A glükóz anyagcseréje a magas zsírtartalmú étrendre adott válaszként női egerekben In Vitro Trágyázás (IVF) vagy petefészek stimuláció egyedül

Robinson Kutatóintézet, Gyermekgyógyászati és Reproduktív Egészségügyi Iskola, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005, Szülészeti és Nőgyógyászati Tanszék, Guiyang Orvosi Főiskola, Klinika, Guiyang, Kína, 550004, Orvostudományi Egyetem, University of Adelaide, Adelaide, Ausztrália, 5005

Társulás Robinson Kutatóintézet, Gyermekgyógyászati és Reproduktív Egészségügyi Iskola, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005

Orvostudományi tudományág, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005, Sürgősségi Osztály, a Guiyang Orvosi Főiskola kapcsolt kórháza, Guiyang, Kína, 550004

Orvostudományi fegyelem, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005

Társulás Robinson Kutatóintézet, Gyermekgyógyászati és Reproduktív Egészségügyi Iskola, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005

Kapcsolat Robinson Kutatóintézet, Gyermekgyógyászati és Reproduktív Egészségügyi Iskola, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005, Orvostudományi tudományág, Adelaide Egyetem, Adelaide, Ausztrália, 5005

Miaoxin Chen,
Linda Wu,
Fang Wu,
Gary A. Wittert,
Robert J. Norman,
Rebecca L. Robker,
Leonie K. Heilbronn

Ábrák

Absztrakt

Az in vitro megtermékenyítéssel (IVF) fogant személyeknél nagyobb lehet a kardio-metabolikus rendellenességek kockázata. Nemrégiben beszámoltunk arról, hogy az IVF-ben megfogant hím egereknél normális és nagy testtömeg mellett a glükóz metabolizmusa károsodott. Ebben a vizsgálatban érett nőstény C57BL/6J egerekben vizsgáltuk a glükóz anyagcserét, amelyeket természetes fogantatással (NC), petefészek-stimulációval (OS) vagy IVF-vel 8 héten keresztül folytattunk chow vagy magas zsírtartalmú étrend (HFD) után. Tervezésük szerint az alom nagysága összehasonlítható volt a csoportok között, de érdekes módon az IVF és OS nőstények születési súlya alacsonyabb volt, mint az NC nőstényeké (p≤0,001). Az érett IVF nőstény egerek étrendtől függetlenül emelkedett éhomi glükózszintet mutattak az NC és OS egerekhez képest. Az érett IVF és OS egerek szintén érzékenyebbek voltak a magas zsírtartalmú étrend metabolikus következményeire, összehasonlítva az NC nőstényekkel, csökkent glükóz toleranciával (p≤0,01), míg a perifériás inzulinrezisztencia és a Ppargc1α, Pck1 és G6pc glükoneogén gének fokozott máj expressziója csak IVF egereknél figyelték meg (p - (ΔΔCT) módszer és hajtásváltozásként fejezték ki egy kontrollmintához viszonyítva, amelyet a chow-ra táplált NC-csoportból választottak ki, és mindegyik futtatásba bevonták.

Nyugati immunblottozás

Mitokondriális DNS (mtDNS) kópiaszám kvantifikáció

A DNS-t quadricepsből (10 mg) QIAamp DNS Micro Kit (Qiagen) alkalmazásával extraháltuk a gyártó utasításainak betartásával. A DNS koncentrációját és tisztaságát a Nanodrop (Thermo Fisher Scientific) segítségével határoztuk meg. Ezután DNS-t használtunk az átlagos mtDNS kópiaszám/sejt becslésére, a [31] -ben leírtak szerint. A mitokondriális gén (12S rRNS) amplifikálására szolgáló primerek az 5'-CGT TAG GTC AAG GTG TAG CC-3 'és az 5'-CCA GAC ACA CTT TCC AGT ATG-3' voltak. A nukleáris gén (β-aktin) amplifikálására szolgáló primerek 5'-GGAAAAGAGCCTCAGGGCAT-3 'és 5'-CTGCCTGACGGCCAGG-3' voltak. A mitokondriális DNS és a nukleáris DNS PCR-amplifikációját minden mintában egyidejűleg, három példányban hajtottuk végre SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) és Rotor-Gene 6000 (Corbett, Valencia, CA) valós idejű rotációs analizátor alkalmazásával. A β-aktin Ct értékét kivontuk a 12S rRNS értékéből, hogy megkapjuk a ΔCt értéket, és az mtDNS kópiaszámát a nukleáris genomonként (két aktin gén kópia) 2 × 2 - (ΔCt) -ként számoljuk. .

