Kutyaféle vírus vadon távoli keleti leopárdban (PANTHERA PARDUS ORIENTALIS)

Nadezhda S. Sulikhan, Martin Gilbert, Ekaterina Yu. Blidcsenko, Szergej V. Naidenko, Galina V. Ivancsuk, Tatiana Yu. Gorpenchenko, Mikhail V. Alshinetskiy, Elena I. Shevtsova, John M. Goodrich, John CM Lewis, Mihail S. Goncharuk, Olga V. Uphyrkina, Vyatcheslav V. Rozhnov, Sergey V. Shedko, Denise McAloose, Dale G. Miquelle, Tracie A. Seimon; KANI TÁVOLÍTÓ VÍRUS VAD TÚLKELETI LEOPARDBAN (PANTHERA PARDUS ORIENTALIS). J Wildl Dis 2018. január 1 .; 54. (1): 170–174. doi: https://doi.org/10.7589/2017-03-065

Hivatkozási fájl letöltése:

ABSZTRAKT

A távol-keleti leopárd (FEL; Panthera pardus orientalis), más néven amur leopárd, az egyik legveszélyeztetettebb nagy macskaféle, és jelenleg a Nemzetközi Természetvédelmi Egyesület kritikusan veszélyeztetett kategóriába sorolja (Stein et al. 2016) . A népesség korábban Kína északkeletén, a Koreai-félszigeten és az Orosz Távol-Keleten fekvő Primorskii Krai (tartomány) déli részén terjeszkedett (Hebblewhite et al. 2011). Az élőhelymódosítás, a zsákmány kimerülése és az orvvadászat miatt a FEL egyetlen szubpopulációra csökkent, amely körülbelül 7000 km 2 -et foglal el a délnyugati Primorskii Krai és a szomszédos kínai Jilin tartományban (Hebblewhite et al. 2011). Körülbelül 60-nál kevesebb egyed maradt (Vitkalova és Shevtsova 2016), ezt a genetikailag elszegényedett populációt veszélyeztetik a sztochasztikus folyamatok, beleértve a beltenyésztési depressziót, a környezeti csapásokat és a betegségeket (Uphyrkina et al. 2002).

2015. május 8-án egy körülbelül 2 éves nőstény leopárdra bukkantak egy olyan út közelében, amely a Leopard Nemzeti Park földjén halad át Khasanskii körzetben (É 42 ° 57′19,4 ″, K 131 ° 21′5,4 ″ K). A kezdeti megközelítéskor a leopárd nem mutatott félelmet az emberek és a járművek iránt, és közömbös volt a környezete iránt. Azonban képes volt reagálni a mozgásra, a látás folytonosságára utalva. A leopardot 5 mg/kg tiletamin és zolazepam (Zoletil, Virbac, Carros, Provence, Franciaország) alkalmazásával rögzítették és az Alekseevka PRNCO „Tiger Center” -be vitték. Az állat befogadásakor 28 kg volt, és közepesen rossz testállapotúnak tartották. Az ápolás során a leopárdot nem érdekelte az élelmiszer és a víz, ezért kézi etetést és intravénás folyadékkezelést igényelt. Hetente 5 mg/kg enrofloxacin (Baytril Bayer, Leverkusen, Németország) és 0,2 mg/kg dexametazon (Dalkhimfarm, Habarovsk, Oroszország) intramuszkuláris injekcióit adták hetente.

Vérmintákat vettünk 2015. május 8-án és 16-án etilén-diamin-tetraecetsavval antikoagulánsként, és elemzésre benyújtottuk őket az alba laboratóriumba, Vladivostokba. A fehérvérsejtek kézi számlálása normál tartományon belül volt a házimacskáknál (7,3 × 10 9/L május 8-án és 10,3 × 10 9/L május 16-án). Az összes többi citológiai és biokémiai érték szintén a laboratóriumi házi macskák számára normálisnak tartott tartományba esett.

