Összefüggés a közös alsó genitális traktus mikrobák és a magas kockázatú emberi papillomavírus fertőzés között

1 Klinikai laboratóriumi osztály, Minhang Kórház, Fudan Egyetem, No. 170 XinSong Road, Sanghaj 201199, Kína

2 Szülészeti és Nőgyógyászati Osztály, Minhang Kórház, Fudan Egyetem, No. 170 XinSong Road, Sanghaj 201199, Kína

Absztrakt

Háttér. A magas kockázatú humán papillomavírus (hr-HPV) fertőzés a méhnyakrák szükséges oka. Ugyanakkor más általános alsó nemi traktus mikrobák növelhetik a hr-HPV fertőzést és a hozzájuk kapcsolódó méhnyak citopátiát. Mód. Ennek a hipotézisnek a megerősítéséhez 826 felnőtt páciensből nyaki kefe és hüvelyi tampon mintákat gyűjtöttek, akiket valós idejű PCR-vizsgálattal hr-HPV-pozitív (254) és negatív (572) csoportba osztottak. A nyaki mintákat megvizsgáltuk Ureaplasma parvum (FEL), Ureaplasma urealyticum (UU), és Chlamydia-fertőzés (CT) PCR analízissel. A hüvelyi szekréciót kimutatták Trichomonas vaginalis (TÉVÉ), Candida spp. és bakteriális vaginosis (BV) hagyományos vizsgálattal. Eredmények. A hr-HPV-pozitív nők körében UP-t 51,6% -nál, UU-t 15,4% -nál, CT-t 15,7% -nál találtak., Candida spp. 11,0% -ban, a TV 3,1% -ban, a BV pedig 20,5% -ban. A hr-HPV-negatív csoportban az UP pozitív volt 36,2% -ban, az UU 8,6% -ban, a CT 4,0% -ban, Candida spp. 12,4% -ban, a TV 0,2% -ban és a BV 7,0% -ban. A többváltozós logisztikus regresszióanalízis korhoz igazítva azt mutatta, hogy az UU (OR, 1,757), UP (OR, 1,804), CT (OR, 3,538), BV (OR, 3,020) és a TV (OR, 14,109) rizikófaktor volt órában -HPV fertőzés (

). Következtetés. Ezek a mikrobák krónikus nyaki gyulladást válthatnak ki, amely károsíthatja a nyálkahártya gátat és az immunvédelmet a hr-HPV fertőzésének elősegítése érdekében.

1. Bemutatkozás

2. Tanulmányterv

2.1. Tárgyak kiválasztása

Összesen 826 nőbeteget vontak be ebbe a vizsgálatba, akik 2019 januárja és májusa között vettek részt a Fudan Egyetem (Sanghaj, Kína) Minhang Kórház ambulanciáján. A résztvevők kiválasztása egymást követő mintavétellel történt. A felvételi kritériumok a következők voltak: a nők szexuális tapasztalattal rendelkeztek; 20 és 70 év közöttiek. Kizárási kritériumok a terhesség, az alsó nemi szervek diszpláziája vagy rosszindulatú daganatai, a méhnyakrák kórtörténete, az előző 3 napban hüvelyi gyógyszerrel kezelték, valamint egyéb akut vagy krónikus nongynecológiai betegségek [8, 9]. Ezt a tanulmányt a Fudani Egyetem Minhang Kórházának Etikai Bizottsága hagyta jóvá. Minden résztvevő írásos tájékozott beleegyezést kapott.

2.2. HPV-DNS teszt

A nyaki hámlasztott sejteket a citokefével gyűjtöttük össze, és 2 ml folyadékalapú citológiai táptalajba helyeztük (Jianyou Medical Tech Co. Ltd., Jiangsu, Kína). A méhnyílást steril pamut törlővel tisztítanák, ha túlzott nyálka és váladék képződik. A mintákat kivontuk és kimutattuk hr-HPV DNS-re a cobas® 4800 rendszer (Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, USA) segítségével, amely teljesen automatizált mintakészítést és 14 órás HPV valós idejű polimeráz láncreakció (PCR) amplifikációt eredményezett. L1 gének (HPV-16, -18, -31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66 és -68). A TaqMan szondákat 4 különböző fluoreszcens festékkel jelöltük a HPV-16, a HPV-18, a másik 12 óra-HPV és az emberi β-globin gén, ill. Az ember β-globin gént alkalmaztak a teljes kimutatási folyamat monitorozására minőségellenőrzésként [10].

