12. labor: Staphylococcus és Streptococcus

  • Közreműködött: Nazzy Pakpour és Sharon Horgan
  • Adjunktus (biológiai tudományok) a Kaliforniai Állami Egyetemen

1. NAP:

Hogyan azonosíthatjuk a gram-pozitív Staphylococcus és Streptococcus baktériumokat?

biológia

Ebben a laboratóriumban kísérleteket fogunk végezni a következő fajok azonosítására:

  • Staphylococcus aureus: az ember számára a leginkább patogén; bőrfertőzést és ételmérgezést okozhat, de megtalálható a nasopharynx mikrobiotájában is
  • Staphylococcus epidermidis: a bőrünk normál flórájának része, de opportunista fertőzéseket okozhat
  • Staphylococcus saprophyticus: húgyúti fertőzéseket okoz
  • Staphylococcus simulans: a bőrünk normál flórájának része, de opportunista fertőzéseket okozhat
  • Streptococcus pyogenes: megtalálható az emberi bőrön és különféle fertőzéseket okozhat (torokfájás, bőr)
  • Streptococcus pneumoniae: a nasopharynx mikrobiotájában található, tüdőgyulladást és agyhártyagyulladást okozhat
  • Streptococcus agalactiae: a gasztrointesztinális és urogenitális traktus mikrobiotájában található, újszülöttkori fertőzéseket okozhat

MANNITOL-SÓ AGAR TÁBLA (MSA)

Gram-pozitív baktériumok (pl. Staphylococcus) szelektív. Mannit fermentáció patogén staphylococcusok, például S. aureus és S. simulans által. jelzi, hogy az agar táptalaj vörösről sárgára változik.

SZELEKTÍV SZER: NaCl (só)

DIFFERENCIÁLIS SZER: mannitcukor fermentáció

MUTATÓ: Fenolvörös

IZOLJÁLJA A BAKTEREKET AZ ORRÁTÓL:

Ebben a laboratóriumban arra kérik, hogy különítse el a baktériumok különféle fajait a test különböző részeiből. Az ezt követő biokémiai tesztek megmutatják a test mikrobiotája közötti változékonyságot. Ebben a munkamenetben a Staphylococcus baktériumokat izolálja az orrából, a Streptococcusokat pedig a torkából.

1. A laboratóriumi partnerrel végzett munka során gyűjtsön két MSA lemezt (1. lemez az orrmintákhoz, a második lemez az adott baktériumfajokhoz)

2. Használjon steril pamutvégű tampont a MÉLYSÉG mintájának gyűjtésére az orrába.

3. Csúsztassa aszeptikusan az orrmintáját (NEM SFIC, NEM JOG) az első MSA lemez felére. Inkubáljuk 37 ° C-on

4. Hurkot használva aszeptikusan csíkozzon (NEM SFIC, NEM JOG) az előírt három baktériumfajt az MSA 2. lemezén. Inkubáljuk 37 ° C-on.

Összehasonlítja a növekedést a három szakasz között, ezért győződjön meg arról, hogy a csíkok azonos méretűek-e.

VÉR AGAR TÁBLA (BAP)

Tápanyagokban gazdag; baktériumok és gombák mintákból történő kinyerésére használják, és képesek meghatározni a hemolitikus mintázatokat. Tányérjaink juhvérből készülnek.

SZELEKTÍV AGENT: nincs

DIFFERENCIÁLIS SZER: hemolízis (a vörösvértestek emésztésének/lebontásának képessége)

Az α-hemolízis csak a vörösvértestek részleges lízisét idézi elő, és zöldesbarnának tűnik, halo nélkül. Az alfa hemolízist a baktériumok által termelt hidrogén-peroxid okozza, amely a hemoglobint zöld methemoglobinná oxidálja (pl. Streptococcus viridans és S. pneumoniae)

A β-hemolitikus aktivitás megmutatja a kolóniát körülvevő vörösvérsejtek lízisét és teljes emésztését, a legtöbb kórokozó (pl. Streptococcus pyogenes)

A γ-hemolízis nem hemolitikus (Streptococcus salivarius)

6. Gyűjtsön össze egyetlen BAP lemezt.

7. Ossza fel a BAP lemezt felére. Steril tamponnal gyűjtsön mintát partnere torkából, és aszeptikusan csíkozzon a lemez egyik oldalán.

8. Ezután partnere összegyűjt egy mintát a torkából, és aszeptikusan csíkozja a lemez másik oldalára. Inkubáljuk 37 ° C-on.

A KÖVETKEZŐ OSZTÁLY, AJÁT TÁBLÁZATként MEGTÉTELE:

9. Osszon három BAP lemezt felére, és steril törlőkendővel aszeptikusan készítsen mindkét oldalon egy baktériumfaj pázsitját, az alábbi kép szerint.

10. Helyezzen minden lemezre megfelelő antibiotikum korongot. Inkubáljuk 37 ° C-on.

11. Hurok segítségével aszeptikusan csíkozzon (NEM SFIC, NEM TENGELY) a három baktériumfajt egy véragar lemezre. Inkubáljuk 37 ° C-on.

A Streptococcus agalactiae CAMP-pozitív és a Streptococcus pyogenes CAMP-negatív megkülönböztetésére szolgál. A β-hemolitikus által termelt β-lizin

A Staphylococcus aureus szinergikusan hat a Streptococcus agalactiae-val, hogy fokozott hemolízist eredményezzen a két tenyészet közötti régióban. A

szinergista zóna más Streptococcusokban nem figyelhető meg.

TÁBOR VIZSGÁLAT:

12. Győződjön meg róla, hogy minden csíkját felírta a BAP lemezre a CAMP teszt elvégzéséhez. Azok a baktériumok, amelyekre szükséged lesz ehhez a vizsgálathoz, az egyes asztalok elején található állványon vannak. Hurokkal csíkolja a Staphylococcus aureust egy egyenes vonalban a BAP lemez közepén.

