindróma a BT-kben gluténérzékeny mozgászavar, amelyet a glutén vált ki és tart fenn, és így reagál a gluténmentes étrendre.

Rövidítések

A lisztérzékenység (CD) immunmediált enteropathia, amelyet genetikailag fogékony egyénekben vált ki glutén bevitele. 3 Ezt a kifejezést azonban a gluténérzékeny betegek számára kell fenntartani enteropátia; az intraepithelialis limfociták megnövekedett sűrűségű, kóros duodenális biopsziája és a villous atrophia jellemzi transzglutaminase-2 antitestek (a gliadint lebontó enzim elleni autoantitestek) jelenlétében a szérumban. 3 A nemrégiben megfogalmazott kifejezés, a nonceliaci gluténérzékenység (NCGS) az emberek egészségi állapotának spektrumát tartalmazza, amelyek mindegyikére jellemző a glutén bevitelére adott immunválasz, de változatos megnyilvánulásokkal 4, például enteropátiával 5 (a CD), dermatopathia (dermatitis herpetiformis) 6; és neurológiai rendellenességek, például glutén ataxia. Az NCGS neurológiai megnyilvánulásában szenvedő betegeknél a gliadin (a gluténérzékenységért felelős fehérje) elleni antitestek a legjobb diagnosztikai markerek. 8, 9

Első célunk a gluténmentes étrend terápiás hatásainak megállapítása volt a CECS-ben szenvedő BT-kben. Második célunk az volt, hogy szerológiai bizonyítékot szolgáltassunk arra, hogy összefüggés van a CECS és a lisztérzékenység között.

Anyagok és metódusok

Állatok

Szérum mintákat gyűjtöttek 6 BT-ből, a CECS klinikai diagnózisával 2012 márciusa és 2014 júliusa között mutatták be a Davies állatorvosi szakembereknek. A tulajdonosokat arra kérték, hogy írjanak alá egy informált beleegyező dokumentumot, mielőtt kutyájukat bevonják a vizsgálatba.

Az esetválasztás kritériumai

Minden kutyából készítettünk egy videót egy tipikus epizódról, amelyet a szerzők 2 értékeltek (ML, LSG). A kórtörténettel összefüggésben megfigyelt fenomenológia alapján a CECS diagnózisát felállították. Ez összhangban van egy korábbi tanulmány CECS diagnózisával. 2

A CECS kutyák orvosi nyilvántartásából nyert és rögzített információk a jelzést (életkor és nem) tartalmazták; kórtörténet (az epizódok első megjelenése, progressziója, gyakorisága és időtartama); a gyomor-bélrendszeri betegségre utaló jelek (különösen hányás, hasmenés, tartós borborygmi); és egyidejűleg fennálló egészségügyi állapotok. Azokat a kutyákat, akiknek a kórelőzményében gluténmentes étrendben részesültek a csatlakozás előtt, kizárták a vizsgálatból. Minden kutyának legalább 6 hónapos CECS-kórtörténettel kellett rendelkeznie, és legalább 2 különálló epizódot kellett bemutatniuk különböző napokon.

Minden kutyát teljes általános fizikai és neurológiai vizsgálatnak vetettek alá állatorvos-neurológus (ML, LSG). Az egyes kutyákra vonatkozó minimális adatbázis a következőkből állt: teljes vérsejtszám (CBC), szérum biokémiai profil, rutin vizeletvizsgálat és dinamikus epesavkoncentrációk. Kiválasztott kutyákon további vizsgálatokat végeztek, beleértve az agy mágneses rezonancia képalkotását (0,4T mágnes segítségével1) 1 Aperto állandó mágnes, Hitachi, Tokió, Japán
), a cerebrospinalis folyadék elemzése (a cerebellomedullaris ciszternából összegyűjtve) citológiai áttekintéssel és teljes fehérje-vizsgálattal, valamint gastroduodenoscopy, endoszkópos biopsziás minták gyűjtésével a gyomorból és a leszálló duodenumból, rugalmas endoszkópos biopsziás csipesszel.

