Zusanli (ST36) és Shenshu (BL23) moxibustionja enyhíti a porcromlást a RANKL/OPG jelzés révén a rheumatoid arthritis nyúlmodelljében

1 Akupunktúrás és Tuina Iskola, Csengdu Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem, Chengdu 610075, Kína

2 Csengdu város Qingbaijiang körzetének népkórháza, Chengdu 610300, Kína

3 Kínai Orvostudományi Kórház a Southwest Medical University-nél, Luzhou 646000, Kína

Absztrakt

1. Bemutatkozás

A rheumatoid arthritis (RA) krónikus, szisztémás és komplikált autoimmun osteopathiás betegség. Rejtélyes patogenezisére jellemző a tartós synovitis, valamint a porc progresszív lebomlása és a csont eróziója, ami idővel súlyos fogyatékossághoz vezet [1]. RA leggyakoribb a nőknél, és a becsült prevalencia 0,5-1% a felnőtt populációban [2]. Bár az RA etiológiája jelenleg nincs teljesen tisztázva, a genetikai és környezeti kockázati tényezők kombinációját javasolták fontos szerepet játszani az RA patogenezisében [3]. Az RA kezelés célja a remisszió vagy a betegség aktivitásának csökkentése, ami végső soron lelassítja vagy megakadályozza az ízületi pusztulás előrehaladását.

Az RA ellen alkalmazott jelenlegi gyulladáscsökkentő vagy biológiai szerek mellékhatásokkal (kardiovaszkuláris és gyomor-bélrendszeri szövődmények) rendelkeznek, vagy gyógyszerrezisztenciává fejlődnek [13, 14]. Erre a feltételezésre építve a vizsgálat egy másik terápiás módszer feltárása volt, amely lebecsülheti az RA patogenezisét. A moxibustiont, a hagyományos kínai orvoslás kezelését a klinikákon általában használják farmakológiai anyagok és nem gyógyszerészeti gyakorlatok kombinációjaként. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a moxibustion csökkenti a krónikus gyulladásos választ számos mozgásszervi betegség esetén, beleértve a térd osteoarthritist [15], a nyaki spondylosisot [16] és az elsődleges osteoporosist [17]. Ezek a vizsgálatok összekapcsolják a moxibustiont a csontanyagcsere átalakulásával gyulladásos betegségek esetén; továbbra is fennállnak a kérdések, hogy a moxibustion enyhíti-e a porc károsodását az RA-ban.

Jelen tanulmányban szövettani festést és valós idejű polimeráz láncreakciót (valós idejű PCR) alkalmaztunk a RA-nyulak térdízületeiben a moxibustion RANKL és OPG porcromlására és mRNS-expressziójára gyakorolt hatásainak megfigyelésére, a védőhatások felfedezésére. és feltételezhetően a moxibustion mechanizmusa RA-n.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Állatok

Harminc csontvázban érett, hím (15) vagy nőstény (15) japán fehér nyulat (súly: 2,5 ± 0,25 kg) nyertünk a Chengdu Tradicionális Kínai Orvostudományi Egyetem Kísérleti Állatközpontjából, és egy hétig akklimatizáltuk őket a kísérleti eljárások előtt. Minden állat szabad hozzáférést kapott az élelemhez és a vízhez szabadon, kontrollált szobahőmérsékleten (23 ± 1 ° C), 12 órás világos-sötét ciklusokkal. Az összes állatkísérletet az intézményi etikai bizottság hagyta jóvá.

2.2. RA létrehozása nyulakban

Egy hét akklimatizáció után a nyulakat véletlenszerűen 3 csoportra osztották (n = 10 minden csoportra): kontrollcsoportra, RA csoportra és RA moxibustion csoportra. Az RA nyúlmodelljét Freund teljes adjuvánsának (FCA; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) injektálásával hoztuk létre a fojtogató térdízületekben, az előző tanulmányban leírtak szerint [18]. Az FCA hő hatására elpusztult, elhalt mycobacterium tuberculosis baktériumokat tartalmaz folyékony paraffinban, 10 mg/ml koncentrációban. Az összes nyúlnak, a kontrollcsoportba tartozó állatok kivételével, egyetlen dózis FCA-t (0,25 ml/kg) injektáltunk a patelláris ín, a patella alsó széle és a fojtott térdízületek tibialis platója által képzett háromszög alakú régióba. Valamennyi állatnál megjelentek az ízületi gyulladás jelei, például duzzanat, bőrpír és a térd mozgásának korlátozása. A kontrollcsoport nyulai azonos térfogatú sóoldatot kaptak.

