A propolisztermék hatása a takarmányalapú étrendet fogyasztó bivalyok emészthetőségére és kérődző paramétereire

Papír

Teljes cikk
Ábrák és adatok
Hivatkozások
Idézetek
Metrikák
Engedélyezés
Újranyomtatások és engedélyek
PDF

Absztrakt

Ez a tanulmány értékelte a propolisz termék (LLOS) hatását a takarmánybevitelre, a szárazanyagra (DM) és a tápanyagok teljes emészthetőségére, bendőjellemzőire és mikrobiális hatékonyságára durva takarmány alapú étrenddel (70% Cynodon spp széna és 30% koncentrátum) táplált bivalyokban. 4 × 4-es latin négyzet alakú elrendezéssel négy keresztezett bivaly (Murrah x Jafarabadi) koronát (519,0 ± 13,0 kg testtömeg - testtömeg-súly) négy kezelést tápláltak három LLOS-koncentrációval: Kontroll (LLOS nélkül), LLOS B3 + (0,272 mg/kg) g flavonoid krizin ekvivalens), LLOS C1 (0,092 mg/g flavonoid krizin ekvivalens) és LLOS C1 + (0,184 mg/g flavonoid krizin ekvivalens). Az étrend megfogalmazása 60% összes emészthető tápanyagot (TDN) és 11% nyersfehérjét (CP) tartalmazott. A kísérleti étrendek között nem tapasztaltunk különbséget a DM bevitelében (P> 0,05). Az LLOS C1-vel táplált kormányoknál a kezelések között az ammóniás nitrogén (N-NH3), a szilárd és folyékony áteresztési sebesség és a mikrobiális hatékonyság figyelhető meg. Ebben a tanulmányban az LLOS C1 javította a takarmány-étrend hatékonyságát a bivalykormányoknál.

Bevezetés

Buffalo (Bubalus bubalis) a takarmányozási programok elsősorban magas takarmány-étrenden alapulnak. Valadares Filho és Pina (2006) azt javasolta, hogy a takarmányon alapuló táplálékkal etetett állatok növeljék a bendő fermentációját, valamint a metán prekurzoraként szolgáló H2 és formiát termelési sebességét. A magas takarmányadaggal táplált állatok az étrendi energia 13% -át szabadíthatják fel metánként (Lana et al., 1998). Az ionofort promóterként használták, amely növeli a takarmányozás hatékonyságát és megváltoztatja a bendő fermentációs mintáit, ami csökkenti a metántermelést. Oliveira javasolta a propolisz kérődzők étrendjének alternatívájaként az ionoforok alkalmazását et al. (2006) és ifjabb Stradiotti. et al. (2004). Lu et al. (2004) és Yang et al. (2007) a propolisz antimikrobiális tulajdonságainak előnyeit javasolta, különösképpen a gram-pozitív baktériumokkal szemben. Az Európai Unió rendeletei jelenleg korlátozzák az ionoforok használatát az állati étrendben, azonban propolisz használható ezen tej- és húspiaci követelmények kielégítésére. Mindazonáltal a közelmúltig Brazíliában közzétett kutatások nem mutatták ki az állati étrendben használható propolisz standard koncentrációját, sem a hatóanyagok kivonásakor alkalmazandó alkoholkoncentrációt, sem az állati takarmányban felhasználandó propolisz adagolását. . Így különbségek vannak az egyes kísérletek eredményei között.