Diétás próba

Ezután minden kutyát kizárólag gluténmentes táplálékkal etettek.2 2 hipoallergén kutyaszáraz, Royal Canin, Camargue, Franciaország
A résztvevőket arra utasították, hogy kutyájukat fokozatosan, 7 nap alatt váltsák át az új étrendre, az új táplálék arányának fokozatos növelésével. Utasításokat adtak arról is, hogy a választott étrendet kizárólag a csemegék vagy az ételmaradékok fogyasztásának elkerülésével, a kültéri szemetelés megakadályozásával és a háztartás más kutyáinak táplálékhoz való hozzáférésének megakadályozásával adják-e azáltal, hogy az egyes kutyákat külön etetik, és ha nem használják az ételtálakat . A vizsgálat során nem adtak más gyógyszert. Ez idő alatt a tulajdonosokat napló vezetésére és az esetleges epizódok rögzítésére kérték.

Utánkövetés

A gluténmentes étrend megkezdése után 3, 6 és 9 hónappal ismételt vizsgálatot rendeltek el, amelyben egy teljes általános fizikai és neurológiai vizsgálatot végeztek a CBC és a szérum biokémiai profil mellett.

Minta kollekció

Szérum mintát gyűjtöttünk bemutatáskor és 3., 6. és 9. hónapban minden kutyánál. Szérummintákat gyűjtöttünk olyan BT-kből is, akiknek a kórelőzményében nem volt CECS, és amelyek orvosi vizsgálatokat végeztek neurológiai vagy gyomor-bélrendszeri betegségektől független állapotok számára kontrollként. Az összes szérummintát a vizsgálatig -80 ° C-on tároltuk.

Szerológia

Valamennyi szérummintát kereskedelmi laboratórium felhasználásával megvizsgálták anticanine transglutaminase ‐ 2 ‐ IgA (TG2 IgA) autoantitestek és anticanine gliadin ‑ IgG (AGA IgG) antitestek szerológiai bizonyítékain. 3 ZEDIRA GmbH, Darmstadt, Németország
Ezeket a markereket azért választották ki, mert felhasználhatók az emberek gluténérzékenységének diagnosztikai markereiként. 3, 8, 9

A kutyaszövet, a transzglutamináz-2 elleni antitestek kimutatására az antigént mikrotiterlemezre vontuk. A lemez felületét szarvasmarha szérum albuminnal blokkoltuk, mielőtt kutya szérummal és kontroll mintákkal alkalmaztuk volna. A kutya TG2 elleni kötött antitesteket peroxidáz-konjugált szekunder antitesttel inkubálva detektáltuk kutya IgA ellen. Az utolsó lépésben a peroxidáz egy szubsztrátot (tetrametilbenzidint) kék termékké alakít, amely a stop oldat (0,5 M H2SO4) hozzáadásakor sárgára változik. A negatív kontrollértékeket puffer és konjugátum segítségével rögzítettük.

Az IgG antigliadin antitestek tekintetében az ELISA-ból származó gliadinnal bevont mikrotiter lemezt használtuk a Steffens Biotechnische Analysen gliadin elleni antitestjeinek (IgG) meghatározására.4 4 Steffens Biotechnische Analysen GmbH, Ebringen, Németország
A gliadin elleni kötött antitestek kimutatását a kutya IgG1 elleni peroxidázzal konjugált másodlagos antitesttel történő inkubálás útján kaptuk. A negatív kontrollértékeket puffer és konjugátum segítségével rögzítettük.

Statisztikai analízis

A CECS kutyák és a kontrollcsoport közötti összefüggések elemzését Mann – Whitney teszttel végeztük. A P-értéke 5 XLStats; Excel, Windows

Eredmények

Állatok

Összesen 6 BT-t vontak be ebbe a vizsgálatba. A BT-k átlagos életkora az epizód kezdetekor 2,6 év volt (medián 3 év; tartomány 1–4 év). Három BT nő volt (50%; 2/3 ivartalanított) és 3 férfi (50%; 3/3 ivartalanított).

Dyskinesia epizódok

A határterrierek a klinikai tüneteket átlagosan 1,4 éven keresztül mutatták (medián 1,5 év; tartomány 6 hónap – 2 év). Az átlagos epizód gyakorisága havonta 1 volt (medián 1 epizód 2 havonta; tartomány, 3 havonta 1 epizód, legfeljebb heti 1 epizód). Egy epizód átlagos időtartama 15 perc volt (medián 5 perc; tartomány 2–60 perc).

