A sovány és elhízott egerek zsírszövete háromdimenziós kultúrában növesztett hármas negatív emlőrákos sejtekben mezenhimális és epitheliális átmenetszerű hatást vált ki

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása az MDA-MB-231 sejtek kolónia morfológiai változásaira 3D kultúrában. (a) 3D kultúrában tenyésztett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri zsírszövet kondicionált táptalajjal vagy anélkül; skála = 100 µM. (b) A szerkezet alakjainak százalékos arányát átlag ± SD-ként tüntettük fel, és hat biológiai ismétlésből számoltuk ki. A telepek alakjainak arányát a csoportok között analysis 2 analízissel értékeltük, **** p a, b, c p 1,2,3 p α p> 0,05 kör/tömegszerű.

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása a vimentin és a CD24 fehérje expressziójára MDA-MB-231 sejtekben. (a) 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri WAT-CM-vel vagy anélkül tenyésztett és anti-vimentinnel, anti-CD24-vel és DAPI-val együtt festett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei; skála sáv = 100 µm. (b) és (c) a megfelelő markerek relatív expressziója, átlag ± SEM (n = 6 biológiai replikátum). A replikációnként öt képből származó átlagos fehérje expressziót normalizáltuk DAPI-re és elemeztük a kontroll kultúrákhoz viszonyítva. A Friedman-teszt nem talált szignifikánsan különbözõ csoportokat.

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása az epitheliális biomarker expressziójára MDA-MB-231 sejtekben. a) 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri WAT-CM-vel vagy anélkül tenyésztett és anti-E-cadherinnel, anti-claudin-7-sel és DAPI-val együtt festett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei; skála sáv = 100 µm. (b) és (c) a megfelelő markerek relatív expressziója, átlag ± SEM (n = 6 biológiai replikátum). A replikációnként öt képből származó átlagos fehérje expressziót normalizáltuk DAPI-re és elemeztük a kontroll kultúrákhoz viszonyítva. A Friedman-teszt nem talált szignifikánsan különbözõ csoportokat.

Az E-kadherin és a vimentin expressziójának Log2-transzformált aránya hibrid fenotípust mutat a WAT-CM-kezelt MAD-MB-231 sejtekben. A Log2-transzformált E-kadherin/vimentin arányt WAT-CM-vel vagy anélkül kezelt MDA-MB-231 sejtek immunfluoreszcencia adatainak felhasználásával határoztuk meg 3D kultúrában. Azok a sejtek, amelyek csillagképtelep morfológiájúak és E-cad/vim aránya 0, hámsejteknek tekintendők. A vegyes mezenhimális és epitheliális kolóniák morfológiájú sejtjeit és az E-cadherin/vimentin arányt diszpergáló hibridnek tekintjük.

A kísérleti terv sematikus ábrázolása. A sovány vagy elhízott nőstény C57BL/6 egereket eutanizáltuk, és 200, 400 vagy 800 mg szubkután és zsigeri WAT-ot gyűjtöttünk össze, és apróbb szövetdarabokba aprítottuk. A ledarált szövetfragmentákat Matrigelbe ágyaztuk és ex vivo tenyésztettük a WAT-CM előállítása céljából. Ezután az MDA-MB-231 sejteket 3D-ben tenyésztettük WAT-CM-vel vagy anélkül öt napig. Az ötödik napon a sejteket paraformaldehiddel rögzítettük és immunfluoreszcens konfokális mikroszkóppal festettük.

Absztrakt

elhízott

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása az MDA-MB-231 sejtek kolónia morfológiai változásaira 3D kultúrában. (a) 3D kultúrában tenyésztett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri zsírszövet kondicionált táptalajjal vagy anélkül; skála = 100 µM. (b) A szerkezet alakjainak százalékos arányát átlag ± SD-ként tüntettük fel, és hat biológiai ismétlésből számoltuk ki. A telepek alakjainak arányát a csoportok között analysis 2 analízissel értékeltük, **** p a, b, c p 1,2,3 p α p> 0,05 kör/tömegszerű.

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása a vimentin és a CD24 fehérje expressziójára MDA-MB-231 sejtekben. (a) 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri WAT-CM-vel vagy anélkül tenyésztett és anti-vimentinnel, anti-CD24-vel és DAPI-val együtt festett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei; skála sáv = 100 µm. (b) és (c) a megfelelő markerek relatív expressziója, átlag ± SEM (n = 6 biológiai replikátum). A replikációnként öt képből származó átlagos fehérje expressziót normalizáltuk DAPI-re és elemeztük a kontroll kultúrákhoz viszonyítva. A Friedman-teszt nem talált szignifikánsan különbözõ csoportokat.

Az elhízott egerek változatos WAT tömegének hatása az epitheliális biomarker expressziójára MDA-MB-231 sejtekben. (a) 200 mg vagy 800 mg elhízott szubkután vagy zsigeri WAT-CM-vel vagy anélkül tenyésztett és anti-E-kadherinnel, anti-claudin-7-sel és DAPI-val együtt festett MDA-MB-231 sejtek reprezentatív képei; skála sáv = 100 µm. (b) és (c) a megfelelő markerek relatív expressziója, átlag ± SEM (n = 6 biológiai replikátum). A replikációnként öt képből származó átlagos fehérje expressziót normalizáltuk DAPI-re és elemeztük a kontroll kultúrákhoz viszonyítva. A Friedman-teszt nem talált szignifikánsan különbözõ csoportokat.

Az E-kadherin és a vimentin expressziójának Log2-transzformált aránya hibrid fenotípust mutat a WAT-CM-kezelt MAD-MB-231 sejtekben. A Log2-transzformált E-kadherin/vimentin arányt WAT-CM-vel vagy anélkül kezelt MDA-MB-231 sejtek immunfluoreszcencia adatainak felhasználásával határoztuk meg 3D kultúrában. Azok a sejtek, amelyek csillagképtelep morfológiájúak és E-cad/vim aránya 0, hámsejteknek tekintendők. A vegyes mezenhimális és epitheliális kolóniák morfológiájú sejtjeit és az E-cadherin/vimentin arányt diszpergáló hibridnek tekintjük.

A kísérleti terv sematikus ábrázolása. A sovány vagy elhízott nőstény C57BL/6 egereket eutanizáltuk, és 200, 400 vagy 800 mg szubkután és zsigeri WAT-ot gyűjtöttünk össze, és apróbb szövetdarabokba aprítottuk. A ledarált szövetfragmentákat Matrigelbe ágyaztuk és ex vivo tenyésztettük a WAT-CM előállítása céljából. Ezután az MDA-MB-231 sejteket 3D-ben tenyésztettük WAT-CM-vel vagy anélkül öt napig. Az ötödik napon a sejteket paraformaldehiddel rögzítettük és immunfluoreszcens konfokális mikroszkóppal festettük.