2.3. BV, TV és Candida spp

A hüvelyi tamponmintákat a hátsó hüvelyi fornix-ből vettük és 0,5 ml steril fiziológiás sóoldatba helyeztük. TV és Candida spp. mikroszkópos vizsgálattal (100x és 400x) detektáltuk 15 percen belül. [11] Candida spp. kezdő sejteket és hifákat Gram-festéssel detektáltunk. A BV-t a Nugent kritériumai alapján diagnosztizálták egy Gram-festett tárgylemez eredményeinek felhasználásával [12]. A ≥ 7 Nugent-pontszámot BV-ként határoztuk meg. Az összes mintát két tapasztalt citotechnológus függetlenül értékelte, és a végső eredményeket mindkettő konszenzusa alapján állapították meg.

2.4. UU, UP és CT DNS kimutatása

Nyaki mintákat gyűjtöttünk az UU, UP és CT gének kimutatására. A CT-DNS-t genomkivonó készlettel extraháltuk, és valós idejű PCR-készlettel amplifikáltuk a gyártó utasításai szerint (Fosun Pharma Co. Ltd., Shanghai, Kína). Az UU és az UP detektálását egy korábban publikált, valós idejű PCR vizsgálattal végeztük, Liu és mtsai. [13]. Az amplifikált termékek szennyeződésének megakadályozása érdekében dUTP és UNG (uracil-N-glikoziláz) enzimeket alkalmaztunk. Ezenkívül exogén belső folyamatkontrollt (gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz gént) hajtottak végre a PCR-gátlók által okozott „hamis negatív” eredmények figyelemmel kísérésére és elkerülésére.

2.5. Statisztikai analízis

Az összes statisztikai elemzést az R szoftver 3.5.1 verziójával hajtottuk végre. A betegek életkorát átlag ± szórásként (SD) fejeztük ki, a különbségeket a t-teszt. A különböző korcsoportok közötti Hr-HPV prevalenciát chi-négyzet (χ 2) teszt. Többváltozós logisztikus regressziót alkalmaztunk a hr-HPV fertőzés és más mikroorganizmusok (UU, UP, CT) korrelációjának meghatározására, Candida spp., TV és BV). A kockázat kiszámításához a nyers relatív kockázati arányt (OR) a megfelelő 95% -os konfidencia intervallummal (CI) és az életkorral korrigált relatív kockázati hányaddal használtuk. Egy érték

jelentős különbség as

3.2. A Hr-HPV és más alsó genitális traktus mikrobák elterjedtsége

826 nő közül 254-ben detektáltak hr-HPV-t. A genotípusokat a következőképpen mutattuk ki: a HPV-16 pozitív volt 97-ben (11,7%), a HPV-18 pozitív volt 22-ben (2,7%), és a többi 12 hr-HPV genotípus 135-ben (16,3%). UP, UU, CT, Candida spp., TV és BV pozitív volt 338 mintában (40,9%), 88 mintában (10,7%), 63 mintában (7,6%), 99 mintában (12,0%), 9 mintában (1,1%) és 92 mintában (11,1) %), ill. A fenti alsó nemi traktus mikrobák közül az UP volt a leggyakoribb ().

3.3. Hr-HPV és más alsó genitális traktus mikrobák koinfektálása

A hr-HPV-pozitív csoportban az UP-t 51,6% -nál, az UU-t 15,4% -nál, a CT-t 15,7% -nál találták., Candida spp. 11,0% -ban, a TV 3,1% -ban, a BV pedig 20,5% -ban. A hr-HPV-negatív nők közül az UP 36,2% -ban, az UU 8,6% -ban, a CT 4,0% -ban volt jelen, Candida spp. 12,4% -ban, a TV 0,2% -ban és a BV 7,0% -ban (2. táblázat). Az UP, UU, CT, TV és BV prevalenciája a hr-HPV-pozitív csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a HPV-negatív csoportban (). De az elterjedtsége Candida spp. nem volt szignifikáns különbség a két csoport között (). Az adatokat többváltozós logisztikai regresszióanalízissel értékeltük, amelyet kizárólag az életkorhoz igazítottunk. És azt mutatta, hogy az UU (OR, 1,757), UP (OR, 1,804), CT (OR, 3,538), BV (OR, 3,020) és a TV (OR, 14,109) a hr-HPV fertőzés rizikófaktorai ().