A propoliszból készült termék szabványosítása érdekében száraz propolisz kivonatot (LLOS *) (PI 0605768-3) állítottak elő és adtak hozzá a bivaly diétához. Kromatográfiás technika nagy hatékonyságú (HPLC) mennyiségileg meghatározott antimikrobiális aktivitású (Prado, 2005) és antioxidáns aktivitású fenolvegyületek (Cottica) et al., 2011). Prado et al. (2010b) korábbi tanulmány a propolisz termékeit a bivaly diétában tesztelte, a legígéretesebbek az LLOS C1 (propolisz koncentráció C és alkoholtartalom 1) voltak, amelyet az LLOS B3 követett (propolisz B koncentráció és alkoholtartalom 3). Ezért ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy értékelje az LLOS termék hatását a propolisz különböző koncentrációival; LLOS B3 +, LLOS C1, LLOS C1 + a Cynodon spp. tápanyagfelhasználáson alapuló adag és emészthetőségi kinetika.

Anyagok és metódusok

Négy keresztezett bivaly stee rt (Murrah x Jafarabadi), 519,0 ± 13,0 kg testtömeg (testtömeg), bendő kanüllel felszerelve, 4 × 4 latin négyzet alakú kivitelben, négy kezeléssel és négy 29 napos periódussal. Az állatokat egyedi standokon, betonpadlóval, egyedi etetővel és vízellátással tartották. Az állatokat a Universidade Estadual de Maringá (Parana állam, Brazília) helyi állatbizottságának irányelvei szerint gondozták.

A bivalyokat 70% -ban etették Cynodon ssp széna és 30% tömény étrend 60% összes emészthető tápanyaggal (TDN) és 11% nyersfehérjével (CP) (1. táblázat). A kísérleti étrendek közötti különbség az adalékanyagok (propolisz termékek - LLOS) felvétele volt vagy nem: Kontroll (nincs LLOS); LLOS C1; LLOS C1 +; LLOS B3 +. Az LLOS a propolisz (B és C, 5,0% és 30,0% (w/v) és a víz-alkohol oldatok (1 és 3, 60,0% és 93,8% (v/v)) közötti koncentrációban különbözött a fenolos Az LLOS C1 + kétszerese a fenolos vegyületek LLOS C1-koncentrációja, az LLOS B3 + pedig kétszer a fenolos vegyületek LLOS B3-koncentrációja volt.

Online közzététel:

1. táblázat Az étrend összetétele és kémiai elemzése.

A Franco és Bueno (1999) által kidolgozott módszertan szerint elkészített propolisz-kivonatot vákuumszűréssel rotációs párologtatóban (Buchi, RT 210 modell) alkohol-15% etanol határértékig elosztjuk. Ezután liofilizálással szárítottuk. A méhészetből kapott propolisz-minták az eukaliptusz tartalékán belül találhatók (Eucalyptus sp.) őshonos erdővel körülvéve, alecrim-do-campo (Baccharis dracunculifolia). Az előállítási módszerről, a propoliszról és az oldószer koncentrációjáról további információkat az Országos Ipari Tulajdon Intézet (INPI) szabadalma oltalmaz, PI 0605768-3 szám alatt.

Az LLOS propolisz termék (kivonat + segédanyag) standard adagjának létrehozásához ebben a kísérletben száraz propolisz kivonatot (C1 és B3) állítottunk elő. A két száraz propolisz kivonatot nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával értékeltük (Alliance HPLC-PDA rendszer, Waters Co., Mildford, MA, USA), mennyiségi meghatározásukat és kémiai összetételüket a 2. táblázat mutatja.

Online közzététel:

2. táblázat A propolisz kivonat kémiai összetétele.

A teljes adagot naponta kétszer adtuk két egyenlő adagban, 8.00 és 16.00 órakor, hogy a teljes adag 5–10% -ának megfelelő kúrt biztosítsuk. Mivel az állatokhoz juttatott kivonat mennyisége kicsi volt, mint egy segédanyag (kukoricaliszt) hozzáadása LLOS-nak nevezett kivonattal a térfogat növelése érdekében, megkönnyítve az állatok etetését. Az állatoknak juttatott flavonoid-krizin ekvivalensek napi mennyisége (az LLOS-termékeken keresztül) 0,272 mg/g - LLO B3 +, 0,092 mg/g - LLOS C1 és 0,184 mg/g - LLOS C1 + volt. Alikvot (öt gramm) LLOS-t lemérünk egy higroszkópos papírba, és naponta két adag bendőt adagolunk közvetlenül az etetés után. A napi ürülék szárazanyag-tartalmának meghatározásához öt gramm króm (III) -oxidot (Cr2O3) adtunk minden etetési időpontban.

