Az epe szerepe a Roux-en-Y gyomor bypass után a fogyás elősegítésében és a glikémiás kontroll javításában

Absztrakt

Az epesavak és a glikémiás kontroll közötti összefüggést javasolták olyan vizsgálatokkal, amelyek javítják a vércukorszintet a 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél, ha az epesav-megkötők kolesztiramint és koleszevelamot kapnak (1–5). Számos lehetséges mechanizmust javasoltak, ideértve az epesavak enterohepatikus keringésének megzavarását és számos különféle hatást a farnesoid X receptor (FXR) útvonalon keresztül, amely az epesavak intracelluláris jelátviteli útja (4, 6). Az epesavak a sejtmembrán G fehérjéhez kapcsolt TGR5-receptorát is aktiválják, amelyről kimutatták, hogy in vitro FXR-független módon stimulálja az inkretint, glukagon-szerű peptid-1-et (GLP-1) (7). A GLP-1 pedig serkenti a hasnyálmirigy β-sejtjeit az inzulin felszabadítására (8).

A gyomor bypass utáni glikémiás kontroll elhúzódó javulását a jelentős és fenntartott fogyás tovább segíti. A gyengített étvágy részben magyarázható az endokrin L-sejtek fokozott jóllakottsági bélhormonjaival, például YY (PYY) peptiddel, GLP-1-vel és oxyntomodulinnal (27, 28). Az epesavak ezen L-sejt hormonok felszabadulásában is szerepet játszanak.

Feltételeztük, hogy a gyomor bypass utáni megváltozott anatómia befolyásolja az epe szállítását a terminális ileumba, és megemelkedett plazma epesavakat eredményez. Feltételeztük, hogy az epeáramlás változásai megnövekedett bélhormon-reakciókat, csökkent táplálékfelvételt és fogyást eredményeznek. Célunk az volt, hogy teszteljük ezt a hipotézist emberben a gyomor bypass műtét után, és feltárjuk az epeáramlás két állatmodelljében rejlő lehetséges mechanizmusokat.

Anyagok és metódusok

Az emberi vizsgálatokat a Helsinki Nyilatkozat elveinek megfelelően végezték. A Somerset Kutatási és Etikai Bizottság jóváhagyta a vizsgálatot (LREC 05/Q2202/96 sz. Jegyzőkönyv). A kutyás tanulmányokat az Onderstepoort Vetinary School (Pretoriai Egyetem) etikai bizottsága hagyta jóvá. A patkányvizsgálatokat az Egyesült Királyság Belügyminisztériuma (PL 70-6669) hagyta jóvá.

Humán tanulmányok

Kutya tanulmányok

Négy hím és négy nőstény Beagle-t éjszakán át böjtöltek, majd standard 400 g vizsgálati ételt kaptak kutyából (Husky, Purina, Dél-Afrika). Az összetétel 7,5% fehérje, 2% zsír, 1% rost, 7,5% nyershamu és 82% nedvesség volt. Öt milliliter vért gyűjtöttünk (EDTA-t és aprotinint tartalmazó csövekben) 30 percenként, étkezés előtt 30 perccel, étkezés utáni 150 percig.

Másnap a kutyákat színházi előkészítésre készítették egy éjszakai fentanil tapasz elhelyezésével és az egyik napról a másikra visszatartott táplálékkal. A közös epeutat átvágták. 8 francia Foley katétert helyeztek az epehólyagba. Egy 8 francia etetőcsövet vezettek a pyloruson keresztül a duodenumba, a legtávolabbi pont 5–8 cm távolságra volt a pylorustól, közel a Vater ampulla szintjéhez (1. ábra A). A műtét után az első 12 órában a kutyák ad libitum hozzáférést kaptak a vízhez, de élelem nélkül.

A, A kutya modell anatómiájának és kanulációjának sematikus ábrázolása. Gasztrosztómás csövet helyeztek a duodenumba, közel a Vater ampullájához. A közös epeutat összekötöttük, és az epehólyagot kanilizáltuk, hogy lehetővé váljon az epe elvezetése. B, Az epe funkcionális anatómiájának sematikus ábrázolása az ileumcsoportban. A közös epevezeték elvezetési pontjától 1 cm-es távolságban és közelségben történt átmetszéseket végeztünk. Az átmetszett duodenum proximális és disztális vége végig végig anasztomizált és helyreállt a folytonosság. A duodenum azon szakaszát, amely a közös epevezetéket tartalmazta, anasztomizálták a disztális jejunum felé, 10 cm-re a terminális ileumtól.