Jelentős különbség as

4. Megbeszélés

Az életkor-specifikus prevalencia görbe azt mutatta, hogy a hr-HPV fertőzések először a 30 évnél fiatalabb nőknél értek el csúcsot, majd az életkor előrehaladtával csökkentek, de a görbe 50 évesen ismét emelkedett, és 60 éves vagy annál idősebb csúcsot ért el. Hasonló volt Herrero és munkatársai jelentéseivel. [16]. A legfiatalabb nők első csúcsa összefüggésben lehet a magas szexuális aktivitással vagy több szexpartnerrel. Sok kutató azt találta, hogy a legtöbb HPV-fertőzés 1-2 év alatt kimutathatatlanná vált. Feltehetően a vírust a gazda sejtek immunitása tisztította, vagy hosszú távú látenciára szuppresszálta [16, 17]. A második elterjedt csúcs a posztmenopauzás nőknél volt, amit más kutatók nem figyeltek fel. Ennek oka lehet, hogy adataik nem tartalmaztak elegendő idősebb nőt. A második csúcs lehetséges magyarázata az lehet, hogy az idősebb nők intenzívebben ki voltak téve a HPV-nek, csökkent immun clearance-nek és egy látens HPV-fertőzés reaktivációjának [16]. A jövőbeni tanulmányoknak az immunszuppresszió markereire, a látens HPV aktiválásának tesztjeire, valamint az idősebb nők és férfi partnereik szexuális gyakorlatára kell összpontosítaniuk.

Az általános nemi szervi traktus közös mikrobái és a HPV-fertőzés, UU, UP, CT, TV közötti összefüggés feltárása, Candida spp. és BV-t 826 nyaki és hüvelyi mintában mutattak ki. Kivéve Candida spp., ezek a mikrobák mind nagyobb gyakoriságot mutattak a HPV-pozitív nőknél, mint a HPV-negatív nők. A többszörös regressziós elemzés azt mutatta, hogy az UU, az UP, a CT, a TV és a BV mind kockázati tényező a hr-HPV fertőzés szempontjából.

A CT és a HPV fertőzés közötti összefüggést mások megállapították. Adataink a CT-pozitív nőknél a hr-HPV fertőzés kockázatának körülbelül négyszeresét mutatták ki a CT-negatív csoporthoz képest, jelezve a CT szűrésének és kezelésének szükségességét hr-HPV-pozitív nőknél. Felvetették, hogy a CT-fertőzés gyulladás és epitheliális citopátia révén növelheti a méhnyak érzékenységét a HPV iránt, megkönnyítve ezzel a virionok bejutását; az immunválasz figyelembe vétele kulcsfontosságú volt a HPV-fertőzés kiürüléséhez. A krónikus méhnyak-gyulladás csökkentheti a gazdasejt által közvetített immunitást azáltal, hogy növeli a szabad gyökök termelését, ami a HPV perzisztenciájának kedvezőnek tűnt [8]. A CT-fertőzést közegészségügyi problémaként bizonyították, amely károsíthatja a nyálkahártya gátját, lehetővé teszi a HPV behatolását a bazális hámrétegbe, megzavarhatja az immunválaszt, növelheti a HPV fertőzését és a karcinogenezis kockázatát [24]. Néhány korábbi tanulmány igazolta a fokozott CT-fertőzést és a CT HPV-vel való együttfertőzését a szexuálisan aktív nőknél. Ezenkívül a CT-fertőzésben szenvedő nőknél a hr-HPV fertőzés időtartama csaknem kétszerese volt, ami további támogatást nyújtott a CT és a HPV perzisztencia közötti korrelációhoz [6, 8, 24].

