A Solanum xanthocarpum gyümölcs kivonat antiurolitiatikus hatása az etilén-glikol által kiváltott nephrolithiasisra patkányokban

PK Patel

Farmakológiai Tanszék, C. K. Pithawalla Gyógyszertudományi és Kutató Intézet, Surat-Dumas Road, Surat, Gujarat, India

MA Patel

Farmakológiai Tanszék, C. K. Pithawalla Gyógyszertudományi és Kutató Intézet, Surat-Dumas Road, Surat, Gujarat, India

MG Saralai

Farmakológiai Tanszék, C. K. Pithawalla Gyógyszertudományi és Kutató Intézet, Surat-Dumas Road, Surat, Gujarat, India

TR Gandhi

1 Farmakológiai Tanszék, Anand Pharmacy College, Anand, Gujarat, India

Absztrakt

BEVEZETÉS

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Növényi anyag és a kivonat elkészítése

A S. xanthocarpum gyümölcsöket Suratból (Gujarat) gyűjtötték 2008. április – május hónapban; a botanikus azonosította és hitelesítette az indiai Surat-i Veer Narmad South Gujarat University. A növény utalványmintáját letétbe helyezték a herbáriumban (PKP/10102008/01). A gyümölcsök árnyékban szárítottak és durva porra őrölték. A port Soxhlet-oszlopba csomagolva metanollal extraháltuk 70–75 ° C-on 24 órán át. Az extrakciós eljárást megismételtük, az egyesített kivonatot 45 ° C-on, vákuumban bepároltuk, és légmentesen lezárt tartályban tároltuk. A kivonat 13,66 tömeg% vörösesbarna száraz por volt. A port minőségileg elemeztük különféle fitokémiai alkotóelemek jelenléte szempontjából. [3]

Metanol meghatározása az extraktumban

Az extrakciót metanol alkalmazásával hajtottuk végre, amely az Egyesült Államok Gyógyszerkönyv (USP) szerint a 2. osztályba tartozó maradék oldószer. Ezért a metanoltartalmat az USP szerint határoztuk meg gázkromatográfiával (Shimandzu Gas ChromatographGC-2014 with Headspace Auto sampler HT), és a metanoltartalom minimális permeabilitási határértéke a kalkulus indukciós kezelés napja. A térfogat, a pH és a kristályuria meghatározása után a vizeletet egy csepp koncentrált sósavval megsavanyítottuk és -20 ° C-on tároltuk a különböző paraméterek meghatározása céljából. A vizeletben kalciumot, [21] oxalátot, [22] magnéziumot, [23] foszfátot, [24] húgysavat, [25] és citrátot vizsgáltak.

Szérumelemzés

A kísérleti periódus után a vért a könnyű orbitalról könnyű éteres érzéstelenítésben vették fel, és az állatokat a méhnyak lefejezésével leölték. [27] A szérumot 10 000 × g-vel 10 percig végzett centrifugálással elválasztottuk, és diagnosztikai készletekkel (Span Diagnostics Ltd., India) elemeztük a kreatinin, húgysav, karbamid és a vér karbamid-nitrogénjét (BUN).

Vese hisztopatológia és homogenátum elemzés

A hasat bemetszették és kinyitották, majd mindkét állatból mindkét vesét eltávolították; Az izolált veséket megtisztítottuk az idegen szövetektől, majd megmértük és jéghideg normál sóoldattal öblítettük. A bal vesét 10 térfogatszázalékos semleges formalinnal rögzítettük, és osztályoztuk alkoholos sorozatokon és xilolon keresztül, paraffinba ágyazva, 5 μm-nél metszettük, és hematoxilinnel és eozinnal festettük a szövettani vizsgálathoz fénymikroszkóp alatt.

A jobb vesét apróra vágjuk, és 20% homogenizátumot készítünk Tris-HCl pufferben (pH 7,4). A teljes vese homogenátumot használtuk szöveti kalcium és oxalát, [22] malondialdehid (MDA), szuperoxid-diszmutáz (SOD), kataláz és redukált glutation (GSH) meghatározására, kereskedelemben kapható készletekkel mérve (Span Diagnostics Ltd., India).

Statisztikai analízis

A CaOX kristályok fénymikroszkóppal nézve vizeletben az (a) vivőanyag kontrollcsoportból, (b) a kalkulus indukáló csoportból, (c) Cystone (750 mg/kg) és a Solanum xanthocarpum gyümölcs kivonatot kapó csoportból (d) 100 mg/kg, e) 200 mg/kg és f) 400 mg/kg (450 × nagyítás minden képnél)

Asztal 1

A Solanum xanthocarpum gyümölcs metanol-kivonatának hatása a vizeletre és a szérum paraméterei urolithiasis által kiváltott patkányokban

A vese súlya szignifikánsan volt (P 2. táblázat). A kristályos komponensek, például a kalcium és az oxalát szignifikánsan megnőttek a kőképző patkányokban a kontrollhoz képest (P 2. táblázat].