Egyidejű klinikai tünetek

2/6 BT-ben a tulajdonosok emésztőrendszeri betegségre utaló jelekről számoltak be. 1 kutyában ez magában foglalta a borborygmit és az alkalmi hányást. A másik kutyánál ezt gyakori puha székletként jelentették.

Vizsgálatok

Az általános fizikális vizsgálat, a neurológiai vizsgálat, a CBC, a szérum biokémiai profilja és a dinamikus epesavkoncentrációk nem mutattak ki semmilyen rendellenességet (n = 6). 4 kutyánál MRI-vizsgálatot végeztek gerincfolyadék-analízissel, normális eredményeket hozva. 1 kutyánál (1. kutya) gyomor-bélrendszeri megbetegedésre utaló tünetekkel (borborygmi és alkalmi hányás) a gyomor és a nyombél endoszkópos biopsziáinak gyomor-bélrendszeri vizsgálata nem mutatott rendellenességeket.

Válasz

Három BT-nek (1., 4. és 5. kutya) nem volt további CECS-epizódja az étrendi vizsgálat megkezdése után. Két BT-nek (2. és 3. kutya) 1, illetve 2 epizódja volt a vizsgálat megkezdésétől számított 4 héten belül, de később nem tapasztaltak további epizódokat. A végső kutyának (6. kutya) a vizsgálati időszak alatt továbbra is voltak epizódjai.

Antitest Titerek

Az anti-gliadin antitestek (AGA IgG) szintén szignifikánsan megnőttek (medián 0,398; tartomány: 0,175–0,641) a bemutatott kontroll kutyákhoz képest (medián 0,121; 0,092–0,162; P = .018), de a növekedés mértéke nem volt olyan, hogy klinikai jelentőségű lenne. A puffer és a konjugált negatív kontrollértékek 0,096, illetve 0,105 voltak. A titrák azonban csökkentették a gluténmentes étrend bevezetését mind az öt kutyánál, akik klinikailag reagáltak, és végül a hatodik kutyára, miután a tulajdonos megfelelt a gluténmentes étrendnek (2. ábra).

Vita

Ezek a vizsgálatok alátámasztják azt a hipotézist, miszerint a CECS a lisztérzékenység megnyilvánulása, ez az állatgyógyászatban ez az első paroxizmális mozgászavar, amely szerológiai kapcsolatban áll a gluténnel.

A glutén mind a gliadint, mind a glutenin fehérjéket tartalmazza, és bizonyíték arra utal, hogy a gliadin frakció betegséget vált ki. 10 A Gliadin egyedülálló fehérje, mivel nagyszámú glutamin-maradékot tartalmaz. A szöveti transzglutamináz egy olyan enzim, amely egyéb funkciói mellett katalizálja a glutamin-maradékok glutaminsavvá történő deamidálódását. 11 Ez a folyamat új epitópok létrehozását eredményezheti, amelyek kulcsfontosságú szerepet játszhatnak a gluténérzékenység immunopatogenezisében. 12 Jelenleg a transzglutamináz aktivitás és a gluténérzékenység között ok-okozati összefüggést még nem állapítottak meg, bár a hipotézist alátámasztó bizonyítékok erősek. 13.

Az elmúlt években a CD nézete alapos felülvizsgálaton ment keresztül. Az első arra utaló jel, hogy a glutén bélen kívüli tüneteket okozhat, egy olyan tanulmányból származott, amely gluténfüggő bőrkiütést (dermatitis herpetiformis néven ismert) írt le, amely a bél érintettségének szövettani bizonyítéka nélkül is előfordulhat. A szövettanilag igazolt CD-ben szenvedő betegeknél neurológiai tünetek jelentkeznek. 14 Az NCGS neurológiai megnyilvánulásainak felismerése azóta nőtt, a leggyakoribb a glutén ataxia 7 és a perifériás neuropathia. 15 A chorea, 16 merev személy szindróma, 17 roham, 18 és a myoclonic ataxia 19 nemrégiben leírt klinikai entitása jelei azonban kevésbé gyakoriak. A gluténmentes étrendre válaszoló 10 éves lány PNKD-jének feltételezett kapcsolatait nem támasztották alá szerológiai vizsgálatok. 20

