A Citrus aurantium és a Rhodiola rosea kombinációban csökkentik a zsigeri fehér zsírszövetet és növelik a hipotalamusz noradrenalin-dózisát az étrend okozta elhízás patkánymodelljében.

Jessica L. Verpeut

Állattudományi Tanszék, Rutgers, New Jersey Állami Egyetem, New Brunswick, NJ, USA

b Endokrinológiai és állatbiológiai tudományok posztgraduális programja, Rutgers, New Jersey Állami Egyetem, New Brunswick, NJ, USA

Amy L. Walters

Állattudományi Tanszék, Rutgers, New Jersey Állami Egyetem, New Brunswick, NJ, USA

Nicholas T. Bello

Állattudományi Tanszék, Rutgers, New Jersey Állami Egyetem, New Brunswick, NJ, USA

b Endokrinológiai és állatbiológiai tudományok posztgraduális programja, Rutgers, New Jersey Állami Egyetem, New Brunswick, NJ, USA

Absztrakt

1. Bemutatkozás

2. Módszerek és anyagok

2.1. Botanikai kivonatok

A C aurantiumot (6% szinefrin; tételszám: 20111208) és az R rosea-t (3% rosavin, 1% szalidrosid; tételszám: 12807050) az Unichem Inc-től (Newark, NJ, USA) szereztük be. Az Unichem a National Sanitation Foundation tanúsítvánnyal rendelkező, jó gyártási gyakorlatot biztosító létesítménye, és minden szállított nyersanyaghoz elemzési tanúsítványt ad. Ezenkívül a Rutgers Egyetem botanikai magja ellenőrizte a C aurantium és az R rosea nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) elemzését. Azt is megállapították, hogy ezek az anyagok nem tartalmaznak peszticideket vagy mikrobiális szennyeződéseket, és elfogadhatók az Országos Egészségügyi Intézet által meghatározott botanikai integritási irányelvek szempontjából.

2.2. Állatok

A Harlan Laboratories-tól (Frederick, MD, USA) beszerzett felnőtt hím Sprague-Dawley patkányokat (körülbelül 300 g tömegűek) külön-külön elhelyeztük és 12/12-órás világos/sötét programba helyeztük (1700 órakor kialszik). A patkányokat standard chow-val etettük [Purina Rat Diet 5012 (St. Louis, MO, USA) 13% zsír, 27% fehérje, 3,1 kcal/g], hacsak másképp nem említettük, és a kísérletek során mindig rendelkezésre állt víz. Valamennyi eljárást a Rutgers Egyetem Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága hagyta jóvá, és összhangban voltak a Nemzeti Egészségügyi Intézet irányelveivel.

2.3. A C aurantium és az R rosea adagválasza önmagában vagy kombinációban akut táplálékfelvétel esetén 24 órás táplálékhiányos patkányokban

2.4. A dózis kombinációja a zsigeri megbetegedésekre a kaolin bevitelének mérésével

Annak megállapításához, hogy a C aurantium (5,6 mg/kg) + R rosea (20 mg/kg) kombinációval történő táplálékfelvétel elnyomását zsigeri megbetegedések okozták-e, a pica viselkedését mérték az alkalmazás után. Egy héttel a 2.3. Szakaszban leírt dózissorozat befejezése után az állatokat véletlenszerűen csoportba soroltuk (n = 10), és ad libitum chow-ra helyeztük, folyamatos hozzáféréssel a nem tápláló száraz kaolin-pelletekhez (kaolin 1% akác gumival; K5001; Research Diets, New Brunswick, NJ, USA) 7 napig. 24 órás élelmezés nélkül az állatok szájon át kaptak 2% etanolt (vivőanyag) vagy C aurantiumot (5,6 mg/kg) + R rosea (20 mg/kg) randomizált módon. Az adagolást 1 órával az etetés előtt végeztük. A táplálék és a kaolin bevitelének mérését 0,5, 1, 2, 4 és 24 órával az etetés után rögzítettük. A táplálékfelvételt és a kiömlést 0,1 g pontossággal mértük.

2.5. A botanikai kezelési körülmények hatása az étel bevitelére és a testsúlyra a 10 napos szubkrónikus kezelési ütemterv alatt az étrend okozta elhízás modelljében

A növényi anyagok önmagukban vagy kombinációban az étrend okozta elhízás idegi, metabolikus és endokrin markereire gyakorolt hatásainak meghatározásához összesen 91 kifejlett hím Sprague-Dawley patkánynak tettek ki magas zsírtartalmú étrendet (Research Diets, D12492, 60 % zsír, 20% fehérje) 13 hétig, és mindvégig magas zsírtartalmú étrenden maradt. Az állatokat 10 egymást követő napon C aurantium (5,6 mg/kg; Ca; n = 20), R rosea (20 mg/kg; Rr; n = 17), C aurantium (5,6 mg/kg) + R rosea alkalmazásával kaptuk. (20 mg/kg; CR; n = 20) vagy vivőanyag (2% etanol; V; n = 17). Pár etetésű állatok csoportja (PF; n = 17), amelyeket nem szondáztak, megkapta a CR csoport átlagos átlagos kalóriabevitelét. Az adagolás első napját követően naponta regisztrálták a testtömegeket és az étkezés mennyiségét. A táplálékfelvételt és a kiömlést 0,1 g pontossággal mértük.