A szupportív ellátás és az orvosi kezelés ellenére a leopárd mozgásai egyre koordinálatlanabbá váltak, fokozatosan súlyos hátsó végtag-összehúzódásokkal, amelyeket intravénás midazolámmal nem lehetett ellenőrizni (Hoffmann-La Roche, Basel, Svájc, 0,05–0,01 mg/kg). A leopárd állapota elfajult, és etikai okokból május 25-én eutanáziát hajtottak végre.

A leopárd CDV törzs és a más régiók közötti kapcsolat bemutatásához filogenetikai fát készítettünk a H génhez Bayes-i következtetés alapján (1. ábra). A megfelelő nukleotid-szubsztitúciós modell általános reverzibilitását az Akaike Information Criterion pontszámok alapján választottuk ki a jModeltest 2 2.1.8 változatának felhasználásával (Darriba et al. 2012). A fát a Geneious MrBayes plug-in (3.2.6-as verzió, Biomatters Ltd., Auckland, Új-Zéland) felhasználásával állították össze, 1 100 000 iterációval, 200 fánként mintavételezéssel, a minták 25% -ának eldobásával (Huelsenbeck és Ronquist 2001 ). Konzisztens topológiát találtunk egy konszenzusfában, amelyet a maximális valószínûség elemzésével állítottunk össze. A genetikai és antigén sodródás a CDV divergenciáját különféle vonalakba terelte, amelyek nagyjából földrajzi mintát követnek (Harder et al. 1996; Haas et al. 1997; Martella et al. 2002). A leopárdból nyert H gén amplikon a CDV sarkvidéki jellegű kládjába esett (Haas et al. 1997; 1. ábra), amely az orosz Távol-Keleten Amur tigrisekből és a Bajkál fókákból (Phoca sibirica) származó szekvenciákat tartalmazza. Bajkál-tó (Seimon et al. 2013).

Egy filogenetikai fa, amely szemlélteti egy vad távol-keleti leopárdból (Panthera pardus orientalis) nyert kutyafélék vírusszekvencia kapcsolatát, amelyet előrehaladott neurológiai betegség miatt eutanizáltak. A fát távol-keleti leopárdból (dobozon belül) kapott hemagglutinin (H) gén felhasználásával, 59 korábban publikált H gén felhasználásával készítettük. A nem kódoló nukleotidokat kizártuk, ami 382 bázispár hosszúságú összehangolást eredményezett. Az elemzéseket MrBayes (Bayes-i következtetés) és az általános idő szerint reverzibilis szubsztitúciós modell alkalmazásával végeztük, 1 100 000 iterációval, 200 fánként részmintát véve, 25% -ot kidobva. A phocine distemper vírus (PDV) szekvenciáját felvettük outgroup-ként (GenBank csatlakozási szám: HQ007902).

Az agy (cerebrum) és a tüdő többszörös, ismétlődő, 5 μm-es szakaszait hematoxilinnal és eozinnal festették, és A. Markina (Fehér Fang Állatorvosi Klinika, Moszkva, Oroszország) helyileg megvizsgálta, és átvizsgálta (Panoramic MIDI II szkenner segítségével, 3DHistech Ltd., Budapest, Magyarország) és D. McAloose távolról vizsgálta a CaseViewer szoftver (3DHistech Ltd.) segítségével. Enyhe vagy közepesen súlyos, multifokális, nem szupportáló, lymphoplasmacyticus agyhártya és perivaszkuláris gyulladás volt jelen az agyban. A gyulladás az enyhe vagy mérsékelt demielinizáció és a fehérállomány vakuolizációjának multifokális területeivel, valamint az enyhe multifokális gliosiszal társult. A fertőzésre jellemző víruszárványokat gyanítottuk, de nem erősítették meg (a kép rögzítése/felbontása és a sejtek részletei alacsonyabbak voltak, mint az optimálisak nagy [400 × és 630 ×] nagyítás esetén). A gyulladás mintázata és típusa, különösen a perivaszkuláris limfoid mandzsetta és a fehéranyag demielinizációja, az azonosítható zárványok hiánya ellenére erősen sugallják a CDV fertőzést. A tüdő, a nyirokcsomó vagy a vese szakaszain nem figyeltek meg jelentős szövettani elváltozásokat.