2.3. Moxibustion módszer

A moxibustion kezelést az FCA injekció beadása után 7 nappal hajtották végre (1. ábra (a)). Jelen tanulmányban az akupunktumok helyét a kísérleti akupunktúra állványai alapján határozták meg [19]. Zusanli (ST36) a láb hátsó oldalának felső ötödik pontján, Shenshu (BL23) pedig a második ágyéki gerinces folyamaton, a 1,5 cm-es nyílás mellett helyezkedik el (1. ábra (b)). A nyulakat a kísérleti asztalhoz rögzítettük, és a bőr szőrét leborotváltuk, hogy az akupunktumok megjelenjenek. Az állatok által használt moxapálcákat (átmérő: 8 mm, hosszúság: 20 cm, Nanyang Dongsheng Moxibustion Technology Development Co., Ltd., Kína) megégettük, hogy 2-3 cm-re végezzük a moxibustiont az akupunktumok felett, hogy elkerüljük a bőr megégését, amely lehet kapcsolódik a stresszválaszhoz. A moxibustion kezeléseket naponta 30 percig, egymást követő 5 héten keresztül végeztük, és minden hét hetedik napján 1 napos pihenő volt (1. ábra (a)). A kontrollcsoport nyulait 30 percig korlátoztuk moxibustion kezelés nélkül.

2.4. Immunhisztokémiai kísérletek

A képeket digitális fényképezőgépekkel felszerelt fordított mikroszkóppal (Olympus photomicroscope, Tokió, Japán) szereztük be. A szövettani elemzést egy másik kísérletező végezte, aki vak volt a kísérleti manipulációtól mindhárom csoportban. A porc lebomlását a Mankin-pontszám [20] szerint pontozták, amely a normál porc 0-tól a legsúlyosabb károsodás 5-ig terjedő pontszámokat rendel. Az ízületi szerkezet értékeléséhez 0–5 a normál szerkezetre, a felület szabálytalan repedéseire, az átmeneti réteget elérő repedésekre, a sugárzási rétegbe jutó repedésekre, valamint a meszesedett réteget elérő repedésekre, illetve a porc réteg abszcissziójára utal. A porcsejtek értékeléséhez 0-tól 3-ig a porcsejtek normál számát, a porcsejtek diffúz növekedését, nagyszámú sejthalmaz megjelenését és nyilvánvalóan csökkent sejtszámot értjük. A tidemark integritásának értékeléséhez 0-tól 2-ig a normál tidemark, a multiple tidemark és a subchondralis erek értek, amelyek behatolnak a tidemarkba. A moxibustion oszteoklasztra gyakorolt hatásainak értékeléséhez az oszteoklasztokat RANKL-sejtként jellemeztük, és megszámoltuk az oszteoklasztok számát.

2.5. Valós idejű PCR-kísérlet

2.6. Statisztikai analízis

Az adatokat átlag ± SD-ként fejeztük ki. Az eredményeket az SPSS 19.0 statisztikai szoftverrel elemeztük. A csoportok közötti különbséget egyirányú ANOVA teszttel, majd LSD post hoc összehasonlítással értékeltük. Kruskal-Wallis tesztet, majd post hoc Mann-Whitney U tesztet alkalmaztunk, amikor a varianciák homogenitása hiányzott. P
a)
b)
c)
d)
e)
f)

Annak megvizsgálására, hogy a moxibustionnak van-e protektív hatása az RA-ra, RA nyulakon végeztünk Zusanli (ST36) és Shenshu (BL23) moxibustiont (1. ábra (b)). 5 héttel a moxibustion után HE-festéssel értékeltük a porc kóros változását. A HE festés azt mutatta, hogy a moxibustionos kezelést követően a porc kóros elváltozásai enyhültek. Az RA csoporttal összehasonlítva a porcfelület károsodásának szintje, a kondrocita elrendeződés és a tidemark integritása jelentősen javult (2. ábra (c)). Ezenkívül a subchondralis csonttrabekulák pusztulása kisebb volt a moxibustion csoportban, mint az RA csoportban (2. ábra (f)).

A porc változását a Mankin pontrendszer alapján értékeltük. Értékeltük az ízületi szerkezet, a porcsejtek és a tidemark integritásának Mankin-pontszámát. A kontroll csoporthoz képest a Mankin pontszám szignifikánsan megnőtt az RA csoportban (3. ábra, RA csoport: porcszerkezet: 3,4 ± 0,69; porcsejtek: 2,2 ± 0,79; tidemark integritása: 1,5 ± 0,53; teljes pontszám: 7,1 ± 1,37). A moxibustion csoport azonban szignifikánsan alacsonyabb Mankin pontszámot mutatott, mint az RA csoportban (3. ábra, moxibustion csoport: porcszerkezet: 1,6 ± 0,97; porcsejtek: 1,5 ± 0,71; tidemark integritása: 0,6 ± 0,52; teljes pontszám: 3,7 ± 1,70) . Ezek az eredmények arra utaltak, hogy a moxibustion kezelés gyengítette az RA kóros elváltozásait.

P
a)
b)
c)
d)

P
a)
b)