Szarvasmarha szérum albumin

A szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) egyetlen szulfhidrilcsoporttal rendelkezik, amely ily módon felhasználható egyetlen meghatározott szerkezetű oligoszacharid-láncot hordozó neoglikoprotein előállítására.

Kapcsolódó kifejezések:

Peptid
Enzimek
Antigének
Fehérjék
DNS
Tejsavó fehérje
Nanorészecskék
Béta-laktoglobulin

Letöltés PDF formátumban

Erről az oldalról

Szarvasmarha szérum albumin

Általános információ

A szarvasmarha-szérum albumint gyakran használják fehérje-kiegészítőként a sejttenyésztő táptalajokban, és a marha szarvasmarha-szérum albumin egyes készítményekben alkalmanként káros hatásokat okoz. A tünetek általában enyhék, például viszketés és csalánkiütés. Anafilaxiás reakciót írtak le egy csontvelő-átültetésen átesett betegen, miután a csontvelő sejteket szarvasmarha szérum albuminban tartották. A spermium-feldolgozó közeg összetevőjeként a szarvasmarha-szérum albumin káros hatásokat okozott az intrauterin megtermékenyítés után [1]. A szarvasmarha-szérum albuminról szintén beszámoltak, hogy korai gyermekkorban membrános nephropathiát okoz [2]. Az nvCJD rekombináns fehérjék általi átvitelének kockázata ismeretlen, mivel az előállításukhoz használt sejttenyészetek gyakran tartalmaznak szarvasmarha szérum albumint [3].

Elválasztások és elemzés

8.9.3.1.1. Szarvasmarha szérum albumin

A triptofán enantioszeparációjához BSA-immobilizált agarózt alkalmaztunk: a d - és az 1-triptofán egyértelműen feloldódott a CSP alkalmazásával, és először a d-formát eluáltuk, összhangban az oldatban végzett korábbi kötési vizsgálatokkal. 1 Később szilícium-dioxid-géleket és polimereket alkalmaztak a BSA mint alapanyag immobilizálására. Főként 24,25 szilikagélt használtak, míg a polimerek hidroxietil-metakrilát és poli (sztirol-divinilbenzol) perfúziós gyöngyök voltak. BSA-n alapuló 24,25 CSP-t alkalmaztunk különféle savas és semleges enantiomerek, például N-származékkal képzett aminosavak, aromás aminosavak, töltés nélküli oldott anyagok, szulfoxidok és szulfoximin-származékok elválasztására. 24,25

Úgy ítélték meg, hogy a BSA 582 aminosavmaradékból állt. Nemrégiben Hirayama és mtsai. 32 arról számolt be, hogy a Tyr156 hiányzik az előző szekvenciából, és hogy a BSA 583 aminosav szekvenciából áll. A BSA-fragmenseket izoláltuk és szilikagélekre immobilizáltuk. Először arról számoltak be, hogy a BSA-fragmens (ek) re épülő CSP-k kapacitása és enantioszelektivitása kisebb volt, mint az ép BSA-alapú CSP-k, kevésbé stabilak. Más beszámolók szerint azonban a BSA fragmens alapú CSP-k nagyobb enantioszelektivitást eredményeztek a lorazepam és a benzoin iránt a megkötöttebb mennyiségek miatt, és alacsonyabb az enantioszelektivitás más vizsgált vegyületek esetében, az intakt BSA alapú CSP-khez képest. Ezek a különbségek mind a tisztítási módszerből, mind az immobilizálási eljárásokból származhatnak. Az alacsonyabb enantioszelektivitás oka lehet a BSA-fragmensek globuláris szerkezetének változásai vagy a kötőhelyek körüli helyi környezet változásai.

Új feldolgozási technológiák

Thom Huppertz,. Hilton Deeth, tejsavó fehérjék, 2019

8.2.3.3 Szarvasmarha-szérum albumin

A BSA-ról kiderült, hogy 400 MPa-ig elég ellenálló a nyomáskezeléssel szemben (Hayakawa, Kajihara, Morikawa, Oda és Fujio, 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b; Patel és mtsai, 2004; Patel et al., 2005; Patel et al., 2006). A BSA másodlagos struktúrájában a HP által kiváltott változások nagyrészt reverzibilisek (Hosseini-nia et al., 2002), és a BSA magas stabilitása valószínűleg összefügg a merev molekulaszerkezettel 17 intramolekuláris diszulfidkötés jelenléte miatt (Hayakawa et al. ., 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b). Nál nél

150 MPa, a BSA strukturális módosításokon megy keresztül, ami megnöveli a molekulatérfogatot (Ceolín, 2000), de ezek a változások a BSA másodlagos struktúrájában nagyrészt visszafordíthatók (López-Fandiño, 2006b). A 800 MPa-nál végzett kezelés jelentős hatással van a BSA másodlagos szerkezetére, és a BSA polimerizációját eredményezi diszulfidkötés útján a szabad szulfhidril-maradékkal (Galazka, Ledward, Sumner és Dickinson, 1997; Galazka, Sumner és Ledward, 1996; Patel, 2007).

