A citromlé védő hatása az alkohol okozta májkárosodásra egerekben

Tong Zhou

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Yu-Jie Zhang

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Dong-Ping Xu

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Fang Wang

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Yue Zhou

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Jie Zheng

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Ya Li

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Jiao-Jiao Zhang

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

Hua-Bin Li

1 Guangdongi Tartományi Élelmiszer-, Táplálkozási és Egészségügyi Laboratórium, Közegészségügyi Iskola, Szun Jat-szen Egyetem, Kanton 510080, Kína

2 Dél-kínai-tengeri bioforrás-kiaknázási és hasznosítási együttműködési innovációs központ, Sun Yat-sen Egyetem, Kanton 510006, Kína

Absztrakt

A krónikus túlzott alkoholfogyasztás (férfiaknál több mint 40–80 g/nap, nőknél pedig több mint 20–40 g/nap) súlyos májkárosodást okozhat. Ebben a tanulmányban értékelték a citromlé hatását a krónikus alkohol okozta májkárosodásra egerekben. A szérum biokémiai profilját és a máj lipidperoxidációs szintjét, a triacil-glicerin (TG) tartalmát, az antioxidáns enzimaktivitásokat és a hisztopatológiai változásokat vizsgáltuk a citromlé májvédő hatásainak értékelése céljából egerekben. Ezenkívül meghatároztuk a citromlé in vitro antioxidáns kapacitását. Az eredmények azt mutatták, hogy a citromlé dózisfüggő módon jelentősen gátolta az alkohol által indukált alanin-transzamináz (ALT), aszpartát-transzamináz (AST), a máj TG és a lipid peroxidációs szintjének növekedését. Az alkohol által kiváltott hisztopatológiai változásokat a citromlé-kezelés is figyelemre méltóan javította. Ezek a megállapítások azt sugallják, hogy a citromlé védő hatással van az alkohol okozta májkárosodásra egerekben. A védőhatások összefüggésben lehetnek a citromlé antioxidáns kapacitásával, mivel a citromlé in vitro antioxidáns képességet mutatott.

1. Bemutatkozás

Az alkoholfogyasztás és az alkoholizmus súlyos egészségügyi és társadalmi-gazdasági problémákhoz vezethet világszerte. A krónikus túlzott alkoholfogyasztás (férfiaknál több mint 40–80 g/nap, nőknél pedig több mint 20–40 g/nap) számos betegséghez vezethet, például gyomor-bélrendszeri károsodáshoz, hasnyálmirigy-gyulladáshoz, alkoholos májbetegséghez, neurológiai rendellenességekhez, diabetes mellitushoz, és a rák [1, 2]. E betegségek közül az alkoholos májbetegség nagyobb morbiditása és mortalitása miatt vonzott nagyobb figyelmet. Az alkoholos májbetegség a krónikus májbetegségek egyik fő típusa az egész világon, és májcirrhosissá és májrákká válhat.

A krónikus alkoholfogyasztás rengeteg reaktív oxigénfajtát (ROS) generálhat, beleértve a szuperoxid-aniongyököt (O2 - •), a hidroxilgyököt (OH •) és a hidrogén-peroxidot (H2O2). Az ROS reagálhat a legtöbb sejtszintű makromolekulával, és ezután sejtkárosodást okozhat [3]. Ezért az alkohol által kiváltott túlzott ROS-t fontos tényezőnek tekintik az alkohol okozta májkárosodás kialakulásában. Különböző enzimatikus és nem enzimatikus antioxidánsok kapcsolódnak a sejtek ROS elleni védelméhez. Az antioxidáns enzimek közé tartozik a kataláz (CAT), a szuperoxid-diszmutáz (SOD) és a glutation-peroxidáz (GPx), a nem enzimatikus antioxidánsok pedig a glutation (GSH), az E-vitamin, az aszkorbát, az A-vitamin és az ubikinon [4]. A nem enzimatikus antioxidánsokat az antioxidánsok bevitele fokozhatja. Az elmúlt években sok természetes terméknek, amely bőségesen tartalmaz antioxidánsokat, beszámoltak arról, hogy hatással vannak a szabad gyökök eltávolítására és a máj védelmére az oxidatív károsodásoktól [4, 5].