Statisztikai analízis

Az adatok átlagként ± az átlag standard hibájaként vannak feltüntetve, hacsak másképp nem szerepel. Az adatokat statisztikailag elemeztük SPSS 20-mal (SPSS, Chicago, IL, USA) és log-transzformáltuk az elemzéshez, ha nem normálisan elosztva. A görbe alatti területet (AUC) a glükózhoz és az inzulinhoz a trapéz szabály alkalmazásával számítottuk [32]. Az összes OXPHOS fehérje szintet az OXPHOS I – V komplexek átlagaként számoltuk, és a PPARGC1A és az OXPHOS relatív sűrűségét a béta-tubulin normalizálta. Egyetlen összehasonlítást végeztünk egyirányú ANOVA-val a kezelés hatására, vagy kétirányú ANOVA-val diétával és kezeléssel, a csoportos tényezők között, míg az időbeli lefutásokat ismételt ANOVA és Bonferroni post hoc elemzéssel elemeztük. Az inzulin-tolerancia teszt alapján értékelt inzulinérzékenységet a kiindulási érték (0 perc) és 15 perc közötti delta glükózszint képviseli, és kétirányú ANOVA-val elemzik, kiigazítva a kiindulási glükózszintet, amely csoportok között jelentősen különbözött és összefüggésben volt a glükóz változásával. Szükség esetén nem paraméteres teszteket (Mann-Whitney U teszt vagy Kruskal-Wallis teszt) alkalmaztunk. A nominális adatokhoz chi négyzet tesztet alkalmaztunk. A különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük P esetén. 1. ábra. Testtömeg és növekedési sebesség nőstény egerek utódainál.

A fajlagos növekedési sebességet a következőképpen számítottuk: (Wn-W (n-1)/W (n − 1). W a testtömeg, és n az életkor hetekben. (A), * IVF vs NC, P = 0,04; (n = 21-26.) (B), * OS vs NC, P = 0,004; #IVF vs OS, P = 0,006. (n = 21-26.) (D), Chow: * IVF vs NC, P = 0,03. (E), HFD: #IVF vs OS, P 1. táblázat. A nőstény kölykök alomjellemzői és születési súlya.

A glükóz metabolizmusának romlása OS és IVF nőstény egerekben a HFD után

Az éhomi glükóz szignifikánsan magasabb volt az IVF-ben az NC és OS egerekben, az étrendtől függetlenül (P 2. ábra. Az éhomi glükóz, az éhomi inzulin, a glükóz (C – E) és az inzulin (F – H) válasz az intraperitoneális glükóz tolerancia tesztekre és az inzulin tolerancia tesztek (I – K) nőstény egerek utódainál.

AU, önkényes egység. (A), * IVF vs NC, P = 0,01; IVF vs OS, P = 0,03; ** Diétahatás, P = 0,01. (B), * IVF vs OS, P = 0,03; ** Diétahatás, P = 0,002. (E), * OS vs NC, P = 0,01; IVF vs NC, P 3. ábra: Női egerek utódainak májgén expressziója.

A fehér sávok az NC csoportot, a szürke sávok az OS csoportot, a fekete sávok az IVF csoportot jelentik (n = 6). (A), ** Diétahatás, P = 0,009. (B), * OS vs IVF & NC, P 4. ábra. A mitokondriális biogenezis marker PPARGC1A fehérje szintje és a teljes oxidatív foszforiláció (OXPHOS) a nőstény egerek utódainak májában.