Apoptotikus endothel sejtekből származó mikro vezikulumok mintázata krónikus szívelégtelenség különböző fenotípusú betegeknél

1 a Zaporozhje Állami Orvostudományi Egyetem Belgyógyászati Tanszékének terápiás egységének tanácsadója, 26, Majakovszkij av., Zaporozje, UA-69035, Ukrajna

2 Klinikai Farmakológiai Tanszék, Állami Orvostudományi Egyetem, Zaporozhye, Ukrajna

3 „Vita-center” magánorvosi központ, Zaporozhye, Ukrajna

Absztrakt

Kulcsszavak

Krónikus szívelégtelenség, biomarkerek, endothel sejtekből származó mikrovezikulák

Rövidítések

ACEI: angiotenzin-konvertáló enzim inhibitorok; ARB-k: angiotenzin-receptor blokkolók; AUC: görbe alatti terület; BMI: Testtömeg-index; BNP: Agy-natriuretikus peptid; CV: szív- és érrendszeri; GDF-15: növekedési-differenciál-faktor-15; GFR: glomeruláris szűrési sebesség; HDL-C: nagy sűrűségű lipoprotein koleszterin; HF: szívelégtelenség; HFmrEF: Krónikus Hf, középtávú kidobási frakcióval; HFpEF: Krónikus HF megőrzött ejekciós frakcióval; HFrEF: Krónikus HF csökkentett ejekciós frakcióval; hs-CRP: nagy érzékenységű C-reaktív fehérje; LDL-C: alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterin; LVEF: bal kamrai ejekciós frakció; Képviselők: Endoteliális sejtekből származó mikrovezikulák; MV-k: Mikro vezikulák

Bevezetés

Mód

Vizsgálati populáció

A vizsgálati kohorsz 388 krónikus HF-ben szenvedő alanyból állt, akik prospektív módon érintettek voltak 2010. április és 2017. október között. Mindezeket a betegeket a Zaporozhye Regionális Kórházban, a 6. számú városi kórházban (Zaporozje), a 10. számú városi kórházban, a Zaporozhye Regionális Kardiovaszkuláris Centrumban. elsődleges diagnózissal krónikus HF, amelyet a tényleges klinikai ajánlás korabeli kritériumai szerint határoztak meg [1]. A krónikus HF fenotípusait ennek az ajánlásnak megfelelően határoztuk meg, mint HF csökkentett ejekciós frakcióval [HFrEF] (n = 85; LVEF ≤ 40%), HF közepes tartományú ejekciós frakcióval [HFmrEF] (n = 125; LVEF = 41-49 %) és a HF tartósított ejekciós frakcióval [HFpEF] (n = 178; LVEF ≥ 50%). A vizsgálatba való be nem vonás kritériumai a becsült Glomerular Filtration Rate (GFR) 2 voltak; beültetett pacemaker/defibrillátor/kardioverter; akut fertőzések; aktív gyulladás; szívbillentyű-betegség; terhesség; iszkémiás stroke; koponyaűri vérzés; sebészet; trauma, autoimmun betegség és rosszindulatú daganat a tanulmányba való belépés előtt.

A T2DM-t az American Diabetes Association által felülvizsgált kritériumok alapján diagnosztizálták, amikor a forrásdokumentumokat áttekintették [20]. A T2DM-ben szenvedő betegeket metforminnal kezeltük, egyénileg beállított napi dózisokban, az éhomi glikémia, a glükózkoncentráció és a glikált hemoglobinszint (HbAc1) napi profilja mellett. Ritkán szitagliptint adtak a kezelési sémához. A vizsgálatban nem választottak inzulint adva T2DM-ben szenvedő betegeket.

Demográfiai adatok és antropometriai mérések

Az életkor, a nem, a magasság, a súly, a testtömeg, a testtömeg-index, a derék kerülete és a derék/haj arány a korábbi orvosi és gyógyszeres előzmények alapján összegyűjtésre került. Az antropometriai adatokat professzionális egészségügyi kísérők mérték, a résztvevők cipő és nehéz felsőruházat nélkül álltak, falra szerelt stadiométerrel (OMRON, Japán). A testtömeg-indexet (BMI) a személyzet kiszámította a tömeg (Kg) osztva a magasság négyzetével (m 2). A derék és a csípő kerületét protokollonként álló helyzetben mértük [22,23].

A dohányzás állapota

A jelenlegi dohányzást úgy határozták meg, hogy három hónapon keresztül napi egy cigarettát fogyasztottak [24].