Csak egy kutyát szakítottak meg, miután sárgaság és fertőzés jelei voltak. A kutyák a fényfázis kezdetén 400 g normál chow standard ételt kaptak. Ekkor a lehető legtöbb epét szívták ki a Foley-katéterből és injektálták a gasztrosztómiás csövön keresztül, majd 5 ml sóoldatot öblítettek. Ez megakadályozta a kutyák sárgaságát, és lehetővé tette a normális emésztést.

D 4–6-án a kutyákat randomizálták egy 180 perces keresztezéssel tervezett vénás vérgyűjtési protokollra 30 percenként, 1) 400 g kutyaeledel szokásos étkezése után, csak epe nélkül; 2) csak epe, étkezés nélkül; vagy 3) 400 g kutyaeledel és epe kombinációban.

Rágcsáló vizsgálatok

Tizenhat hím Wistar elhízott patkányt randomizáltak egy álműtétre, amely fenntartotta az epe normális bejutását a duodenumba, vagy egy olyan műveletre, amely epe eljuttatta az ileumot. Az epe-duodenum csoporton 1 cm-es proximális és disztális transzkciókat hajtottak végre a közös epevezeték elvezetési pontjától és a reanastomosistól, hogy fenntartsák a normális anatómiát, de hasonló műtéti sértést tesznek lehetővé. Az epe-in-ileum csoportban a duodenum átmetszése azonos volt, de a transzplantált duodenum proximális és disztális vége végtől végig anasztomizált volt és helyreállt a folytonosság (1. B ábra). A duodenum azon szakaszát, amely a közös epevezetéket tartalmazta, anasztomizálták a disztális jejunum felé, 10 cm-re a terminális ileumtól. Ez lehetővé tette, hogy az epe és a hasnyálmirigy nedvei megkerüljék a duodenumot és a jejunum nagy részét.

A testtömeget és az élelmiszer-fogyasztást naponta mértük a fényfázis kezdetén 28 napig. A székletet 24 órán át 25 órán át gyűjtöttük. A patkányokat 12 órán át éheztettük, mielőtt abbahagytuk volna, és vérmintákat gyűjtöttünk.

FGF19 assay

Az FGF19 plazmakoncentrációt kvantitatív szendvics ELISA technikával mértük (FGF19 Quantikine ELISA készlet, katalógusszám: DF1900; R&D Systems, Minneapolis, MN).

Epesavak vizsgálata

A frakcionált plazma epesavak mérését folyadékkromatográfiás tandem tömegspektrometriával végeztük (31). A módszer lehetővé tette 12 különböző epesav [kolinsav (CA), chenodeoxycholic sav (CDC), deoxycholic sav (DC), glikokolsav (GCA), glikodeoxikolsav (GCD), glikochenodeoxycholic sav (GCDC), glikolithocholsav (GLC), glikoursodeoxikolsav (GUDC), litokolsav (LC), taurokolsav (TCA), taurochenodeoxycholsav (TCDC) és taurodeoxikolsav (TDC)], amelyeket 0,1–10 μ m tartományban kell mérni .

GLP-1 és PYY assay

Az összes mintát két példányban vizsgáltuk. Az elemzést bevett GLP-1 RIA-val végeztük (7). A PYY-szerű immunreaktivitást specifikus és érzékeny RIA-val mértük, amely a teljes hosszúságot (PYY1-36) és a fragmenst (PYY3-36) egyaránt méri (32).

Bomba kalorimetria

A tápanyagok felszívódásának értékeléséhez 24 órán keresztül székletet gyűjtöttünk a posztoperatív d25-en az összes patkánytól. A székletet kemencében szárítottuk és lemértük; a kalóriatartalmat bevett ballisztikus bomba kaloriméteres technikával mértük (33).

Rágcsáló C-reaktív fehérje (CRP) vizsgálata

A gyulladás értékeléséhez a szérum CRP szinteket mértük (Patkányszérum CRP ELISA készlet katalógusszám 1010; Alpha Diagnostics International, San Antonio, TX).