A teljes kísérlet négy periódusból állt, mindegyik kísérleti időszak 29 napig tartott: 14 nap az állatok adaptálásához, 8 napos mintavétel és 7 napos lemosási időszak. Az egyes mintavételi periódusok elején és végén lemértük a kormányzókat. A sárgamintákat 8.00 órakor gyűjtöttük, és 200 g ürüléket gyűjtöttünk közvetlenül a végbélből 8.00 és 16.00 órakor minden gyűjtési periódus 1. napjától az 5. napig. A székletet és a érceket lefagyasztották a későbbi elemzés céljából.

A bendő hígítási arányait a mintavétel 6. napján értékeltük; 30 g Co-EDTA-t hígítottunk 500 ml desztillált vízben, és az első adagolás előtt bendőbe fecskendeztük (Uden et al., 1980). A bendőfolyadékot (100 ml) bendő kanülön keresztül gyűjtöttük a bendő különböző területeiről. A mérési idő 0.00, 2.00, 4.00, 6.00, 8.00, 10.00, 12.00, 14.00, 16.00 és 24.00 óra volt a reggeli etetés után. A bendő pH-értékét közvetlenül a bendőfolyadék mintavétele után 0,00, 2,00, 4,00, 6,00 és 8,00 órakor mértük. Összesen 50 ml bendőfolyadékot gyűjtöttünk össze, és mértük a Co koncentrációt; 25 ml-t 0,5 ml kénsavval 1: 1 arányban savanyítottunk az N-NH3 koncentráció mérésére; és további 25 ml bendőfolyadékot megsavanyítottunk 6,2 ml metafoszforsavval (25%), hogy meghatározzuk a rövid láncú zsírsavkoncentrációkat. A bendőfolyadék mintákat felcímkéztük, és műanyag zacskókban tároltuk -20 ° C-on.

A bendő mikrobiális termelésének meghatározása céljából a vizeletmintákat spontán vizelés közben gyűjtöttük a gyűjtési időszak 6. napján, körülbelül négy órával az etetés után. A mintákat szűrőpapírral szűrjük. A húgysav kicsapása miatti bendő-purinszármazékok (PD) pusztulásának megakadályozása érdekében 15 ml vizelet-alikvot részt hígítottunk 135 ml 0,036 N kénsavval (H2SO4), és a mintákat jelöltük és 5 ° C-on tároltuk későbbi elemzés céljából. A gasztrointesztinális szilárd kinetikai és bendőfolyadék térfogatának meghatározásához a bendő tartalmát a gyűjtési periódus 7. és 8. napján kiürítettük. A bendő kiürítése 4,00 órával az első etetés után és egy órával a második etetés előtt kezdődött (Huhtanen et al., 2007). Az összes bendő tartalmat kézzel préseltük, a szilárd és folyékony részeket elválasztottuk és megmértük. Az arányos (tömeg/tömeg) szilárd és folyékony mintákat (2,0 kg) összegyűjtöttük a bendő DM meghatározott százalékára. A mintákat 55 ° C-on szárítottuk, és elemzés céljából összekevertük. A bendő kiürítése, bendőminták préselése és a maradék tartalom visszatérése körülbelül 20 perc volt.

