Határok a fiziológiában

Madárélettan

Szerkesztette

Yajun Wang

Szecsuáni Egyetem, Kína

Felülvizsgálta

Sergio L. Vieira

Rio Grande do Sul Szövetségi Egyetem, Brazília

Vaszil Pirgozliev

Harper Adams Egyetem, Egyesült Királyság

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

Cikk letöltése
- PDF letöltése
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Kiegészítő
  Anyag
Exportálás
- EndNote
- Referencia menedzser
- Egyszerű TEXT fájl
- BibTex

OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

1 Baromfitudományi Tanszék, Arkansasi Egyetem, Fayetteville, AR, Egyesült Államok
2 DSM állattáplálkozás és egészség, Kaiseraugst, Svájc

Bevezetés

Anyagok és metódusok

Az állatok gondozása és felhasználása

Ezt a vizsgálatot az Országos Egészségügyi Intézet laboratóriumi állatok felhasználására és gondozására vonatkozó ajánlásainak megfelelően hajtották végre. Minden állattartást és eljárást az Arkansasi Egyetem Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága hagyott jóvá (protokollszám: 16084).

Állati eljárás és környezet

Asztal 1. Az alapkísérleti étrend összetevői és tápanyag-összetétele.

1.ábra. A myo-Ins és a HiPhos kiegészítés hatása az 1. kísérlet során a csirke takarmányfelvételére, a vízbevitelre és a testtömegre. (A) A kamrák környezeti állapota (RH és T °). A Myo-Ins és a HiPhos nem befolyásolta az egyéni és a kumulatív takarmányfelvételt (IDŐSZÁMÍTÁSUNK ELŐTT). A HiPhos csökkent egyénileg (D) és halmozott (E) víz fogyasztás. A BW-ben nem történt változás (F). Az adatokat átlag ± SEM formában mutatjuk be. BW, testtömeg; Myo-Ins, myo-inozit.

Minta kollekció

A növekvő tollakat és vért az alapvonalon, majd 2 óránként 10 órán át (1. kísérlet) és 30 órán át étkezés után (2. kísérlet) gyűjtöttük. A növekvő tollakat összegyűjtöttük a bal emlőtraktusból, és az élő szöveteket (pépet) szétvágtuk, PBS-ben leöblítettük, folyékony nitrogénben lefagyasztottuk és -80 ° C-on tároltuk felhasználásig. 250 μl vért gyűjtöttünk az RNS izolálásához és a génexpresszióhoz, a maradékot heparinizált csőbe helyeztük a plazma elválasztása céljából. Az összes mintát az elemzésig -80 ° C-on tároltuk.

Keringő és toll myo-inozit mérése

RNS izolálás és kvantitatív valós idejű PCR

A teljes RNS-t Trizol reagenssel (tollhoz) vagy Trizol LS (vérhez) (Life Technologies, Carlsbad, CA) használtuk ki a gyártó utasításainak megfelelően. Az RNS integritását és minőségét 1% -os agarózgél-elektroforézissel értékeltük, és az egyes minták RNS-koncentrációit és tisztaságát Take 3 Micro-Volume Plate segítségével határoztuk meg Synergy HT multi-mode mikrolemez-olvasóval (BioTek, Winooski, VT). Az RNS mintákat DNase-vel kezeltük, reverz átírással qScript cDNS Synthesis Supermix (Quanta Biosciences, Gaithersburg, MD) alkalmazásával, majd valós idejű kvantitatív PCR-rel (Applied Biosystems 7500 Real Time System) amplifikáltuk PowerUp SYBR zöld master keverékkel (Life Technologies, Carlsbad, CA, Egyesült Államok) a korábban leírtak szerint (Rajaei-Sharifabadi et al., 2017). A qPCR-ciklus körülményei 2 percig 50 ° C, 10 percig 95 ° C voltak, majd 40 ciklus kétlépéses amplifikációs program (95 ° C 15 másodpercig és 58 ° C 1 percig). Az amplifikáció végén olvadási görbe elemzést alkalmaztunk a disszociációs protokoll alkalmazásával, hogy kizárjuk a nem specifikus PCR termékekkel való szennyeződést. A célgének relatív expresszióját 2 –ΔΔCt módszerrel határoztuk meg, a háztartási génként 18 s rRNS-re normalizálva (Schmittgen és Livak, 2008). A csirkére specifikus oligonukleotid primer szekvenciákat a 2. táblázat mutatja be.

2. táblázat. Oligonukleotid valós idejű qPCR primerek.

Statisztikai analízis

Az adatokat kétirányú, ismételt ANOVA-mérésekkel elemeztük, diétával (C, Myo-Ins és HiPhos) és idővel mint tényezőkkel. Ha az ANOVA szignifikáns hatásokat tárt fel, az átlagokat Tukey többszörös tartományú teszttel hasonlítottuk össze a Windows Graph Graph Prism 6.00 verziójával (Graph Pad Software, La Jolla, CA, Egyesült Államok), és a különbségeket P # Jelentős különbséget jelez a kontroll étrendhez képest P - ΔΔCt módszer (Schmittgen és Livak, 2008). Az adatokat átlag ± SEM formában mutatjuk be. * Jelentős különbséget jelez a kiindulási ponthoz képest (C, 0 h) P - ΔΔCt módszer (Schmittgen és Livak, 2008). Az adatokat átlag ± SEM formában mutatjuk be. * Jelentős különbséget jelez a kiindulási ponthoz képest (C, 0 óra) P Kulcsszavak: fitát hidrolízis, myoinositol, fitáz, génexpresszió, toll, brojlerek

Idézet: Greene E, Mallmann B, Wilson JW, Cowieson AJ és Dridi S (2020) A fitáthidrolízis nyomon követése soros vérmintavétel és a toll myo-inozitol szintjének felhasználásával brojlerekben. Elülső. Physiol. 11: 736. doi: 10.3389/fphys.2020.00736

Beérkezett: 2020. április 08 .; Elfogadva: 2020. június 08 .;
Publikálva: 2020. június 26.

Yajun Wang, Szecsuani Egyetem, Kína

Sergio Luiz Vieira, a Rio Grande do Sul Szövetségi Egyetem, Brazília
Vasil Pirgozliev, Harper Adams University, Egyesült Királyság