A nagynyomású feldolgozás hatása a tejfehérjék szerkezetére és kölcsönhatásaira

Hasmukh A. Patel, Thom Huppertz, Tejfehérjék (második kiadás), 2014

Szarvasmarha szérum albumin (BSA)

A BSA-ról kiderült, hogy 400 MPa-ig elég ellenálló a nyomáskezeléssel szemben (Hayakawa et al., 1992; López-Fandiño és mtsai, 1996; Patel és mtsai, 2004; 2005; 2006; López-Fandiño, 2006b). Számos jelentés áll rendelkezésre, amelyek magyarázzák a BSA nyomásstabilitását. Vannak vélemények, amelyek szerint a BSA másodlagos struktúrájában a nyomás okozta változások főként reverzibilisek (Hosseini-nia et al., 2002), és hogy a BSA nagyobb stabilitása valószínűleg összefügg azzal a ténnyel, hogy ez a molekula a 17 intramolekuláris diszulfidkötés révén és több különálló domén jelenléte rendkívül merev szerkezettel rendelkezik (Hayakawa et al., 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b). Lehetséges, hogy a diszulfidkötések viszonylag nagy száma a BSA-ban gátolhatja a nyomás által kiváltott aggregációt azáltal, hogy megvédi a molekulában lévő hidrofób magot/csoportokat az oldószertől való kitettségtől (Hosseini-nia et al., 2002).

Ceolín (2000) a BSA hidrodinamikai viselkedését zavart szögkorrelációs technikával, a 410 MPa-ig terjedő nagy nyomás függvényében tanulmányozta. Beszámoltak arról, hogy mérsékelt nyomáson (~ 150 MPa) a BSA molekula olyan szerkezeti módosításokat szenved, amelyek megnövelik a molekula térfogatát és a molekula rotációs korrelációs idejét. Lehetséges azonban, hogy a β-LG-vel ellentétben a BSA másodlagos szerkezetének változásai nagyrészt visszafordíthatók (López-Fandiño, 2006b). A 800 MPa-nál történő feldolgozásról azonban beszámoltak, hogy jelentős hatással van a BSA másodlagos szerkezetére, és a BSA-t diszulfidkötéssel polimerizálták a szabad szulfhidril-maradékkal együtt (Galazka et al., 1996b; 1997; Patel, 2007).

Az onkometabolizmus fogalmi háttere és bioenergetikai/mitokondriális aspektusai

Frank K. Huynh,. Matthew D. Hirschey, a Methods in Enzymology, 2014

4.2 7% BSA/5 mM hideg palmitát keverék előállítása

A BSA-nak a palmitát hordozójaként kell működnie, hogy biztosítsa a lipidek vizes oldatban való oldhatóságát. Hideg palmitátot tartalmaz a FAO reakciója annak érdekében, hogy növelje a vizsgálatban mért összes oxidációs sebességet és jelet. 7% BSA/5 mM palmitát oldat (

5: 1 mólarány), tegye a következőket:

Készítsen 7,5% BSA oldatot 30% törzs (például zsírsavmentes BSA; Sigma, A9205) hígításával ddH2O-ban. Melegítsük 42 ° C-ra vízfürdőben. Készítsen 20 ml-t a 7% BSA/5 mM palmitát oldathoz és 20 ml csak 7% BSA kontroll oldathoz.

Mérjünk meg 27,8 mg nátrium-palmitátot (Sigma, P9767), és tegyünk egy 50 ml-es kúpos csőbe. Adjunk hozzá 1,3 ml ddH2O-t, és tartsuk zárva, de meglazítva a kupakot.

Helyezze a csövet forrásban lévő vízfürdőbe, amíg a zsírsavak fel nem oldódnak (néhány perc).

Hűtsük a palmitátot, amíg puszta kézben tartható, de a zsírsavak még mindig feloldódnak (

70 ° C). Ha a palmitát kicsapódik, akkor ismét melegítse.