A takarmányokat, a hangyákat és az ürüléket minden állat/periódus/étrend esetében 55 ° C-on szárítottuk 72 órán át, és egyedileg őröltük (1 mm). A székletben a krómkoncentrációt atomabszorpciós spektrometriával határoztuk meg nitro-perklóros emésztés után (Kimura és Miller, 1957). A bendőfolyadék mintákat szűrjük az ammónia koncentrációjának meghatározására (Preston, 1995). Az SCFA meghatározásához a mintákat 14 000 xG (4 ° C) hőmérsékleten 40 percig centrifugáltuk. Az elemzést ezután Palmiquist és Conrad (1971) szerint végezték el folyadék-gáz kromatográfiával (Hewlett Packard 5890 II. Sorozat GC) integrátorral (Hewlett Packard 6890 sorozatú injektor) társítva. A kromatográfiás mintaolvasást 100 liter 2-metil-vajsavval dolgoztuk fel fokozatosan mindegyik csőbe 800 liter mintával. A kalibráláshoz és a csúcs azonosításához 76 rövid láncú, ismert koncentrációjú zsírsav-keveréket használtunk.

A bendő koncentrációjának meghatározásához a bendőfolyadék mintákat megolvasztjuk, 3700 xG-n 30 percig centrifugáljuk, és atomabszorpciós spektrometriával mértük (Uden et al., 1980). Hungate (1966) és Colucci (1984) egy rekeszes exponenciális modelljét alkalmaztuk, amely a folyadék áteresztési sebességének és a kobaltkoncentráció görbéinek korrigálását az alábbiak szerint végezte: YCo = A x e (-kl.t); Ahol YCo = koncentráció az időmutatóban t; A = Co koncentráció egyensúly; kl = áteresztési sebesség vagy Co-hígítás; és t = mintaidő. A folyadékfázis dinamikáját Colucci szerint számítottuk et al. (1990): bendőfolyadék-visszatartási idő (h) (TeR) = 1/folyadékok átjárási sebessége (% h) (klCo); bendőfolyadék térfogata (L) (RLV) = a megadott Co mennyiség (mg)/A; A bendőfolyadék sebességét (RFR) (L/h) (TxF) = klCo x RLV és a bendőfolyadék fázis újrafeldolgozási sebességét (TRec) Maeng és Baldwin (1976) szerint számítottuk ki. Ebben az egyenletben a TRec ) = 24 óra/TeR.

Az emésztőrendszer szilárd kinetikai paraméterét Robinson segítségével becsültük meg et al. (1987) számítása, mint: lenyelési arány/nap [ki = (tápanyag lenyelés/bendő tápanyagkészlet) * 100]; átjárási sebesség/nap [kp = (széklet tápanyagkiválasztás/bendő tápanyagkészlet) * 100]; emésztési sebesség/nap [ks = ki - kp]; Szilárd anyagok eltűnési sebessége/nap = [kd = ki + Kp]; és a szilárd anyagok retenciós ideje (óra) = [Rt = 100/Kt].

A vizeletből származó PD-koncentráció megszerzéséhez az allantoin elemzését Chen és Gomes (1992) módszertan alkalmazásával végeztük. A kreatint és a húgysavat a Diagnosztikai Laboratóriumi Központban (CEDLAB, Maringa, Parana State, Brazília) határoztuk meg. A kreatinin-koncentrációt a vizelet térfogatából (L) osztva a napi kreatinin-kiválasztás mmol/kg testtömeg-kilogrammonként 0,75/kreatinin-koncentráció mmol/l-enként. A napi kreatinin kiválasztás (mmol/kg BW 0,75) meghatározásához 0,44 mmol/kg BW 0,75 értéket fogadtak el Chen szerint et al. (1996). A mikrobiális nitrogéntermelést a purin abszorpció mennyiségéből (X mmol/nap) számítottuk, amelyet a PD vizeletürítéséből (Y mmol/nap) becsültünk, a Dipu által leírt egyenlettel számítva. et al., (2006) bivalyok esetében: Y = 0,74X + (0,117 MH 0,75). A 0,74 érték a purint jelenti, amelyet a PD vizelet abszorpciója után nyertek fel, és 0,117 mmol/ttkg 0,75/nap állandó érték, amely az endogén folyadékbevitelből származó PD értéket képviseli. A bendő mikrobiális nitrogénvegyület-szintézisét (Y g N/nap) a purin abszorpciós hányadának (X mmol/nap) a Chen és Gomes (1992) által leírt egyenlet feléből számítottuk: Y = ((X (mmol/nap) x 70) /(0,116 x 0,83 x 1000). Figyelembe véve, hogy 70 a purin N tartalmát jelenti (mg N/mmol); 0,83 mikrobiális purin emészthetőség és 0,116 az összes bendő mikroorganizmus N-purin: N arányát képviseli.

