A szildenafil-citrát nem programozza át a hipertónia és a krónikus vesebetegség kockázatát a preeklamptusos terhesség utódainál a Dahl SS/Jr Patkányban

Vizuális absztrakt

Absztrakt

Háttér A preeclampsia a terhesség rendellenessége, amely az Egyesült Államokban magas betegségekkel és gazdasági terhekkel jár. A preeclampsia hosszú távú hatásait alátámasztó bizonyítékok az érintett terhesség utódaira magasak, de a preeclampsia jelenlegi magas vérnyomáscsökkentő terápiájának a kardio-renális kimenetelére gyakorolt hatása nagyrészt nem ismert. A vizsgálat célja annak a hipotézisnek a vizsgálata volt, hogy a szildenafil-citrát, egy foszfodiészteráz-5 inhibitor, átprogramozza a magas vérnyomás és a vesebetegség kockázatát preeklamptikus terhesség utódainál a másodlagos stresszorokra adott válaszok megváltoztatásával.

Mód Dahl SS/Jr patkányokat 0,3% NaCl étrenden pároztunk. A 10. terhességi napon a terhes anyákat randomizálták a vivőanyag-diétára vagy a szildenafil (napi 50 mg/kg) diétára, amelyet a születésig folytattak. A kölyköket 4 hetes korban választották el, és 3 hónapos korukig 0,3% -os NaCl-diétával öregedtek. Ezen a ponton a kölyköket három csoportba sorolták: kiindulási vagy beavatkozás nélküli, 2% -os NaCl diétás provokáció 4 hétig, vagy angiotenzin II (200 ng/kg/perc) szubpresszor infúzió 2 hétig.

Eredmények A kiinduláskor az anyai kezelési csoportok között nem volt különbség. 2% -os NaCl-diéta bevezetése után a szildenafil-kezelt anyaállatok hím utódai gyengített BP-emelkedést mutattak; ezt a védelmet azonban nem figyelték meg az angiotenzin II infúzió alatt.

Következtetések Eredményeink azt mutatják, hogy az intrapartum szildenafil nem programozza át a hipertónia és a vesebetegség kockázatát preeklamptikus terhesség utódainál.

Magas vérnyomás
Angiotenzin II
Fejlesztő programozás
Diéta
Magas vérnyomás
Vesebetegségek
Foszfodiészteráz 5 inhibitorok
Pre-Eclampsia
Terhesség
Patkányok
Beltenyésztett Dahl
Szildenafil-citrát
Nátrium-klorid

Bevezetés

A preeclampsia a terhesség olyan rendellenessége, amely világszerte a terhesség legfeljebb 8% -át érinti (1). 20 hetes terhesség után jelentkezik, és tipikusan újonnan megjelenő magas vérnyomást és proteinuriát eredményez, bár a trombocitopénia, a veseelégtelenség, a májműködés károsodása, a tüdőödéma és a látási problémák is diagnosztikai tünetekként szerepelnek (1). Bár a tünetek eredetileg úgy gondolták, hogy a szüléssel alábbhagynak, egyre nyilvánvalóbb, hogy a preeclampsia a szülés utáni időszakon túl jelentős kockázatot jelent mind az anya, mind a gyermek számára (2– ⇓ ⇓ ⇓ 6). A preeclampsia által bonyolult terhességeknél a szülés korábban és több káros mellékhatással történik, mint a nem komplikált terhességek vagy a már fennálló magas vérnyomás esetén. Ezek a nemkívánatos események magas gazdasági teherhez vezetnek, az anyák és a csecsemők átlagos preeklampsziás költségei 41 790 dollár, míg komplikáció nélküli terhesség esetén 13 187 dollár, a korábban fennálló magas vérnyomásban szenvedő nők esetében pedig 24 182 dollár (7).

A terhesség a magzat fejlődésének és fiziológiai programozásának kritikus ablakát jelenti. Barker és munkatársai kimutatták, hogy a preeclampsia vagy az alacsony születési súlyú bonyolult terhességből született gyermekeknél magasabb a BP gyermekkorban és felnőttkorban (8,9). Ez a hipotézis, amelyet az egészség és a betegség elméletének fejlesztési eredetének neveznek, azt sugallja, hogy a hátrányos intrauterin környezet (elégtelen táplálkozás vagy a magzat vérellátása) epigenetikus változásokat eredményez, amelyek megváltoztatják az anyagcserét és a fiziológiai reakciómechanizmusokat az utódok egész életében (10,11 ). További tanulmányok és metaanalízisek azt mutatták, hogy a preeklamptusos terhesség után született gyermekek nagyobb kockázatot jelentenek az érrendszeri betegségekre, mint például a magas vérnyomás és a stroke (3,12,13). Bár ennek a kapcsolatnak számos javasolt mechanizmusa bizonyított támogatást nyert (14– ⇓ ⇓ 17), ennek a patogenezisnek a pontos jellege továbbra sem ismert, és ezért nem mutattak ki lehetséges terápiás beavatkozásokat.