2. táblázat

A Solanum xanthocarpum gyümölcs metanol-kivonatának hatása a veseparaméterekre urolithiasis által kiváltott patkányokban

A vese hisztopatológiai vizsgálata során kiderült a normál glomerulusok és a tubuláris régió, kalcium-oxalát (CaOX) kristályok hiányában, a vivőanyag-kontroll állatokban [ábra: 2a. És 2b. Ábra]. 2b]. Míg a kőképző csoportban súlyos glomerulusok károsodása, vörösvértestek lerakódása, amely hematuriához vezet, számos és nagy méretű CaOX kristály lerakódás a vesetubulusban, valamint a proximális tubulusok dilatációja intersticiális gyulladással figyelhető meg a veseszövetben [ábra [2.c ábra] 2c és and2d]. 2d]. A CYSTONE és SXME kezelés csökkentette a glomerulus károsodását, kevesebb volt a vörösvértestek felhalmozódása, kevesebb szám és kisebb méretű CaOX kristályos lerakódás volt, fragmentációval dózistól függően, a kalkulus által kiváltott csoporthoz képest [ábra [2e. 2e. És and2f., 2f., 3. ábra] ].

Fénymikroszkópos szövettan és CaOX-lerakódások a vesében. Az (a, b) vivőanyag-kontroll, (c, d) urolit és (e, f) cisztonnal kezelt vese szakasz (750 mg/kg). (a: glomerulus régió és b: tubuláris régió) (450 × nagyítás az összes képnél)

Fénymikroszkópos szövettan és CaOX lerakódások a vese szakaszban. A kezelt Solanum xanthocarpumfruit kivonat vese szakasza (a, b) 100 mg/kg, (c, d) 200 mg/kg és (e, f) 400 mg/kg (a: glomerulus régió és b: tubuláris régió) (nagyítás 450 × az összes képhez)

VITA

A táplálkozó etilén-glikolban a kőképződést hiperoxaluria okozza, amely fokozott veseretenciót és oxalát kiválasztást okoz. [19,20] A patkány modellben gyakran használják a vese CaOX lerakódását 0,75% v/v etilén-glikol 28 napig 28 napon keresztül. hogy utánozzák az emberek vizeletkő-képződését. [19]

Ebben a vizsgálatban a kalcium és az oxalát kiválasztása fokozatosan növekszik a fogkő által kiváltott állatokban. Beszámoltak arról, hogy az oxalátok fontos szerepet játszanak a kőképződésben, és körülbelül 15-szer nagyobb hatást gyakorolnak, mint a vizelet kalciumja. A vizelet oxalátszintjének változásai viszonylag sokkal fontosabbak, mint a kalciumé. [33] A megnövekedett vizelet kalcium kedvező tényező a CaOX vizeletből történő magképződésében és a további kristálynövekedésben. Az SXME kezelés során dózisfüggő módon figyelték meg a kalcium és az oxalát kiválasztásának csökkenését. Ez az oxalátok csökkent kiválasztódása annak tudható be, hogy a növényi kivonat gátolja az oxalátok képződését.

A vizelet foszfor kiválasztásának növekedését figyelték meg az EG-indukálta urolitikus patkányokban. A foszfor fokozott kiválasztódását figyelték meg a kőképzőkben. [34] A megnövekedett vizelet-foszfor kiválasztás és az oxalát-stressz úgy tűnik, hogy a kőfejlődéshez megfelelő környezetet biztosít kalcium-foszfát kristályok képződésével, amelyek epitaxiailag indukálják a CaOX-lerakódást. kőképződés.

A húgysav fokozott kiválasztódásáról beszámoltak kőképzőknél és hiperoxalurikus patkányoknál. A húgysav zavarja a CaOX oldhatóságát, megköti és csökkenti a glikozaminoglikánok gátló aktivitását. [19] A húgysav túlsúlya a CaOX-kövekben, valamint az a megfigyelés, hogy a húgysavkötő fehérjék képesek kötődni a CaOX-hoz és modulálják annak kristályosodását, szintén arra utal, hogy elsődleges szerepe van a kőképződésben. [35] A gyógyszeres kezelés csökkenti a húgysavszintet a normális szint közelében, ezzel csökkentve a kőképződés kockázatát.

A normál vizelet számos szervetlen és szerves kristályosítót tartalmaz, a magnézium és a citrát ilyen jól ismert inhibitor. Alacsony magnézium- és citráttartalommal a kőképzőkben, valamint a kőképző patkányokban is találkozni lehet [20]. Ígéretes eredményeket mutattak ki a kiújulás megelőzésében a kálium-magnézium-citráttal kezelt betegeknél. A magnézium csökkentheti a CaOX túltelítettségét a CaOX telítettségének csökkentésével. Megállapították, hogy a magnézium csökkenti a CaOX kristályok növekedését és nukleációs sebességét. [36] A citrát az urolithiasis fontos gátlója, amely oldható komplexeket képez a kalciummal, és gátolja a CaOX és a foszfát kicsapódását, valamint kristályaik növekedését. [37] A vizelet magnézium- és citráttartalma jelentősen csökkent az etilén-glikol által kiváltott urolit patkányokban. Az SXME kezelés helyreállította a magnézium és a citrát kiválasztását, és így csökkenti a CaOX kristályok növekedését a IV – VI. Csoportokban.