A CDV-vel fertőzött kutyák általában felső légúti betegségben jelentkeznek, pyrexia, dermatitis, hyperkeratosis vagy enteritis szisztémás jeleivel vagy anélkül (Greene és Appel 2006). A neurológiai jelek gyakran következnek, de nem minden esetben vannak jelen, bizonyos vírustörzseknél gyakrabban fordulnak elő (Summers és mtsai 1984). A vad leopárd csak neurológiai jelekkel jelentkezett előttünk; nem volt légzőszervi vagy szisztémás betegség. Hasonlóképpen, a CDV-fertőzésnek megfelelő elváltozásokat csak az agyszövetekben találtak (bár immunhisztokémia és in situ hibridizáció, amelyek más vírusokban kimutathatták a vírust, nem álltak rendelkezésre). Vírusos amplikonokat detektáltak az agyban, de a tüdőszövetben nem. Nem tudjuk, hogy a légzés vagy a szisztémás tünetek előfordulhattak-e a fertőzés korábbi szakaszában, vagy a betegség neurológiai szövetekre korlátozódott-e. A viselkedési rendellenességek lehetővé tehetik a szabadon mozgó macskaféléknél a neurológiai esetek kimutatását, ami a szisztémás betegségek alulrögzítéséhez vezethet. A hámszövet fertőzése a szisztémás betegség során azonban döntő fontosságú a CDV átvitel szempontjából (Sawatsky és mtsai 2012); ezért a vadmacskafélékben a CDV patogenezise fontos epidemiológiai következményekkel jár és indokolja a vizsgálatot.

A vad FEL-ek kitettsége és legalább egy egyed halálozása fontos megállapítás, tekintettel a kis populációk sztochasztikus eseményekre való érzékenységére. A fenyegetett húsevők populációja általában túl kicsi ahhoz, hogy fenntartsák a kórokozókat, például a CDV-t, amelyek rövid ideig tartó fertőzéseket okoznak, ami szükségessé teszi a nagyobb mennyiségű víztározó gazdaszervezetből való átterjedést (Woodroffe 1999). A Primorskii Krai régióban a potenciális víztározó populációk közé tartoztak a házi kutyák és a bőséges vad mezokarnivorok, például a sable (Martes zibellina), a mosómedve (Nyctereutes procyonoides) és az ázsiai borz (Meles leucurus). A CDV fertőzéseit Oroszországban is rögzítették az amur tigrisek között, köztük legalább egy tigrist, amely közel volt a FEL korlátozott tartományához (Quigley et al. 2010; Seimon et al. 2013). A CDV veszélye fokozza a leopárdok további vadon élő populációinak létrehozását, amelyek biztosítékot nyújtanak a jövőbeli járványok elleni védelemre, vagy élőhely-folyosók létrehozása az új területek gyarmatosításának elősegítésére a természetes elterjedés révén.

Ezt a projektet a Morris Animal Foundation (D13Z0-041), az Állatkert Boise Conservation Fund, Biotechnológiai és Biológiai Tudományok Kutatási Tanácsa, az Orosz Földrajzi Társaság és a Wildlife Conservation Society finanszírozta. A munkát az Orosz Föderáció Természeti Erőforrások és Környezetvédelmi Minisztériuma, valamint az Állami Természeti Bioszféra Rezervátum „Kedrovaya Pad” és a „Leopard Földje” Nemzeti Park Egyesült Igazgatóságának munkatársainak támogatása tette lehetővé az autonóm, non-profit szervezet „távol-keleti leopárdok”. Ezúton szeretnénk köszönetet mondani Anastasia Markinának („White Fang” Állatorvosi Klinika, Moszkva, Oroszország) a kórszövettani vizsgálat elvégzésében nyújtott segítségéért. Köszönet illeti Viktor Storozhukot, Aleksandr Rybint és Viktor Kuzmenkót is a leopárd elfogásának és gondozásának felügyeletéért.