Nem specifikus reaktív hepatitis a Kanári-szigeteken rekedt delfinekben

Eredeti cikkek

  • Teljes cikk
  • Ábrák és adatok
  • Hivatkozások
  • Idézetek
  • Metrikák
  • Engedélyezés
  • Újranyomtatások és engedélyek
  • PDF

Absztrakt

Ez a cikk a nem specifikus reaktív hepatitis (NSRH) jellemzőit ismerteti a Kanári-szigetek (Spanyolország) partjainál rekedt delfinekben. Az NSRH szövettani megjelenését a Kupffer-sejtek szaporodása, valamint a máj parenchymájában és a portális vagy perivenuláris stromában szétszórt granulociták, valamint limfociták és plazmasejtek jelenléte jellemezte, a hepatocita nekrózis minimális bizonyítéka nélkül vagy anélkül. Az NSRH CD3 + T-limfociták és IgG + plazmasejtek gyulladásos beszivárgásából állt a portális terekben és a máj szinuszoidokban. Az anti-S100 fehérje poliklonális antitest változó számú limfocitával reagált a portális területekről és a máj sinusoidjairól, valamint a Kupffer-sejtekkel és az epevezeték hámsejtjeivel.

teljes

1. Bemutatkozás

A májgyulladást gyakran találták vadon élő és fogságban lévő delfinekben (Baker 1992; Di Guardo és mtsai 1995; Kirkwood és mtsai 1997; Cornaglia és mtsai 2000; Jaber és mtsai 2004). Az ismeretlen okú krónikus májbetegség gyakori betegség a delfineknél. A májelváltozások hepatocita degenerációból, zsíros változásokból és fibrózisból állnak. Ezzel szemben az akut hepatitis a delfinekben táplálkozási vagy környezeti toxinokkal és biológiai ágensekkel, például vírusokkal, baktériumokkal, gombákkal és parazitákkal függ össze. A máj hisztopatológiai változásai általában jelzik az akut hepatitis etiológiáját a delfineknél (Ridgway 1972). Mindezen korábbi vizsgálatok során mind a nem gennyes, mind az interstitialis hepatitis, valamint a szubakut vagy krónikus pericholangitis volt a hepatitis leggyakoribb formája. Néhány, nem specifikus reaktív hepatitis (NSRH) esetről azonban beszámoltak a cetféléknél (Jaber et al. 2004).

A szárazföldi emlősökben az NSRH a krónikus hepatitis egy olyan formája, amelyet a májban elterjedt morfológiai entitásként definiálnak, vagy a korábbi gyulladásos intrahepatikus betegség maradványait, vagy a válaszadásra különféle extrapepatikus betegségfolyamatokra, beleértve a lázas betegségeket, a gyulladásokat a májban. splanchnic ágy vagy coeliákia (Liaw és mtsai 1984; Mansuy 1997; Rothuizen és Van Den Ingh 1998; MacSween 2002; Volta 2008).

A cetfélék a tengeri tápláléklánc tetején vannak; következésképpen egész életük során felhalmozódhatnak a szennyező anyagok a szöveteikben. Számos toxikológiai vizsgálatot végeztek delfinekkel (Corsolini et al. 1995; Jepson et al. 1999, 2005; Bull et al. 2006; Hall et al. 2006; Carballo et al. 2008; Kajiwara et al. 2008), de a máj toxikológiai és hisztopatológiai vizsgálata közötti összefüggéseket nem vizsgálták. A tanulmány célja a Kanári-szigeteken rekedt delfineknél megfigyelt NSRH elváltozásokban bekövetkezett gyulladásos infiltrátumok szövettani változásainak és jellegének elemzése volt, korrelálva az NSRH súlyosságát a buborékban és a májban található számos szennyező anyag szintjével és jelenlétével. egyéb fertőzések és szisztémás betegségek.