Beszámoltak arról, hogy a TV gyulladást válthat ki a cervicovaginalis epitheliumban, megzavarhatja a hám integritását, megkönnyítheti a vírus hozzáférését az alatta lévő rétegekhez, és tartós HPV fertőzést eredményezhet [25]. Ghosh és mtsai. [26] megállapította, hogy a TV-vel és a hr-HPV-vel együtt fertőzött nőknél nagyobb volt az invazív méhnyakrák kockázata. Emellett a HPV-16 és a TV között jelentős összefüggést tártak fel egy 324 tanzániai vidéki betegen végzett kutatás során. A TV-vel fertőzött nők 6,5-szer nagyobb eséllyel kaptak HPV-16-ot, mint a TV nélküli nők (50% vs. 13,3%) [27]. Adataink azt is megállapították, hogy a TV-pozitív nőknél a hr-HPV fertőzés kockázata 14,109-szer nagyobb, mint a TV-negatív nőknél, ami szoros összefüggést mutat a TV és a 14 h-HPV genotípus fertőzés között.

Ebben a vizsgálatban a BV-ről azt is kiderült, hogy hr-HPV fertőzéssel jár. Összhangban volt Zhang és mtsai jelentéseivel. [9] A BV-t a hüvelyflóra elváltozásaként jellemzik: a Lactobacillus spp. és a fakultatív anaerobok vagy anaerob baktériumok egyidejű növekedése, beleértve a Gardnerella vaginalis, Prevotella fajok, és Porphyromonas faj. A BV befolyásolhatja a citokinek és kemokinek, az antimikrobiális fehérjék és az immunsejtek populációját a hüvelyben, ami szövetkárosodást eredményezhet, és fokozhatja a HPV onkogén potenciálját [28]. King és munkatársai szerint [29] a HPV eltávolítása késleltetett volt a BV-ben szenvedő nők körében, ami a HPV-események növekedéséhez vezetett. Ezt követően végül nyaki dysplasia és neoplasztikus elváltozások alakultak ki. Azt is kimutatták, hogy a BV, függetlenül a korábbi vagy a jelenlegi fertőzésektől, összefüggésbe került az incidens HPV-fertőzésekkel. Mivel a BV jelentős változásokat idézhet elő a hüvelyi környezetben, és veleszületett védekezőképesség-degradációt okozhat, hihető volt figyelni a zavart baktériumökológiai rendszerre a HPV és a nyaki karcinogenezis előfordulásának ellenőrzésére.

Összegzésképpen elmondható, hogy a hr-HPV-pozitív nőknél az UU, az UP, a CT, a TV és a BV magas előfordulását találták, amelyek a hr-HPV fertőzések rizikófaktoraként jelentek meg. Ezek az alsó nemi traktus mikrobái méhnyak-gyulladást indukálhatnak, növelhetik a szabadgyökök képződését, károsíthatják a nyaki hámgátat és csökkenthetik az immun clearance-et, hogy elősegítsék a hr-HPV fertőzését. Hasznos lehet ezeket a mikrobákat szűrni felnőtt nőknél.

Adatok elérhetősége

A vizsgálat eredményeinek alátámasztására használt adatok kérésre a megfelelő szerzőtől állnak rendelkezésre.

Etikai jóváhagyás

Ezt a tanulmányt a Fudani Egyetem Minhang Kórházának Etikai Bizottsága hagyta jóvá.

Összeférhetetlenség

A szerzők nem jelentenek összeférhetetlenséget.

A szerzők közreműködése

A PPL és a ZZ hozzájárult a tanulmányok tervezéséhez, az adatgyűjtéshez, a finanszírozás megszerzéséhez és a kéziratok elkészítéséhez. Az FZ és az XQX feladata a statisztikai elemzés. JX volt felelős az adatgyűjtésért. QW volt felelős az adatok gondozásáért. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot.

Köszönetnyilvánítás

A szerzők köszönetet mondanak Shilong Zhang-nak (Kínai Fudani Egyetem, Minhang Kórház központi laboratóriuma) a statisztikai elemzésben nyújtott segítségéért. Ezt a munkát a Nemzeti Magas Technológiai Kutatási és Fejlesztési Terv (2015AA021107-035), a Minhang Kórház, a Fudani Egyetem projekt (2018MHJC04) és a Minhang kerületi Természettudományi Kutatási Projekt (2019MHZ100) támogatta.