A glutén és a CECS társulása magyarázatot adhat arra, hogy a CECS-ben szenvedő kutyák egy része miért mutat gyomor-bélrendszeri betegség jeleit. 2 Glutén ataxiában 23 A jelen vizsgálatban a borborygmi és alkalmi hányás egyik kutyájának nem volt szövettani bizonyítéka az enteritisre. A gasztrointesztinális betegségre utaló jelekkel rendelkező második kutya gazdája nem járult hozzá endoszkópos vizsgálathoz. További vizsgálatokra van szükség a krónikus enteropathia előfordulásának és természetének felmérésére a BT-ben CECS-sel annak megállapítása érdekében, hogy ezeknek a kutyáknak van-e neurológiai megnyilvánulása a CD-ben vagy az NCGS-ben.

A nem specifikus hatások kizárása érdekében rekombináns kutya TG2 antigént kell hozzáadni a mintákhoz, mielőtt azokat ELISA-ban tesztelnék. A kutya anti-TG2 antitestek mérését azonban korábban elvégezték a gyulladásos meningoencephalitisben szenvedő kutyák cerebrospinalis folyadékában, amelyben az ELISA ellenőrzését sikeresen elvégezték. A szérum mérését korábban nem végezték el.

A tanulmányban bemutatott bizonyíték a gluténra reagáló CECS létezésére az anti-gliadin és a TG2 antitestek jelenléte több szérummintában, valamint a gluténmentes étrend klinikai és szerológiai válasza. Ezenkívül a gluténdiéta újbóli bevezetése 2 kutyánál a CECS visszaesését eredményezte. Nagyobb kutyaszámra lesz azonban szükség ezen megfigyelések klinikai fontosságának és hasznosságának megállapításához.

Tanulmányunk megtervezése összefüggésbe hozható az elfogultsággal - például a tulajdonosok nagyobb valószínűséggel hagyják abba az étrendet, ha nem látják azonnali javulást a jelekben. Hangsúlyoztuk azonban a tulajdonosoknak, hogy az étrend javítása - ha egyáltalán - valószínűleg lassú és több hónapig is eltarthat. Az elfogultság további forrása az volt, hogy 1 kutató elvégezte az összes klinikai értékelést, és nem volt vak a kutyák kezelési állapotára nézve. Ezenkívül a tulajdonosok képesek voltak csökkenteni az uszító okoknak, például az izgalomnak való kitettséget egy állatorvos-neurológus tanácsát követően, amely részben megmagyarázhatja az étrend felbujtását követő epizódok csökkenését. Kettős-vak, randomizált, placebo-kontrollos vizsgálatra van szükség ezen korlátok némelyikének leküzdéséhez. Ezenkívül a jövőbeni vizsgálatok igazolni fogják ezen eredmények klinikai hasznosságát a kutyák TG2 antigénjének hozzáadásával a mintákhoz, mielőtt azokat ELISA-ban tesztelnék, a nem specifikus hatások kizárása érdekében.

Következtetések

Az anti-transzglutamináz-2 és anti-gliadin antitestek szerológiai vizsgálata hasznos diagnosztikai eszközt jelenthet a CECS számára és az étrend betartásának ellenőrzésére, különösen azoknál a kutyáknál, akik nem tartják be a gluténmentes étrendet. A diszkinéziát mutató BT-knél fontolóra kell venni a gluténérzékenység meghatározását és a gluténmentes étrendre való váltást.

Köszönetnyilvánítás

Összeférhetetlenségi nyilatkozat: A cikk egyik szerzője sem rendelkezik pénzügyi vagy személyes kapcsolatban más emberekkel vagy szervezetekkel, amelyek nem megfelelően befolyásolhatják vagy elfogulhatják a cikk tartalmát.

Off-label antimikrobiális nyilatkozat: A szerzők kijelentik, hogy az antimikrobiális szereket nem engedélyezték.