Vércsoport gének kimutatása multiplex SNaPshot módszerrel

A cikk javítása (i)

HIBAJEGYZÉK

49. évfolyam 9. szám, transzfúzió
oldalak: 2012-2012
Első közzététel online: 2009. augusztus 26

A New York-i Vérközpontból, New York, New York.

A New York-i Vérközpontból, New York, New York.

Absztrakt

HÁTTÉR: A vércsoport antigének meghatározása a betegeknél és a donoroknál elsődleges fontosságú a transzfúziós orvoslásban. A vércsoport antigénjei öröklődnek és polimorf jellegűek. A polimorf vércsoport antigének többsége a nukleotid polimorfizmusokból (SNP) származik a vércsoport génjeiben. Számos DNS-alapú vizsgálatot, például fajspecifikus polimeráz láncreakciót (PCR), PCR-restrikciós fragmens hosszúságú polimorfizmust és mikrochipeket írtak le a variáns vércsoport gének tanulmányozására. Ebben a tanulmányban az SNaPshot (Applied Biosystems) módszert adaptáltuk az SNP-k detektálására 10 közös vércsoport-rendszerben.

TANULMÁNYTERVEZÉS ÉS MÓDSZEREK: Az érdeklődésre számot tartó DNS-régiókat multiplex PCR-ben amplifikáltuk, és különböző hosszúságú specifikus oligonukleotidpróba-primerekkel hevítettük. Az AmpliTaq DNS-polimeráz meghosszabbította a primereket azzal, hogy csak egyetlen fluoreszcens ddNTP-t adott hozzá a 3'-végéhez, és genetikai elemzőben a kapilláris elektroforézis differenciál mobilitásával detektálták. Az eredményeket számítógépes szoftver segítségével elemeztük az SNaPshot alapértelmezett elemzési módszerében.

EREDMÉNYEK: A korábban fenotípusos és/vagy genotípusos 29 vérmintában tizenhét SNP helyet használtunk a multiplex SNaPshot vizsgálatok pontosságának és reprodukálhatóságának tesztelésére. Az eredményeket összehasonlítottuk a korábban elemzett típusokkal. Az SNaPshot elemzések a 17 SNP helyet pontosan megjósolták mind a 29 vérminta esetében. Mind a homozigóta, mind a heterozigóta vércsoportokat azonos magabiztossággal detektáltuk.

KÖVETKEZTETÉS: A vércsoport detektálása SNaPshot módszerrel az antitestfüggő fenotípus előrejelzés gyakorlati alternatívája. A DNS-ből kiindulva ez a módszer gyors, 24 órás átfutási idővel, a reagens átlagos költsége körülbelül 2 USD észlelt SNP-nként.