Annak ellenére, hogy egyre növekszik a potenciális preeclampsia-kezelések kutatása, az ellátás jelenlegi színvonala a gondos megfigyelésre, a korlátozott vérnyomáscsökkentő kezelésre, a magnézium-szulfát infúzióra korlátozódik az eklamptusos rohamok megelőzésére és a korai szállításra (18). Bár a folytonos terhesség általában előnyös a magzati fejlődés szempontjából, a szuboptimális táplálkozással járó intrauterin környezet folyamatos kitettsége további kockázatot jelent (19,20). A jelenleg tesztelt kísérleti terápiák magukban foglalják az antioxidánsokat (pl. Aszpirin, C- és E-vitamin), értágítókat (pl. Szildenafil) és az oldható fms-szerű tirozin-kináz 1 gátlását vagy csökkentését (sFlt-1; pl. VEGF infúziója, aferézis, stb.), többek között (21– ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ 28). Bár klinikai és/vagy preklinikai vizsgálatok rövid távon bebizonyították ezen szerek jótékony hatásait, a hosszú távú biztonságossági adatok a legtöbb terápiára korlátozottak (18). Az igaz, randomizált, klinikai vizsgálatokat nehéz megállapítani, mert minden kezeletlen kontrollcsoport nem részesülne a szokásos ellátásban, és az anya és a magzat biztonságossága felülírja a terhesség alatti vizsgálatok korlátozását.

Anyagok és metódusok

Állatok

BP mérések

Időbeli tanfolyamok.

A szisztolés BP méréseket a volumetrikus nyomást rögzítő farok-mandzsetta módszerrel (CODA 8 csatornás rendszer; Kent Scientific Corp., Torrington, CT) használtuk. Az állatokat csak a korlátozásokra képezték ki, majd egy fűtött emelvényen végzett korlátozásokra vonatkozó képzést követtek, mielőtt két egymást követő napon legalább öt érvényes mérésből álló készleteket kaptak volna. Az egyes állatok összes érvényes mérését átlagoltuk a végső adatpontok megszerzéséhez.

Másodlagos stressz vizsgálatok.

A MAP méréseket telemetriás módszerrel kaptuk, amint azt korábban leírtuk (39). A patkányokat a femoralis artérián keresztül telemetriás eszközökkel (Data Sciences, Inc., St. Paul, MN) ültették be a folyamatos vérnyomásméréshez 10 hetes korban, körülbelül 10 nappal minden kísérlet előtt, 1 hét gyógyulást és 2–3 napot engedélyezve. kiindulási BP adatok gyűjtésére.

Emelt só (2% NaCl) diéta

A telemetriás műtétből való felépülés és az alapszintű MAP-adatok összegyűjtése után a patkányok egy csoportját (n = 15; csoportonként 1–4) 4 hétig magas sótartalmú étrendet (2% NaCl, TD94217; Harlan Teklad) táplálták. hetes korban. Huszonnégy órás vizeletet gyűjtöttünk metabolikus ketrecben a 2% -os sótartalmú étrend megkezdése előtt, valamint az eutanázia és a szövetgyűjtés előtt a 4 hetes vizsgálat végén.

AngII infúzió

A telemetriai műtétből való felépülés és az alapszintű MAP-adatok összegyűjtése után a minipumpákat (2002-es modell; Alzet) szubkután injekcióval helyeztük el a patkányok egy csoportjában (n = 33; csoportonként 5-6, kb. 12 hetes korban). Az AngII-t (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) steril sóoldattal hígítottuk, és az eutanázia és a szövetgyűjtés előtt 2 hétig 200 ng/kg/perc szubpresszor adagban adtuk be. Huszonnégy órás vizeletet gyűjtöttünk az anyagcsere-ketrecen keresztül a minipumpa behelyezése előtt és ismét az eutanázia előtt.

Vizeletmérések

A patkányokat anyagcsere-ketrecekbe helyezték, ahol szabad hozzáférés biztosított az élelemhez és a vízhez a 24 órás vizeletgyűjtéshez. A vizelet fehérje kiválasztását Bradford Assay (Bio-Rad Laboratories) határozta meg. A KIM-1 (1: 8 hígítás; R&D Systems, Minneapolis, MN) és a nephrin (hígítás nélkül; ABclonal, Woburn, MA) vizelettel történő kiválasztási sebességét a kereskedelemben kapható ELISA-k segítségével számszerűsítettük. A vizeletminta hígításait szükség szerint beállítottuk az egyes vizsgálatok lineáris illeszkedésének eléréséhez.

Szövetgyűjtemény

A patkányokat izofluránnal altattuk (5% indukció, 2% –3% fenntartás; Piramal Healthcare). Végső vérmintát vettünk a hasi aortából heparinizált fecskendőkbe, és a szerveket ezt követően sóoldattal vérmentesen perfundáltuk. A veséket eltávolítottuk, kortikális és medulláris régiókra boncoltuk, majd későbbi elemzés céljából folyékony nitrogénben lefagyasztottuk.

Kreatinin clearance-mérések

A végső vérmintákat centrifugáltuk, és plazmát izoláltunk. A kreatinin-koncentrációt mind a vizelet-, mind a plazma-mintákban (Vet Axcel Chemistry Analyzer; Alfa Wasserman, West Caldwell, NJ) megmértük, majd ezeket használtuk a kreatinin-clearance kiszámításához minden állatnál.

Célzott RNS-szekvenálás

Statisztikai elemzések

Minden adatot átlag ± SEM-ként adunk meg. A statisztikai elemzéseket kétirányú ANOVA-val (ismételt mérésekkel a telemetriai adatokra) végeztük, amelyet Tukey post hoc elemzés követett, a GraphPad Prism 8.0 (GraphPad, San Diego, CA) alkalmazásával. t tesztet alkalmaztunk az 1–4. táblázatokhoz. Az eszközöket jelentősen eltérőnek tekintették, ha P Tekintse meg ezt a táblázatot:

Soron belüli megtekintése
Felugró ablak megtekintése

3 hónapos hím patkányokban célzott RNS-szekvenálással vizsgált összes gén normalizált száma