A citrom népszerű gyümölcsléként fogyasztott gyümölcs, és nagy mennyiségű vitamint és polifenolt (főleg flavonoidokat) tartalmaz, mint például hesperidin, eriocitrin, naringin, neohesperidin, rutin-kvercetin, klorogénsav, luteolin és kaempferol [6]. Az in vivo és in vitro kísérletek azt mutatták, hogy a citromnak számos egészségügyi előnye van, például rákellenes, antimikrobiális, lipidcsökkentő és szív- és érrendszeri betegségek elleni védőhatás [6]. Ezenkívül a citromot a törzsi orvoslás májbetegségeinek kezelésére használják [7]. Azonban a citromlé krónikus alkohol okozta májkárosodásra gyakorolt hatásáról az irodalom nem számolt be. A vizsgálat célja a citromlé krónikus alkohol okozta májkárosodásra gyakorolt hatásának vizsgálata egerekben. Ezenkívül értékelték a citromlé in vitro antioxidáns kapacitását. E tanulmány eredményei értékes információkkal szolgálhatnak a nagyközönség számára az alkoholfogyasztás káros hatásainak csökkentése érdekében.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Vegyszerek és reagensek

A 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsav (Trolox), a 2,2′-azinobisz (3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav) -diammonium-só (ABTS), 2,4, A 6-tri (2-piridil) - S-triazint (TPTZ), a kvercetint, a gallusavat és a Folin – Ciocalteu fenol-reagensét a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA) szereztük be. A SOD, lipidperoxidáció, CAT és TG tartalom meghatározására szolgáló vizsgálati készleteket a Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute-tól (Nanjing, Kína) vásároltuk. Egyéb vegyszerek analitikai minőségűek voltak.

2.2. Anyagok

A citromot a kínai Guangzhou piacain szerezték be. A gyümölcsöt ioncserélt vízzel megtisztítottuk. Az ehető részt pontosan lemértük és ionmentesített vízzel (1: 1, m/v) összekevertük, majd az elegyet homogenizátorrá homogenizáltuk. Ezután a homogenizátumot 5000 g-vel 10 percig centrifugáltuk, és a felülúszót kaptuk. A felülúszót az antioxidáns kapacitás, az összes fenol-tartalom (TPC) és az összes flavonoid-tartalom (TFC) mérésére, valamint állatkísérletekhez használtuk. Ezenkívül állatkísérletekben az eredeti felülúszót és a hígított felülúszót (1: 5, illetve 1: 10, m/v) használták magas, közepes és alacsony dózisban. A citromlevet minden alkalommal frissen készítették szondázás előtt.

2.3. Állattanulmány

2.4. Biokémiai paraméterek mérése a szérumban

Az ALT, az AST és a TG szintjét a szérumban Hitachi-7180 automatizált biokémiai analizátorral (Hitachi, Japán) határoztuk meg a megfelelő reagenskészlettel.

2.5. TG és antioxidáns enzimaktivitások mérése a májban

A máj szövetében a TG, SOD és CAT szintjét a gyártó utasításainak megfelelően, a kereskedelmi forgalomban lévő detektálókészletekkel mértük.

2.6. A máj lipidperoxidációs szintjének mérése

A májszövetben a lipidperoxidáció szintjét tiobarbitursav (TBA) módszerrel mértük, a gyártó detektálókészleteivel, a gyártó utasításainak megfelelően. A referencia standard malondialdehid (MDA) volt, és az eredményeket nmol MDA ekvivalens/mg prot.

2.7. Máj hisztopatológiai értékelés

A 4% paraformaldehidben rögzített májszövetet paraffinba ágyazták, 5 μm vastagságúra tagolták, és a hisztopatológiai változások értékeléséhez hematoxilin-eozinnal (H&E) festették. A festett májszeletek hisztopatológiai változásait fényes mezőjű mikroszkóp alatt figyeltük meg.

2.8. Vas-redukáló antioxidáns erő (FRAP) teszt

Az FRAP vizsgálatot az irodalomban leírt módszer alapján hajtották végre [9]. Röviden: a FRAP reagenst 10 mmol/l TPTZ-oldatból, 20 mmol/l vas (III) -klorid-oldatból és 300 mmol/l nátrium-acetát-pufferoldatból (pH 3,6) készítettük 1: 1: 10 térfogatarányban. ill. 100 ml hígított mintát adunk 3 ml FRAP reagenshez, és az elegyet 4 perc elteltével 593 nm-en mérjük. A standard görbét FeSO4 oldattal határoztuk meg, és az eredményeket μmol Fe (II)/g citrom száraz tömegben fejeztük ki.