2. Anyag és módszerek

2.1. Állatok és kóros vizsgálatok

Összesen 17 (9 hím, 8 nő) 49 palackorrú delfinből (Tursiops truncatus) ebbe a tanulmányba a Kanári-szigeteken rekedt A hisztokémiai és immunhisztokémiai technikák megfelelő elvégzéséhez csak jól megőrzött mintákat (17) használtunk. A post-mortem vizsgálatokat a cetfélékre vonatkozó szabványos protokoll szerint végezték (Kuiken & Baker 1991). Az összes fő belső szövetet és szervet gondosan megvizsgálták. Három mintát vettünk minden májból és a máj nyirokcsomóiból. A szövetmintákat 10% -os semleges pufferelt formalinban rögzítettük, amelyet osztályozott alkoholokon dehidratáltunk és paraffinviaszba ágyazottuk. A metszeteket (4 µm vastagságú) kivágtuk és haematoxilinnel, valamint eozinnal és Giemsa festéssel festettük a kórszövettani vizsgálat céljából. Az infiltrálódó neutrofilek, limfociták és plazmasejtek számát 15 véletlenszerűen kiválasztott, 400 × -os mezőben számoltuk meg, beleértve a szinuszokat és a portális tereket. Az NSRH besorolása enyhe volt (sejtszám 20-50 sejtenként mezőnként), közepesen súlyos (50-75 sejt mezőnként) vagy súlyos (több mint 75 sejt mezőnként).

2.2. Immunhisztokémiai vizsgálat

A tüdő és a központi idegrendszer metszeteit a morbillivírus antigén immunoperoxidáz tesztjével festettük (Kennedy és mtsai 1991). A másutt leírt avidin – biotin-peroxidáz (ABC) módszert alkalmazták a máj gyulladásos infiltrátuma immunfenotípusának tanulmányozására (Jaber et al. 2003). Az endogén peroxidáz aktivitást 0,3% -os hidrogén-peroxiddal metanolban 30 percig inkubáltuk. 0,01% -os pronázban (Sigma Chemicals, St Louis, MO 3500, USA) 10 percig szobahőmérsékleten történő inkubálást alkalmaztunk antigén-visszakeresési módszerként az összes antitest számára, kivéve az MHC II. Osztályú mAb-t, amelyhez 0,01 M citromsavban inkubáltunk mikrohullámú sütőben. 100 ° C-on 7 percig alkalmaztuk (1. táblázat).

Online közzététel:

1. táblázat: A vizsgálatban alkalmazott primer antitestek részletei.

2.3. Toxikológiai vizsgálat

A 17 és a delfin közül csak 11-ben elemeztük a zsír- és májmintákat szerves klór-poliklórozott bifenilekre (PCB-k) és diklór-difenil-triklór-etánra (DDT). A teljes PCB-koncentrációt 11 CB-rokon (IUPAC # 28, 52, 101, 105, 118, 138, 149, 153, 156, 180 és 187) összegeként számoltuk. A DDT-koncentrációt a hat DDT-vegyület (pp′-DDE, pp′-DDT, pp′-DDD, op′-DDE, op′-DDT és op′-DDD) összegeként számoltuk. Az analitikai módszert és a kromatográfiás eljárásokat más jelentések írták le (Carballo et al. 2008). A PCB és DDT koncentrációkat összehasonlítottuk a tengeri emlősök számára javasolt toxikológiai küszöbkoncentrációkkal (Jepson et al. 2005; Kajiwara et al. 2006; Castrillon et al. 2010).

3. Eredmények

A májban talált elváltozások hisztopatológiai jellemzői összhangban voltak az NSRH diagnózisával. A 17-ből kettőt súlyosnak, 17-ből 2-et közepesnek, a fennmaradó 13 állatnak enyhe diagnosztizáltak. A betegség egyetlen makroszkopikus bizonyítéka a máj enyhe megnagyobbodása volt. Az NSRH-t két különböző típusba sorolták a neutrofilek jelenléte alapján a gyulladásos infiltrátumban: nem specifikus krónikus reaktív aktív hepatitis és nem specifikus krónikus reaktív hepatitis.

Az NSRH szövettani megjelenése gyulladásos infiltrátum volt a portális területeken és a parenchymában, hepatocelluláris nekrózis bizonyítéka nélkül. Az első típusban (nem specifikus krónikus reaktív aktív hepatitis) enyhe vagy közepesen súlyos infiltrátum volt, amely főleg neutrofilekből, valamint limfocitákból és plazmasejtekből állt, amelyek a portálterületek sztrómájában helyezkedtek el, és intenzitása változó volt a portálterületek között; normál portáltraktusokat tartalmazott, enyhe vagy markáns leucocytosis és Kupffer-sejtek szaporodása a szinuszoidokban és néhány neutrofil a májvénák körüli sztrómában. A második típusban (nem specifikus krónikus reaktív hepatitis) a gyulladást plazma sejtek és limfociták alkották mind a portális területek sztrómájában, mind a májvénák körül, mind a sinusoidákon belül (1. ábra).