13. Hurokkal csíkolja át a Streptococcus agalactiae-t kontrollként merőlegesen a S. aureus-csíkra, de ne érjen hozzá.

14. Hurokkal hasonló módon csíkolja át a másik oldalon található Streptococcus pyogenes-t, és inkubálja 37 ° C-on (CO2 nélkül).

2. NAP:

NYÚLPLAZMA VIZSGÁLAT

A Staphylococcus patogén és nem patogén tagjai megkülönböztetésére szolgál. Az exoenzim koaguláz lehetővé teszi az átalakulását

fibrinogénből fibrinné oldhatatlan alvadék képződik. A Staphylococcus aureus általában koaguláz-pozitív. A koaguláz szorosan kötődik az S felületéhez.

aureus és vérével érintkezve fibrinnel bevonhatja a felületét. A fibrin alvadék megvédi a baktériumot a fagocitózistól és a

házigazda. A vér S. aureus fertőzése, ha nem kezelik, halálhoz vezet.

1. Laboratóriumi partnereivel együttműködve rögzítse a munkalapra a BAP, MSA és CAMP lemezekre vonatkozó eredményeket.

2. Szerezzen KÉT koaguláz kémcsövet.

3. A kémcsövet aszeptikusan oltsuk be a következőkkel:

  • egy extra nagy hurok az orrmintádból (CSAK SÁRGA KOLÓNIA!)
  • A baktériumok a rendelkezésére bocsátott lemezről

4. Aszeptikusan oltsa be a másik kémcsőjét

  • B baktériumok a rendelkezésére bocsátott lemezről

5. Óvatosan keverje össze és inkubálja 37 ° C-on.

HARDY StaphTEX KÉK KIT:

5. Jelölje a HARDY StaphTEX Blue Kit három reakcióköréből a +, - és ?

6. Fordítsa meg és keverje össze a HARDY StaphTEX Blue Kit latex reagensét.

7. Nyomjon 1 csepp újraszuszpendált latex-reagenst a tárgylemezen lévő 3 reakciókörre.

8. Tegyen a pozitív kontroll egy cseppjét egy másik körbe. Tegyen egy csepp negatív kontrollt egy másik körbe a CSeppek érintése nélkül.

9. Egy fa applikátor pálcával vigye fel a (?) Reakciókörbe ugyanazokat a baktériumokat, amelyeket a 3. lépésben használt, és keverje össze.

10. Külön fakapaccsal keverje össze a reagenseket finoman a (+) és (-) reakciókörön belül! Ügyeljen arra, hogy a keveréket elterítse, hogy a kör nagy részét lefedje, mivel ez megkönnyíti a reakció láthatóságát.

11. Óvatosan, 20 másodpercig ringassa a csúsztató kártyát a keverék keverése érdekében (kerülje, hogy más reakciókörökbe kerüljön). Jegyezze fel az eredményeket a munkalapra.

A Salmonella typhi tífuszt okoz, míg a Salmonella paratyphi a betegség enyhébb formáját. George Widal francia bakteriológus (1862-1929) kidolgozta a Widal tesztet a kettő megkülönböztetésére. A Widal teszt egy szerológiai teszt, amely az elejtett Salmonella typhi szuszpenzióját használja antigénként az anti-Salmonella typhi antitestek jelenlétének kimutatására a beteg szérumában. Noha a Widal teszt használata a fejlett országokban csökkent, a diagnosztikai eszközt továbbra is használta a fejlődő országokban.

Az antitest-titer alacsony a baktériumok fertőzésének első hetében, és az idő múlásával lassan emelkedik. Bármely más gram-negatív baktériummal történő fertőzés hamis pozitív eredményt adhat a keresztreaktivitás miatt. A diagnózis megbízhatóságának biztosítása érdekében a betegvizsgálatokat párosított szérummintákban nyújtják be (az első tesztet korán, a második tesztet 2 héttel később végzik).

SZÉLES AL TESZT:

12. Jelölje meg 8 kúpos csövet 1: 20,1: 40, 1:80, 1: 160, 1: 320, 1: 640, 1: 1280 és negatív kontrollt.

13. Pipettázó segítségével minden csőhöz adjon 500 μl steril sóoldatot.

14. Szerezzen be oktatójától 1:10 arányú hígítást a szérumból (antitesteket tartalmazó betegminta).

15. Tegyen 500 μl páciensszérumot az 1:20 arányú csőbe, ujjvortexbe.

16. Vegyünk 500 μl-t az 1:20 arányú csőből, és pipettázzunk az 1:40 arányú csőbe, ujjunkörvénybe.

17. Vegyen 500 μl-t az 1: 40-es csőből, és pipettázzon az 1: 80-as csőbe, ujjvortexben.

18. Vegyen 500 μl-t az 1:80 arányú csőből, és pipettázzon az 1: 160-as csőbe, ujjvortexbe.

19. Vegyen 500 μl-t az 1: 160-as csőből és pipettázzon az 1: 320-as csőbe, ujjvortexbe.

20. Vegyen 500 μl-t az 1: 320-as csőből és pipettázzon az 1: 640-es csőbe, ujjvortexbe.

21. Vegyen 500 μl-t az 1: 640-es csőből és pipettázzon az 1: 1280-as csőbe, ujjvortexben.

22. Vegyen 500 μl-t az 1: 1280-as csőből és dobja ki.

23. Adjon minden csőhöz 500 μl hőöléssel megölt HD S. typhi flagella antigént, BESZÁMOLVA a beteg szérum eredeti 1:10 hígítását és a negatív kontrollt.