Határok az endokrinológiában

Rendszer-endokrinológia

Ez a cikk a kutatási téma része

A glükóz metabolizmusának transzkripciós szabályozása: hiányosságok és ellentmondások Az összes (9) cikk megtekintése

Szerkesztette

Nicholas M. Morton

Edinburghi Egyetem, Egyesült Királyság

Felülvizsgálta

Maximilian Zeyda

Bécsi Orvostudományi Egyetem, Ausztria

Sinan Tanyolac

Isztambuli Egyetem, Törökország

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

Cikk letöltése
- PDF letöltése
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Kiegészítő
  Anyag
Exportálás
- EndNote
- Referencia menedzser
- Egyszerű TEXT fájl
- BibTex

OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

1 Egészségtudományi Tanszék, „Magna Græcia” egyetem, Catanzaro, Catanzaro, Olaszország
2 CNR, IBFM UOS, Germaneto, Catanzaro, „Magna Græcia” Egyetem, Catanzaro, Olaszország
3 Tanszékközi Szolgáltató Központ, University of Magna Græcia, Catanzaro, Catanzaro, Olaszország

Bevezetés

Jelenleg nincsenek adatok az oleacein glükóz/lipid anyagcserére gyakorolt hatásairól, ha magas zsírtartalmú étrenddel (HFD) együtt alkalmazzák. Jelen tanulmányban az oleacein orális beadásának hatásait elemeztük HFD-vel táplált C57BL/6JOlaHsd egerekben. A testtömeg, a glikémia, az inzulinémia, a szérum lipidek mérését és a májszövet szövettani vizsgálatát 5 hét oleacein-kezelés után végeztük el. Ugyanezeket a méréseket további 8 hetes kezelés után is elvégezték túlsúlyossá vált állatoknál. Az oleacein hatásainak mechanisztikus magyarázatát a májszövetben is megvizsgálták.

Anyagok és metódusok

Vegyszerek

Az oleuropeint a korábban leírt módon (16) extraháltuk a Coratina fajta olajbogyó leveléből Olea europaea. A tisztaságot RP-HPLC és HRMS-ESI segítségével határoztuk meg, és összehasonlítottuk az irodalomban közölt adatokkal (16). Az oleacein az oleuropein-aglikon [2- (3,4-hidroxi-fenil) -etil (3S, 4E) -4-formil-3- (2-oxoetil) -hex-4-enoát] dialdehid formája. Az oleaceint máshol leírt módon kaptuk, keresztül egylépéses félszintézis mikrohullámú környezetben az oleuropein vizes Krapcho dekarbometoxilezésével (14).

Etikai nyilatkozat

Valamennyi kísérletet az olasz (DM 116/92) és az ECC előírások (HL EC 358/1, 1986. 12.18.) Irányelveinek megfelelően hajtották végre, miután a kísérleti protokollt az egyetem helyi etikai bizottsága jóváhagyta. Magna Græcia ”, Catanzaro. Minden óvintézkedést megtettek a stressz és az egyes kísérletsorozatokban felhasznált állatok számának minimalizálása érdekében.

Állatok és tanulmánytervezés

Biokémiai elemzés

A vérmintákat 12 óra éjszakai éhezés után vettük, majd glükométerrel mértük a glükózszintet. A szérumot 1700 ° C-on végzett centrifugálással nyertük g 10 percig szobahőmérsékleten, és felhasználásig -80 ° C-on tároljuk. Az összkoleszterint, a nagy sűrűségű lipoprotein koleszterint, az alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterint, a triglicerideket (Abcam) és az éhomi inzulint (EMD Millipore Corporation) kereskedelmi készletek felhasználásával mértük a gyártó utasításai szerint, a korábban leírtak szerint (19, 20). A hozzávetőleges inzulinrezisztenciát a homeosztázis modell értékelésével [az inzulinrezisztencia homeosztatikus modelljének értékelése (HOMA-IR)] számítottuk ki, a következő képlet alkalmazásával: [glükóz (mg/dl) × inzulin (mU/l)/405] (21).

Fehérjekivonás és Western-blotolás

Az összes fehérjét kivontuk a májszövetből, a mintákat módosított RIPA pufferben homogenizáltuk [50 mM Tris – HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1% Triton, 0,25% nátrium-deoxikolát, 10 mM nátrium-pirofoszfát, 1 mM nátrium-ortovanadát, 1 mM nátrium fluort (Sigma-Aldrich) és proteáz inhibitor koktélt (Roche Diagnostics GmbH)], majd a felülúszót centrifugáljuk 10 000-nél g 10 percig 4 ° C-on, kétszer (18). 15 ug teljes fehérjét elválasztottunk SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel (7 és 12% -os futtatással), a korábban leírtak szerint (22, 23). A fehérje expressziót a következő specifikus antitestek alkalmazásával mértük: anti-szterin szabályozó elemet megkötő 1. transzkripciós faktor (SREBP-1; 1: 500); anti-extracellulárisan szabályozott MAP kináz (ERK; 1: 1000) és anti-foszfo-ERK (Thr202/Tyr204 p-ERK; 1: 500) (Santa Cruz Biotechnology); anti-zsírsav-szintáz (FAS; 1: 1000) (Cell Signaling Technology); és anti-GAPDH (1: 40 000) (Thermo Fisher Scientific Inc.). Az immunkomplexek vizualizálásához Western blot (WB) detektáló rendszert, ECL Plus-t (Perkin Elmer) alkalmaztunk (24).