Online közzététel:

A nem specifikus krónikus reaktív aktív hepatitist 17 állat közül 3-nál diagnosztizálták, amelyekben parazita kolangitist is kimutattak. A súlyos NSRH-val rendelkező cetfélék (egy a krónikus reaktív hepatitisben és egy a krónikus aktív reaktív hepatitisben) bőséges gyulladásos beszűrődést mutattak a portális területeken a neutrofilek, limfociták és plazmasejtek, valamint a máj sinusoidjai között; utóbbiban a limfociták és a plazmasejtek intravaszkuláris klasztereit figyelték meg (1. ábra).

Parazitákat találtak öt NSRH-val rendelkező delfin epevezetékében, és Campula spp. Ezek a flukák súlyos károsodást okoztak az epevezetékekben, és két NSRH-s állat hasnyálmirigy-csatornáiban is megfigyelték őket.

Úgy tűnt, hogy az összes NSRH-val diagnosztizált állat valamilyen korábban létező extrahepatikus betegségben szenvedett, amely a vizsgált folyamatot kiválthatta (2. táblázat). Nehéz Nasitrema spp. fertőzést észleltek három NSRH-s állat paranasalis tasakjában. Hat esetben súlyos vagy enyhe tüdőféreg-fertőzés (Pseudalius inflexus és Stenurus minor) súlyos és szövettani elváltozásai voltak, amelyek összhangban voltak a parazita tüdőgyulladással, míg további két tüdőgyulladás bakteriális fertőzés következménye volt (Corynebacterium spp. és Staphylococccus spp.). Más állatoknál gastritist és/vagy enteritist diagnosztizáltak; állatok közül négynél a gasztritisz az Anisakis simplex fonálféreg fertőzéséből származott. Két NSRH-s állatnál ismeretlen etiológiájú enteritist diagnosztizáltak.

Online közzététel:

2. táblázat: Különböző NSRH súlyosságú állatokon az extrahepatikus okok diagnosztizálása.

Online közzététel:
Online közzététel:

A palackorrú delfinek májában és májában a szennyezőanyag-szinteket a 3. táblázat tartalmazza. Mindkét szövetben a PCB-ket találtuk a legnagyobb koncentrációban. A máj PCB-szintje alacsonyabb volt, mint a májban. a zsírszint 301 és 33 212 ng/g nedves tömeg között, míg a máj szintje 373 és 52 374 ng/g nedves tömeg között változott. Hasonló PCB-rokon összetételeket figyeltek meg a két szövetben, a hexa- és a hepta-klór-bifenilek viszonylag nagy arányban. A szerves klór peszticid vegyületeken belül a DDT csoportok voltak a legnagyobb koncentrációban (3. táblázat). A DDT-k koncentrációja a mosógépben 147 és 21 050 ng/g nedves tömeg között volt; a májban a koncentrációk 220-3171 ng/g nedves tömeg% között változtak. p, p′-DDE volt a DDT-csoport vegyülete, amely a legnagyobb koncentrációban volt jelen a két elemzett szövetben. Érdekes megállapítás volt, hogy a két súlyos NSRH-val rendelkező delfin a legmagasabb PCB-szintet mutatta a májban (3. táblázat).

Online közzététel:

3. táblázat: DDT-k és PCB-k a kenőcsben (ng/g nedves tömeg%) és a májban (ng/g nedves tömeg%) Tursiops truncatus és NSRH fok.

4. Megbeszélés

Vizsgálatunk során számos máj- és extrahepatikus gyulladásos folyamatot találtak az állatokban. Megfigyelték, hogy amikor a limfociták és a plazma sejtek intrasinusoidalis csoportjait találták a súlyos NSRH-val rendelkező cetfélék májparenchymájában, parazitafertőzések voltak az epevezetékekben, nehéz tüdőféreg- és paranazális tasakfertőzések és bakteriális fertőzések is jelen voltak. Ezért ez nagy valószínűséggel az immunrendszer fertőzés vagy fertőzés okozta tartós helyi vagy szisztémás antigénstimulációjának eredménye, amelyről beszámoltak embereknél (Mansuy 1997) és kutyáknál (Egenvall et al. 1998; Rothuizen & Van Den Ingh 1998) .