2.9. Trolox egyenértékű antioxidáns kapacitás (TEAC) teszt

A TEAC vizsgálatot az irodalomban leírt eljárás szerint hajtottuk végre [10]. Röviden: az ABTS • + törzsoldatot 2,45 mmol/l kálium-perszulfátból és 7 mmol/l ABTS oldatból készítettük 1: 1 térfogatarányban, majd 16 órán át sötétben helyeztük szobahőmérsékleten. Az ABTS • + munkaoldatot a törzsoldat hígításával készítettük, és az ABTS • + munkaoldat abszorbanciája 0,710 ± 0,05 volt 734 nm-en. 100 μl hígított mintát összekevertünk 3,8 ml ABTS • + munkaoldattal, és a keverék abszorbanciáját 734 nm-en mértük 6 perc elteltével, és kiszámítottuk az abszorbanciagátlás százalékát 734 nm-en. A referencia standard a Trolox volt, és az eredményeket μmol Trolox/g citrom száraz tömegben fejeztük ki.

2.10. A TPC meghatározása

A TPC-t az irodalom szerint mértük [11]. Röviden: 0,50 ml hígított mintát adtunk 2,5 ml 0,2 mmol/l Folin – Ciocalteu reagenshez. 4 perc múlva 2 ml telített nátrium-karbonát-oldatot adunk hozzá. 2 órán át szobahőmérsékleten végzett inkubálás után a keverék abszorbanciáját 760 nm-en mértük. A referencia standard galluszsav volt, és az eredményeket mg galluszsav-ekvivalens (GAE)/g citrom száraz tömegben fejeztük ki.

2.11. A TFC meghatározása

A TFC-t az irodalom szerint mértük [12]. Röviden, 0,50 ml mintát összekevertünk 1,5 ml 95% -os etanollal (v/v), 0,1 ml 10% -os alumínium-kloriddal (w/v), 0,1 ml 1 mol/l kálium-acetáttal és 2,8 ml etanollal. víz. 30 percig szobahőmérsékleten végzett inkubálás után a keverék abszorbanciáját 415 nm-en határoztuk meg. A referencia standard a kvercetin volt, és az eredményeket mg quercetin-ekvivalens (QE)/g citrom száraz tömegben fejeztük ki.

2.12. Statisztikai analízis

A statisztikai elemzést egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA) végeztük, post hoc LSD teszttel, SPSS 13.0 szoftverrel. p Az 1. ábra, az alkohol beadása jelentőshez vezetett (p 2. ábra (a)). A citromlé adagolása dózisfüggő módon csökkentette a TG felhalmozódását, különösen a citromlé csoport nagy koncentrációjában (p 2. ábra (b)). Közepes és magas koncentrációjú citromlé beadása szignifikánsan (p 3. ábra. A kontroll csoportéhoz képest szignifikáns volt (p 4. ábra a máj antioxidáns enzim aktivitásának eredményeit mutatja öt csoportban. A máj SOD szintje emelkedett szignifikánsan (p 0,05) a modellcsoportban a kontroll csoporttal összehasonlítva, azonban a citromlével végzett kezelés szignifikánsan (p 1. táblázat .

Jegyzet. Kontroll: normál csoport; Modell: alkoholcsoport; LL: alkohol és alacsony dózisú citromlé-csoport; LM: alkohol és közepes adag citromlé csoport; LH: alkohol és nagy adag citromlé csoport. ∗ azt jelenti, hogy a modellcsoportban a paraméterek szintje szignifikánsan megnőtt (p 5. ábra). Nem észleltek kóros rendellenességet a kontroll csoport májában, konzervált citoplazmával és különálló maggal, amint az az 5. ábrán (a) látható. Az 5. (b) ábrán a modellcsoportban megfigyelték, hogy az etanol nekrózisváltozásokat és jelentős kis zsírcseppek változását váltotta ki a máj szakaszában. Az egerek májjai azonban minden citromlével kezelt csoportban észrevehető gyógyulást mutattak az etanol által kiváltott májkárosodásban, kevesebb apró zsírcsepp változással és hepatocita nekrózis jellemzőkkel.

Az egerekből vett májszelvények mikroszkópos felvételei. a) normál csoport; (b) alkoholcsoport; c) alkohol és alacsony dózisú citromlé-csoport; d) alkohol és közepes adag citromlé-csoport; e) alkohol és nagy adag citromlé csoport. A nyíl a kis zsírcseppek változásának állapotát jelzi, a kör pedig a hepatocyták nekrózisát jelzi, amely főként alkohol modellcsoportban fordul elő.

3.6. A citromlé in vitro antioxidáns aktivitása, összes fenoltartalma (TPC) és teljes flavonoidtartalma (TFC)

A citrom in vitro antioxidáns aktivitását vas-redukáló antioxidáns erő (FRAP) és Trolox ekvivalens antioxidáns kapacitás (TEAC) vizsgálatokkal értékeltük. A FRAP és a TEAC értékek 50,82 ± 2,70 μmol Fe (II)/g száraz tömeg (DW), illetve 19,88 ± 0,66 μmol Trolox/g DW voltak. A citrom teljes fenoltartalma (TPC) és teljes flavonoidtartalma (TFC) 6,21 ± 0,28 mg GAE/g DW, illetve 0,30 ± 0,03 mg QE/g DW volt,.