Azonnal adjunk hozzá 18,7 ml 7,5% BSA-t. Helyezzük 42 ° C-os vízfürdőbe 30 percre. Csak a 7% BSA kontrollhoz adjon 18,7 ml 7,5% BSA-t 1,3 ml ddH2O-hoz.

Ha részecskék képződnek és szabad szemmel láthatók, ultrahangozzuk 5 percig. Növelje a hőmérsékletet 47 ° C-ra, ha még mindig vannak részecskék, de ne haladja meg az 50 ° C-ot, hogy elkerülje a BSA denaturálását.

A fel nem használt alikvotokat legfeljebb 80 hónapig tárolhatja - 80 ° C-on. Kerülje a fagyás-olvadás ciklusokat.

Tipp: Ha ezt a vizsgálatot először hajtja végre, akkor hasznos lehet a hideg palmitát reakciónkénti mennyiségének megváltoztatása, hogy megtalálja a mintán, a választott szöveten és a kísérleti körülményeken alapuló ideális teljes palmitát koncentrációt reakciónként. Ehhez használja a 7% BSA kontrolloldatot a hideg palmitát koncentrációjának beállításához. A hideg palmitát tipikus koncentrációja a szöveti homogenizátumokban és a sejtekben 0,1–0,5 mM, illetve 0,3–1,0 mM.

Tejsavófehérjék a funkcionális élelmiszerekben

Ranjan Sharma, tejsavó fehérjék, 2019

17.2.3 Szarvasmarha-szérum albumin

A BSA egy nagy molekulatömegű fehérje, amely az összes tejsavófehérje körülbelül 10% -át teszi ki. Mérete és magasabb szerkezeti szintje miatt a BSA képes megkötni a szabad zsírsavakat és más lipideket, valamint az ízvegyületeket; ezt a tulajdonságot azonban súlyosan gátolja a denaturáció (Kinsella & Whitehead, 1989). A többi tejfehérjéhez hasonlóan a BSA is esszenciális aminosavak forrása, de alkalmazását funkcionális élelmiszerekben nem vizsgálták. Korlátozott számú tanulmány vizsgálja a BSA terápiás potenciálját (Krissansen, 2007). Laursen, Briand és Lykkesfeldt (1990) kimutatták, hogy számos kereskedelmi forgalomban levő BSA-készítmény gátló potenciállal rendelkezik az emberi emlőrák sejtvonal, az MCF-7 növekedésére. A BSA-ból származó peptid, a szerorfin (Tyr-Gly-Phe-Gln-Asn-Ala) (f399–404) opioid agonista aktivitással rendelkezik (Meisel, 2005). Egy másik BSA peptidről, az albutenzin A-ról vagy a szerokininről (Ala-Leu-Lys-Ala-Trp-Ser-Val-Ala-Arg) (f208–216), azt találták, hogy ACE-gátló, és arról számoltak be, hogy ileum- kontraktus és ileum-relaxáló tevékenységek (Meisel, 2005).

Az élelmiszer-összetevők kapszulázására szolgáló biopolimer nanostruktúrák áttekintése

4.1.6 A szarvasmarha szérum albumin (BSA) nanorészecskéi

A szarvasmarha-szérum albumint (BSA) széles körben alkalmazták a gyógyszer szállításában, alacsony költsége és toleranciája, valamint egyszerű előállítása miatt. A különféle aminosavmaradékokkal rendelkező BSA szerkezeti jellemzői lehetővé teszik a különböző fizikai-kémiai jellemzőkkel rendelkező gyógyszerek vagy bioaktív vegyületek megkötését. A szarvasmarhákban a BSA a leggyakoribb plazmafehérje, amely 583 aminosavmaradék egyetlen láncából áll.

A bioaktívan töltött BSA nanorészecskék előállításának és jellemzésének különféle módszereit, valamint az élelmiszer bioaktív komponensek szállítására szolgáló BSA alkalmazások néhány újabb példáját a 7. fejezet ismertette .

Fehérje-íz kölcsönhatások

A. Tromelin, E. Guichard, Ízben az ételekben, 2006

Szarvasmarha szérum albumin (BSA)

A BSA-t globális, nem glikoproteinként írják le, amelynek molekulatömege közel 66 430. 583 aminosavmaradékból áll és 17 cisztinmaradékkal rendelkezik (8 diszulfidhíd és 1 szabad tiolcsoport) (Carter és Ho 1994, Hirayama et al. 1990). A zsírsavak valószínűleg hidrofób kölcsönhatások révén kötődnek a BSA-hoz, a karbonilcsoport ebben a kölcsönhatásban csak csekély szerepet játszik (Burova és mtsai. 1999 és idézett hivatkozásai; Morrisett és mtsai. 1975, Spector 1975), valamint a többszörösen telítetlen aldehidekből. savak, amelyek valószínűleg reagálnak a lizinmaradékokkal, és kovalens kötésekkel Shiff bázisú adduktokat képeznek (Refsgaard et al. 2000).