Szív ultrahang és doppler

A transtoracalis echokardiográfiát ACUSON ultrahang rendszeren (SIEMENS, Németország) végeztük В-módú és Tissue Doppler Imaging (TDI) sémában. A bal kamrai ejekciós frakciót (LVEF) módosított Simpson-módszerrel mértük [25].

Glomeruláris szűrési sebesség mérése

Vérvétel

Vérmintákat vettünk reggel egy éjszakai éhgyomorra (7-8 órakor) vonalkódolt szilikon kémcsövekbe (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), amelyekhez 2 ml 5% -os Trilon B oldatot adtunk. Ezután a mintákat állandó hűtés mellett 6000 fordulat/perc sebességgel 3 percig centrifugáltuk, majd a plazmát összegyűjtöttük, és azonnal hűtőszekrénybe helyeztük. Minden alikvot részt 70 ° C hőmérsékleten tároltunk.

Az N-terminális pro-agy natriuretikus peptid (NT-pro-BNP) szintjét immunoelektrokemolumineszcens vizsgálattal mértük, az R és D Systems (USA) elemeivel, Elecsys 1010 analizátoron (Roche, Mannheim, Németország). A galektin-3-at ELISA kit segítségével (BG Medicine, Németország) mértük, és Elecsys 1010 analizátorral (Roche, Mannheim, Németország) nyertük. Az oldható ST2-t kereskedelmi ELISA kit ”Presage ST2 Assay” (Critical Diagnostics, San Diego, USA) segítségével mértük a gyártók ajánlásai szerint. A növekedési-differenciál-faktort 15 (GDF-15) ELISA kit (LifeSpan BioSciences, USA) segítségével határoztuk meg Elecsys 1010 analizátoron (Roche, Mannheim, Németország). A nagy érzékenységű C-reaktív fehérje (C-RP) szintjét nefelometriás technikával mértük egy kereskedelmi készlettel (Eagle Biosciences, Nashua, NH, USA), és az „AU640 Analyzer” készülékkel (Olympus Diagnostic Systems Group, Japán) nyertük. Nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás eljárást alkalmaztunk a hemoglobin A1c (HbA1c) meghatározására 5% -os Trilon B antikoagulált vérmintákban.

Az összes koleszterin (TC), a nagy sűrűségű lipoproteinek (HDL-C), az alacsony sűrűségű lipoproteinek (LDL-C) és a trigliceridek (TG) koncentrációját direkt enzimatikus módszerrel mértük kereskedelmi készletekkel (DIALAB, Neudorf, Ausztria) ) Roche P800 automatikus analizátorral (F Hoffmann-La Roche AG, Bázel, Svájc).

Vérkészítés, címkézés és az endothel sejtekben levő mikrohólyagok mérése

A keringő mikrovezikulákat (MV) 5 ml vénás citrált vérből izoláltuk, amelyet a fistula nélküli karból vettünk le, protokoll szerint, amelyet korábban leírtunk [27]. Áramlási citometriás technikát alkalmaztunk High-Definition Fluorescence Activated Cell Sorter módszertan szerint az MV-k szubpopulációinak címkézésére és jellemzésére fagyás nélküli vérvétel után [28].

1.ábra: Az MV-k szubpopulációinak címkézése és jellemzése: Áramlási citometriás technika nagyfelbontású fluoreszcenciával aktivált sejtrendező módszertan szerint.

Statisztikai analízis

Az adatokat SPSS 20.0 (SPSS, IBM Corporation, NY, USA) és Prism v.6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) segítségével elemeztük. Az adatokat átlagként (М) és az átlag hibájaként (± m) vagy 95% -os megbízhatósági intervallumként (CI) fejeztük ki; a medián (Ме) és az interkvartilis tartomány (IQR). A kategorikus változókat számos (n) és százalékban (%) jelentették. Shapiro-Wilk tesztet és Kolmogorov-Smirnov tesztet alkalmaztunk a folyamatos változók normalitásának meghatározásához. A betegcsoportok fő paramétereinek összehasonlításához (az elemzett paraméterek megoszlásának típusától függően) egyfarkú Student t-tesztet vagy Mann-Whitney U-tesztet alkalmaztunk. A Wilcoxon teszt kétfarkú változatát alkalmazták a paraméterértékek párosított összehasonlításához a csoporton belül. A csoportok közötti kategorikus változókat összehasonlítottuk a Chi 2 teszttel (χ 2) és a Fisher F pontos teszttel.