2.6. A zsírpárna súlya és a hormonális mérések a 10 napos szubkrónikus kezelési ütemterv után

2.7. Plazma és regionális agyi monoaminszintek botanikai kezelések és etetési körülmények után

A vérplazma mintákat és az agyi metszeteket reverz fázisú HPLC-vel (Dionex Ultimate 3000, Thermofisher, Sunnyvale, CA, USA) elemeztük elektrokémiai detektálással (Coulochem III, Thermofisher, Sunnyvale, CA, USA). Minden kísérlethez acetonitril-alapú foszfátpuffer mozgófázist (MD-TM; Dionex, Thermofisher, Sunnnyvale, Kalifornia, USA) használtunk. A belső standardot, a 3,4-dihidroxi-benzil-amint az extrakció előtt minden mintához hozzáadtuk. A vérplazmát HPLC-analízishez készítettük a plazma katekolamin extrakciós készlet (Thermofisher, Sunnyvale, CA, USA) segítségével az NE, a dopamin (DA) és az E szintjének mérésére. Az egyes régiók egyes agyszekcióit 550 μl 0,1 N-ban homogenizáltuk perklórsavoldat. A homogenizátumokat ezután 5 percig 12 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk. A felülúszót 0,2 μm-es eldobható nylon fecskendőszűrővel szűrjük elemzés előtt. Ez az extrakciós eljárás lehetővé tette az NE, DA, 5-HT és a katekolamin-metabolit homovanillinsav (HVA) HPLC-vel történő mérését. A csúcselemzést a Chromeleon 7.1 szoftverrel (Dionex) végeztük. Az egyes monoaminok és HVA értékeit nanogrammban fejeztük ki, elosztva az egyes minták nedves szövetének tömegével (milligrammban).

2.8. Hemodinamikai mérések előkezelés és utókezelés a botanikai és kontroll csoportokban

A megfelelő 10 napos kezelés megkezdése előtt 3 egymást követő napon az állatokat a noninvazív vérnyomás (BP) CODA (Kent Scientific, Torrington, CT, USA) rendszerhez szokták. Ez a számítógépes rendszer a farok térfogatnyomásának rögzítésével méri a szisztolés és a diasztolés BP-t, az átlagos BP-t és a pulzusszámot. Az állatokat 5 perccel a felvételi kísérletek előtt hozzáigazítottuk a CODA rendszerhez. Az egyes időpontokra vonatkozó méréseket 3 sikeres felvételi kísérlet értékeinek átlagolásával határoztuk meg. Az állatok 2 akklimatizációs napot kaptak, amelyet a harmadik napon egy kiindulási tesztnap követett. A 10 napos kezelések befejezése után minden csoportban megmaradt állatokat (Ca: n = 10, Rr: n = 8, CR: n = 10, V: n = 8 és PF: n = 8) teszteltünk a CODA rendszerben, hogy meghatározzák a kezelés utáni értékeiket. Ehhez az összes csoportot 24 órával a megfelelő kezelés utolsó dózisa után teszteltük.

2.9. statisztikai elemzések

Teljesítményanalízist végeztünk, hogy meghatározzuk az egyes csoportok megfelelő mintaméretét az egyes végpontok várható szórása alapján. Az adatokat átlagként ± SE-ként mutatjuk be. A növények táplálékfelvételre és kaolin-bevitelre gyakorolt akut hatásait kétirányú, ismételt ANOVA varianciaanalízissel mértük. Az egyes botanikai kezelések akut táplálékfelvételét (C aurantium, R rosea és C aurantium + R rosea) külön elemeztük, hogy figyelembe vegyük a kezelés hosszának különbségeit. A kaolin bevitel és az akut chow bevitel adatait külön-külön elemeztük függő t teszttel. A 10 napos kezeléseknél a testsúlyt, a kumulatív táplálékfelvételt és a hemodinamikai méréseket kétutas ANOVA alkalmazásával, ismételt mérésekkel elemeztük. A testzsír- és hormonvizsgálatokat egyutas ANOVA-val elemeztük, a katekolamin-koncentrációk mennyiségi meghatározását pedig egy-egyutas ANOVA-val elemeztük minden régióra. Adott esetben utólagos összehasonlításokat végeztek a legkevésbé szignifikáns különbségű (LSD) tesztekkel. Minden statisztikai elemzést és teljesítményelemzést a Statistica 7.1 szoftver (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA) alkalmazásával végeztünk, és a szignifikanciát α =, 05.