A mikrobiális CP (CPmic) becslést úgy kaptuk, hogy a mikrobiális N szintézist megszoroztuk 6,25-tel, míg a mikrobiális fehérjeszintézis hatékonyságát a következőképpen határoztuk meg: ECPmic (g/100 g) = CPmic (g)/CTND (100 g), amely TNDC = összesen tápanyagok emésztési fogyasztása.

A DM, a hamu, a CP és az éter kivonat (EE) mennyiségét AOAC (1990) határozta meg, és az OM-t úgy kaptuk meg, hogy kivontuk a hamut DM-ből. Az NDF és ADF elemzéseket a Van Soest által leírt módon hajtottuk végre et al. (1991). Az NDF maradványokat és a semleges detergensben oldhatatlan nitrogént (NDIN) a Licitra eljárása alapján határoztuk meg et al. (1996). A TCHO-t az alábbi egyenlettel számszerűsítettük: 100 - (% CP +% EE +% Ash). A nem rostos szénhidrátok (NFC) szintjét TCHO és NDFCP arányok kivonásával kaptuk, az NDFCP-t sejtfal alkotja CP nélkül (Sniffen et al., 1992) .

A statisztikai elemzéseket a SAS programmal (2001) végeztük, a variancia elemzéseket a PROC GLM számította ki. A kezelés átlagának különbségét a Tukey-próbával határoztuk meg, és az I hibatípus kritikus valószínűségi szintjét 0,05-ként határoztuk meg.

Használták a statisztikai modellt: ahol:

Yijk = a k kezelés j periódusra gyakorolt hatásának megfigyelése i állatra = általános állandó változó

Ai = az állat i hatása; i = 4 állat

Pj = a j periódus hatása; j = 4 periódus

Tk = a k kezelés hatása; k = 4 kezelés

eijk = az egyes megfigyelésekhez társított véletlen hiba.

Az SCFA, a pH és az N-NH3 értékeket a minta/idő kísérleti részarányok felosztásával kaptuk. Regresszióanalízist alkalmaztunk az SCFA, a pH és az N-NH3 meghatározására, figyelembe véve a reggeli etetés utáni időt (0, 2, 4, 6 és 8 óra).

Eredmények és vita

Az étrendek között nem figyeltünk meg szignifikáns különbséget (P> 0,05) a DM és a tápanyagbevitel tekintetében (3. táblázat). A DM bevitele 1,56%, az NDF bevitele pedig a BW 0,88% -a volt. Ebben a kísérletben a DM bevitelét közvetítőnek tekintették a hasonló bivalyokkal végzett korábbi vizsgálatokhoz képest. Maeda et al., (2007) 1,4% -os BW-mennyiséget figyelt meg a kukoricaszilázzal etetett bivalyokban három különböző takarmánnyal: koncentrátumarány; 77: 23%, 57: 43% 37: 63%. Prado et al. (2010b) 1,91% BW-t figyelt meg 80: 20% takarmány: koncentrátum arány mellett a kukoricaszilázzal és a Tifton szénával etetett állatokban. Cutrignelli et al., (2007) 1,28% BW-t figyelt meg a kukoricaszilázzal és búzaszalmával táplált bivalyokban, 88: 15% takarmány: koncentrátum.