A CD3, IgG, lizozim és S100 fehérje poliklonális antitestek immunjelölést eredményeztek a delfin nyirokcsomó szövetszelvényeiben, hasonlóan a célfajoknál és más fajoknál, például a sertésnél (Pérez et al. 2001). Az immunhisztokémiai vizsgálat kimutatta, hogy az NSRH főként a sinusoidákon belül és a portális terekben lévő IgG + plazma sejtek beszivárgásából és kisebb számú CD3 + T-limfocitából állt, amelyek főleg a portál terekben helyezkedtek el. Más fajokban, például a kutyában, a nem specifikus krónikus reaktív hepatitist a portális terekben lévő limfoplazmatikus infiltrátum és a máj sinusoidok is jellemzik (Egenvall et al. 1998; Rothuizen & Van Den Ingh. 1998), de az ilyen infiltrátum immunfenotípusa nem jelentettek. Az ebben a vizsgálatban a cetféléknél megfigyelt gyulladásos infiltrátum jellege helyi humourális válaszra utal, mivel az IgG-t tartalmazó plazmasejtek bőségesek voltak, míg a változó mennyiségű CD3 + limfocita változó helyi sejtválaszra utal.

A vizsgálatunk során az állatok zsírában és májában talált PCB és DDT szintet közepes tartománynak tekintettük a többi delfinpopuláció korábbi vizsgálataival összehasonlítva (Corsolini et al. 1995; Stein et al. 2003; Houde et al. 2005; Fair et al. 2010). Négy delfinünk blubber PCB-koncentrációja meghaladta a tengeri emlősöknél megállapított küszöbkoncentrációt (Kannan et al. 2000). Indokolt feltételezni, hogy a vizsgált állatokban talált PCB-koncentrációk káros hatással lehetnek egészségi állapotukra, de hepatotoxicitásuk nem állapítható meg. Azonban a hosszú uszonyú kísérleti bálnáknál a 35 000 ng/g lipid tömegszázalékot meghaladó blubber PCB-koncentrációk egyes nem specifikus májelváltozások, például portálsejt-infiltrátumok és hepatocita-lipidfelhalmozódás magas előfordulásával társultak (Sonne et al. 2010).

A két súlyos NSRH-ban szenvedő állatban volt a legmagasabb a PCB-rokonkoncentráció, ami összefüggésbe hozható e folyamat patogenezisével. Az ebben a vizsgálatban elemzett néhány felnőtt férfi DDT-koncentrációja veszélyes lehet: három felnőtt hím palackorrú delfin (TT 78, TT 93, C124) májában a DDT-szint több mint kétszerese volt annak az adagnak, amely endokrin rendellenességeket okoz szárazföldi (Kelce és mtsai 1995) és tengeri emlősök (Tanabe és mtsai 1994). Az összes állatban klór-szerves peszticideket vizsgáltak NSRH-t, de a fent említettekben az NSRH nagyon súlyos volt. A vadon élő fajok, köztük a jegesmedvék és a sarki rókák májában vaszkuláris leukocita infiltrációkat figyeltek meg természetes étrendjükben perzisztens szerves szennyező anyagok hatásának kitéve (Sonne et al. 2005; Sonne et al. 2008).

Összefoglalva: a Kanári-szigeteken (Spanyolország) rekedt 17 palackorrú delfin változó súlyosságú NSRH-t mutatott. A májgyulladásos infiltrátum jellege következetes IgG + plazma sejt infiltrációt mutatott ki változó mennyiségű CD3 + T-limfocitákkal. Minden állat extrahepatikus rendellenességeket mutatott, amelyek parazita vagy fertőző betegségekkel kapcsolatosak. A két súlyos NSRH-val rendelkező delfin a legmagasabb PCB-szintet mutatta a májban. Bár ezen etiológiák egyikére sem lehet közvetlen hatást megállapítani, ésszerű spekulálni a tartós kombinált hatásra, mint az embereknél és más állatfajoknál előfordul. Nagyobb állatcsoportokon kell tanulmányokat végezni, hogy többet megtudjanak ezeknek a szennyező anyagoknak a tengeri emlősökben tapasztalható élettani hatásairól.

a legjobb antigén-visszakeresési módszer az antitestekre tesztelt három közül.