4. Megbeszélés

Az alkoholfogyasztási rendellenességek jelentős betegségeket okoznak, és a máj a leginkább hátrányosan érintett szerv. Jelen tanulmányban a citromlé krónikus alkohol okozta májkárosodására gyakorolt hatásait vizsgálták egerekben. Az etanol által kiváltott májkárosodást egerekben az AST és az ALT szintjének emelkedése bizonyította. A citromlével végzett kezelés csökkentette az AST és az ALT szintjének emelkedését a szérumban. Az aminotranszferázok (AST vagy ALT) aktivitásának visszatérése a szérumban a normális szintre utal a hepatociták regenerálódására és a máj parenchyma gyógyulására; ezért a citromlé védő hatással volt az alkohol okozta májkárosodásra. Az eredmények összhangban voltak a korábbi jelentésekkel, amelyek azt mutatták, hogy a citrom hepatoprotektív hatást gyakorol a szén-tetraklorid és az akut testmozgás által kiváltott májkárosodásra [7, 13]. Ezen túlmenően a krónikus alkohol okozta májkárosodást a máj hisztopatológiai változásai tovább igazolták a jelen tanulmányban, és a citromlével történő kezelés szintén jelentősen javította a máj hisztopatológiai változásait, ami tovább erősítette a citromlé hepatoprotektív aktivitását alkohol okozta májkárosodás esetén. egerekben.

A máj steatosis a máj legkorábbi betegsége a krónikus etanolfogyasztás miatt, a zsírfelhalmozódás jellemzőivel. Általánosan elfogadott, hogy a máj steatosisának kialakulásakor az etanol-expozíció növeli a redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid/oxidált nikotinamid-adenin-dinukleotid arányát hepatocitákban, amelyek megzavarják a mitokondriális zsírsav β-oxidációját és tovább indukálják a steatosist [15]. Ebben a tanulmányban a máj steatosisának alkohol okozta előfordulását a megnövekedett máj TG-tartalom és a hisztopatológiai változások igazolták. A citromlével történő kezelés jelentősen csökkentette a máj TG-tartalmát és javította a sérült hisztopatológiai változásokat. Különösen a nagy adag citromlevet kapott egerek szinte teljesen normalizálódtak.

Ebben a tanulmányban a citromlé védelmi hatást tárt fel a krónikus alkohol okozta májkárosodásra. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a citrom különféle bioaktív összetevőket tartalmaz, a hepatoprotektív hatás több mechanizmus együttes fellépésének eredménye lehet, és nehéz tisztázni a hatás specifikus mechanizmusát. A citrom közepes in vitro antioxidáns kapacitása és a csökkent in vivo MDA-szint azt jelzi, hogy a citrom csökkentheti az etanol által kiváltott oxidatív stresszt, így hepatoprotektív hatást fejthet ki. Ez a tanulmány megállapította, hogy a citromlé erős májvédő hatással rendelkezik, amely értékes információkat nyújt a nagyközönség számára az alkoholfogyasztás káros hatásainak csökkentése érdekében. A jövőben el kell különíteni és azonosítani kell a citromlé aktív komponenseit, és fel kell tárni a tisztított vegyület hatásmechanizmusát, beleértve a vékonybélre gyakorolt hatást is.

5. Következtetések

A krónikus alkoholfogyasztás májkárosodást okozhat. A citromlé széles körben elfogyasztott italként könnyen elérhető. Ebben a tanulmányban azt tapasztaltuk, hogy a citromlével történő kezelés hepatoprotektív hatást fejtett ki az alkohol okozta májkárosodásra egerekben a szérum ALT és AST, valamint a máj TG és lipid peroxidáció szintjének csökkentése révén. Ezenkívül a citrom in vitro antioxidáns kísérlete megmutatta, hogy a citrom közepes in vitro antioxidáns kapacitással rendelkezik. Ezért feltételezzük, hogy a májvédő hatások összefüggésben lehetnek a citromlé antioxidáns kapacitásával. Az eredmények azt mutatták, hogy a citromlé potenciális étrend-kiegészítő lehet a krónikus alkoholfogyasztással összefüggő májkárosodások megelőzésében és kezelésében.

Köszönetnyilvánítás

Ezt a munkát a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81372976 sz.), A Guangdong tartományi tudományos és technológiai program kulcsprojektje (2014B020205002 sz.) És a Sun Yat-sen University száz tehetségű programja támogatta.