Szövettani vizsgálat

A hematoxilin és az eozin festést a szövettani értékelés standard módszerei szerint, fénymikroszkóppal végeztük a toxikológiai elemzéshez. A steatosis kiértékelését a vakuolizált sejtek százalékos megszámlálásával végeztük. Az egyes szakaszokhoz numerikus pontszámot rendeltünk az egyes egérmájokra számított vakuolizált sejtek százalékos aránya alapján: 1 = 1–25%; 2 = 30–65%; 3 => 70%.

Statisztikai analízis

Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki, és elemzésüket a GraphPad Prism 5.0 verziójú statisztikai szoftver (GraphPad Software Inc.) segítségével végeztük. A jelentős különbségeket egyirányú varianciaanalízissel elemeztük, amelyet Tukey többszörös összehasonlító teszt követett (25). o-Értékek ° o °° o °°° o ° o °° o °°° o ° o °° o ° o 70%. (C) Csökkent FAS, SREBP-1, ERK és p-ERK szinteket detektáltunk Western blot (WB) analízissel oleaceinnel vagy oleuropeinnal kezelt állatok májfehérje-kivonataiban (n = 3–4 csoportonként), összehasonlítva az NCD-vel vagy HFD-vel táplált egerek fehérje szintjével (mindegyik, n = 4). GAPDH, a fehérje betöltésének ellenőrzése. A reprezentatív WB (három külön vizsgálat reprezentatív) denzitometriai elemzése látható. A csúcsokon lévő számok a megfelelő rés nagyságát jelzik, az egyes feltételek négy rés teljes méretének százalékában.

5. ábra. Szív-, tüdő- és vese-szakaszok szövettani vizsgálata. Az öt hetes oleaceinnel (HFD-OLEAC) vagy oleuropeinnal (HFD-OLE) végzett kezelési periódus végén nem tapasztaltunk észlelhető szövettani különbségeket ezen a szinten, a négy egércsoport között.

Az oleacein hatása az elhízott egerekre

A kísérletek második sorozatában megvizsgáltuk az oleacein hatását a már túlsúlyos egerekre. Ennek érdekében a HFD csoportból nyolc állatot (átlagos súlya 37,6 ± 0,6 g) továbbra is HFD-vel etettek, miközben további 8 hétig ugyanazon adag oleaceint kapták vagy nem kapták. Ismételten csökkent testtömeg-növekedést figyeltünk meg az oleaceinnel kezelt egereknél (6A. Ábra), elsősorban a májszövet kisebb növekedésének (6B. Ábra), és kisebb mértékben a hasi zsírnak (6C. Ábra). Amint a 7. ábra mutatja, az oleacein csak az összes koleszterinszintet korrigálta szignifikánsan, míg a trigliceridek szintje nem változott, a glikémia pedig csak kissé módosult. Az oleacein csökkentette a májban a lipidlerakódást (8A. Ábra), és ez a csökkenés párhuzamosan csökkentette a p-ERK és SREBP-1 fehérje expresszióját (8B. Ábra), amely állapot hozzájárulhat a hiperinsulinémia enyhítéséhez a HFD oleaceinnel kezelt egerekben ( 8C. Ábra).

6. ábra. Az oleacein hatása a testtömegre, a zsigeri zsírra és a máj tömegére elhízott, magas zsírtartalmú étrenddel etetett egerekben (HFD). Testsúly (A), máj súlya (B), és zsigeri zsír (C) HFD-vel táplált elhízott egerekben mértük. Az értékeket átlag ± SD-ként fejezzük ki. *o ° o °° o ° o °° o 70%. (B) Az SREBP-1, ERK és p-ERK fehérje expressziós szintjét a HFD-vel etetett oleaceinnel kezelt és kezeletlen és NCD-vel táplált egerek májában mutattuk ki. GAPDH, a fehérje betöltésének ellenőrzése. (C) A vérmintákat az „Anyagok és módszerek” szakaszban leírtak szerint vettük. Az inzulinszinteket 13 hetes etetés után mértük HFD-vel oleaceinnel és anélkül. Az értékeket átlag ± SD-ként fejezzük ki. *o ° o Kulcsszavak: oleacein, inzulinrezisztencia, elhízás, máj steatosis, koleszterin

Idézet: Lombardo GE, Lepore SM, Morittu VM, Arcidiacono B, Colica C, Procopio A, Maggisano V, Bulotta S, Costa N, Mignogna C, Britti D, Brunetti A, Russo D és Celano M (2018) Oleacein hatása Nagy zsírtartalmú étrendfüggő steatosis, súlygyarapodás és inzulinrezisztencia egerekben. Elülső. Endokrinol. 9: 116. doi: 10.3389/fendo.2018.00116

Beérkezett: 2018. január 4 .; Elfogadva: 2018. március 08 .;
Publikálva: 2018. március 19

Nicholas Michael Morton, Edinburghi Egyetem, Egyesült Királyság

Sinan Tanyolac, Isztambuli Egyetem, Törökország
Maximilian Zeyda, Medizinische Universität Wien, Ausztria

† Ezek a szerzők egyformán járultak hozzá ehhez a munkához.