Azt tapasztalták azonban, hogy a BSA nagy affinitással köti meg a karbonil-vegyületeket (Damodaran és Kinsella 1980b, Jasinski és Kilara 1985), ami a fehérje konformációs változását indukálja. A BSA diszulfid hídjainak kémiai redukciója csökkenti a karbonil vegyületek iránti affinitását.

A kötési affinitást a lánc hossza, a funkcionális csoport és a fehérje szerkezeti állapota befolyásolja (Damodaran és Kinsella 1980b). Valójában körülbelül 21 kötőhelyről számoltak be a BSA-ban, és úgy tűnik, hogy öt-hat elsődleges kötőhely vesz részt a karbonilkötésben (Jasinski és Kilara 1985). A BSA/pektin komplexek által megkötött 2-oktanon felszabadulásának újabb keletű vizsgálata feltárja, hogy a BSA és a pektin közötti gyenge, vonzó interakció körülményei között (pH 6,4-nél) a 2-oktanont előnyösen a BSA, míg mind a BSA, mind a BSA megköti. pektin erős interbiopolimer interakció körülményei mellett, 4,3 pH mellett, ami arra utal, hogy a BSA és a 2-oktanon versenyképesen kötődik a poliszacharid mátrixhoz (Burova és mtsai 1999). A vanillin erősebben kölcsönhatásba lép a BSA-val, mint a kazeináttal, hidrogénkötéssel és hidrofób kölcsönhatásokkal, a hidrofób kölcsönhatások fontosabbnak tűnnek (Chobpattana et al. 2002).

Megvizsgálták a kis ligandumok szerepét a termikus és pH-viszonyokhoz viszonyítva a BSA denaturációs folyamatában. Ily módon a 2-oktanon és a vanillin (egy alifás és egy aromás szag) kölcsönhatásait natív, savas és termikusan denaturált BSA alkalmazásával tanulmányozták. A kapott kísérleti adatok a fehérje magjának reverzibilis plasztizálódását tükrözik ízligandumokkal. Úgy tűnik, hogy a lágyított gömbállapot meglehetősen hasonló a fehérjék megolvadt gömbállapotához, és a natív fehérjemolekula és az olvadt gömbállapot közötti fő különbség a hidrofób kölcsönhatások megszakadásának tudható be, míg a lágyított gömbállapot megfelel a hígításnak a hidrofób mag lipofil lágyítóval történő felhasználásával (Burova és mtsai 2003). A hidrofób és az elektrosztatikus kölcsönhatások szerepét a 7,8-dihidroxi-kumarin (Daphnetin) BSA-hoz való kötődésének vizsgálata hangsúlyozta (Liu et al. 2004).

Tejfehérjék: Kisebb fehérjék, szarvasmarha-szérumalbumin és vitamin-kötő fehérjék és biológiai tulajdonságaik

Szarvasmarha szérum albumin

A BSA egy fehérje, amely főleg a tehén keringési rendszerében található meg, de a szarvasmarha tej tejsavó-komponensének is alkotóeleme. A BSA molekulatömege 66 433 Da (583 aminosav), és feltételezhető, hogy a tejben található az emlő hámsejtjei közötti szoros kapcsolódások romlása miatt, amelyek korlátozzák a molekulák mozgását a vérből a szarvasmarha szekréciós rekeszébe emlőmirigy. Ezt a megfigyelést fokozzák a szarvasmarha tejben megnövekedett BSA-koncentrációk azonosításának különböző jelentései, amelyek egybeesnek a tőgygyulladással és a megfelelő immun/gyulladásos válaszokkal, valamint a BSA megnövekedett koncentrációja a fejési gyakoriság változására adott válaszként (pl. Napi kétszeri adagolásról egyszeri fejés), amelyről kimutatták, hogy befolyásolja az emlő hámsejtjeinek szoros kapcsolódási integritását.

A szarvasmarha tejben lévő BSA az emberi szarvasmarha tejre gyakorolt allergiás reakcióiban is szerepet játszik, sőt, az emberi inzulinfüggő diabetes mellitushoz vezető autoimmun betegség stimulációjának lehetséges okaként is megvizsgálták.