Az urolithiasisban a glomeruláris szűrési sebesség csökken, mivel a vizeletrendszer kövei akadályozzák a vizelet áramlását. Emiatt a salakanyagok, különösen a nitrogén tartalmú anyagok, például a karbamid, a kreatinin, a BUN és a húgysav felhalmozódnak a vérben. [32] A fogkő által kiváltott patkányokban jelentős vesekárosodást tapasztaltak, amit a glomeruláris és tubuláris károsodás markereinek számító kreatinin, karbamid, BUN és húgysav emelkedett szérumszintje jelez. Az SXME-kezelés megmutatta, hogy megakadályozza ezen markerek szérumszintjének emelkedését a glomeruláris szűrés javításával, mivel ez diuresist okoz.

A szöveti sérülés kialakulása valószínűleg a reaktív oxigénfajok (ROS) képződése és a szövet antioxidáns védekező mechanizmusa közötti egyensúlytól függ. Csökkent szöveti antioxidáns enzimek követhetők a szabadgyökök termelésének fokozása érdekében a nephrolithiasis korai szakaszában és későbbi szakaszaiban, ami oxidatív stressz alá helyezheti a veseszövetet. Ezt a hipotézist megerősíti az a jelentés, miszerint a vesekőben szenvedő betegeknél kevesebb az antioxidáns enzim aktivitása, fokozott lipidperoxidációval. [38] Az oxidatív károsodás, amelyet az oxidatív károsodás markereinek magasabb MDA-szintje és az antioxidáns enzimek, például a SOD, a kataláz és a GSH szintjének csökkenése tükröz a vesében, valamint romlik a vesefunkciók óta, mivel a kalkulusok által kiváltott patkányoknál megfigyelhető. Az SXME-kezelés csökkenti az MDA szintet és növeli az antioxidáns enzimek aktivitását, és a GSH szintje azt jelzi, hogy védett az oxidatív stressz okozta szövetkárosodás ellen.

Az etilén-glikol által kiváltott urolitikus patkányokból származó vese metszetek mikroszkópos vizsgálata polimorf rendszertelen kristálylerakódást mutatott a tubulusokban, amelyek a proximális tubulusok dilatációját okozzák, interstitialis gyulladással és súlyos glomerulus károsodással, valamint a vörösvérsejtek lerakódásával jelzett hematuriával. oxalát. Az SXME-vel történő együttes kezelés csökkentette a CaOX lerakódások számát és nagyságát a veseszövet különböző részein, és megakadályozta az EG okozta károsodásokat. Ezenkívül az EG beadása gyulladásos állapotot és kristályos komponensek lerakódását idézi elő a vesében, ami a vese tömegének növekedéséhez vezet. Az SXME egyidejű alkalmazása csökkenti a vese súlyát a gyulladás csökkentésével és a kristályos komponensek kiválasztásának fokozásával.

Az eredmények megmutatták az S. xanthocarpum gyümölcsök nephroprotektív hatásait az etilén-glikol által kiváltott urolithiasis modellben. Javasoljuk, hogy a hatások lehetnek a kő-promoterek és inhibitorok egyensúlyának fenntartása, a CaOX apró részecskék lerakódásának és kiválasztásának csökkentése a veséből, az antioxidáns környezet fenntartása és a húgyutakban való visszatartásuk esélyének csökkentése. Számos gyógynövénykivonat és ezek izolált alkotóelemei szintén védőhatást mutattak a vesekő képződése ellen. [19,32]

A szaponinok, alkaloidok, fitoszterolok stb. Az S. xanthocarpum gyümölcseiben jelen lévő fő fitokomponensek. A szaponin-származékok számos állítólagos antiurolithiatikus tulajdonságú gyógynövény részeként jelentek meg. [39] A fitoszterolok gyulladáscsökkentő és antioxidáns tulajdonságokkal is rendelkeztek. [40]

KÖVETKEZTETÉS

Az eredmény azt jelzi, hogy az S. xanthocarpum gyümölcs metanolos kivonatának etilén-glikol által kiváltott urolithiasisban történő adagolása patkányoknak diurézissel, antioxidáns aktivitással csökkentette és megakadályozta a vizeletbeli kövek szaporodását, és fenntartotta az egyensúlyt a kő promoterek és inhibitorok alkotóelemei között. Ez a tanulmány a S. xanthocarpum antiurolithiatikus aktivitásával kapcsolatos folklórinformációkat támasztja alá.