Határok az immunológiában

Táplálkozási immunológia

Szerkesztette
Jia Sun

Jiangnan Egyetem, Kína

Felülvizsgálta
Charles E. McCall

Wake Forest Baptista Orvosi Központ, Egyesült Államok

Patricia C. Lisboa

Rio de Janeiro Állami Egyetem, Brazília

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

magas

  • Cikk letöltése
    • PDF letöltése
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Kiegészítő
      Anyag
  • Exportálás
    • EndNote
    • Referencia menedzser
    • Egyszerű TEXT fájl
    • BibTex
OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

  • 1 Alkalmazott Tudományok Iskola, Campinas Egyetem, Limeira, Brazília
  • 2 Elhízás és társbetegségek kutatóközpontja, Campinas Állami Egyetem, Limeira, Brazília

A szepszis a kórházi betegek egyik vezető halálozási oka, és az elhízás során megfigyelt krónikus és alacsony fokú gyulladás úgy tűnik, hogy rontja a fertőzések fogékonyságát és morbiditását. Kevéssé ismert azonban a rövid távú magas zsírtartalmú étrend (HFD) és a szepszis kialakulásában betöltött szerepe. Itt mutatjuk be először, hogy a rövid távú HFD-fogyasztás rontja a korai nikotin-acetilkolin-receptor α7 alegységet (α7nAChR) - mediált jelátvitelt, a kolinerg gyulladáscsökkentő út egyik fő összetevőjét, a hipotalamusz gyulladására és a veleszületett fókuszban. immunválasz. Az egereket 3 napig randomizálták HFD-re vagy standard chow-ra (SC), majd a vérmérgezést a lipopoliszacharid (LPS) letális intraperitoneális (i.p.) injekciójával vagy a vakbél ligációs és szúrt (CLP) műtéttel indukálták. Külön kísérletben mindkét csoport LPS-t (i.p.) vagy LPS-t (i.p.) kapott a szelektív α7nAChR agonistával, a PNU-282987-szel (i.p. vagy intracerebroventrikuláris; i.c.v.) együtt, és 2 órával a fertőzés után feláldozták őket. A rövid távú HFD-fogyasztás jelentősen csökkentette az α7nAChR mRNS és fehérje szintjét a hipotalamuszban és a májban (o -6 M oldat) 80 perccel az LPS-provokáció után, és az egereket további 40 perc múlva eutanizáltuk.

Túlélési arány

A túlélési arány meghatározásához mindkét csoportot (SC és HFD) lemértük, és 30 mg/kg-os LPS halálos dózist adtunk i.p. a korábban leírtak szerint (14). Ezzel egyidejűleg szepszist indukáltak SC-vel vagy HFD-vel táplált egerekben CLP műtét segítségével. A túlélési arányt 2 óránként regisztráltuk.

Szövetkivonás

Valamennyi egeret altattuk (200 mg/ttkg ketamin és 5 mg/ttkg diazepám, i.p.), majd eutanáztuk a hipotalamusz, a máj és a lép extrakciója céljából. A kivont szöveteket szárazjégen gyorsfagyasztva tároltuk -80 ° C-on, amíg feldolgozásra nem került qRT-PCR vagy Western blot elemzés céljából.

A székletürítés és szúrás (CLP) műtét

A 3 napon át SC-vel vagy HFD-vel táplált egereket négy csoportra osztottuk: SC-ál és HFD-ál (egerek, amelyek csak a laparotomiás metszést kapták), valamint az SC-CLP és HFD-CLP (egerek, amelyekben a szepszist CLP indukálta).

Az egereket inhalációs érzéstelenítésben részesítették, és a hasban hosszanti metszésnek vetették alá őket úgy, hogy a vakbélüket a peritoneális üregen kívül tették ki, és a kötést selyemvezetékkel hajtották végre. A kitett vakbélt tűvel szúrtuk, és a széklet tartalmát extravazáltuk a hasüregbe. Ezt követően a vakbélet visszahelyezték az eredeti helyzetbe, és a hasat varrták.

A műtéti változó kontrolljaként az állatok másik felét (HFD-Sham és SC-Sham) csak a hasüreg laparotomiás bemetszésének vetették alá a vakbél expozíciója érdekében; a széklet tartalmának azonban nem volt lyukasztása vagy extravazálása.

Az eljárást követően az állatokat standard kontroll táplálékkal etették 24 órán keresztül, majd feláldozták őket a hipotalamusz gyűjtésére.

Sztereotaxiás műtét és intracerebroventrikuláris (i.c.v.) kanüláció

Az SC-vel vagy HFD-vel táplált egerek i.p. az érzéstelenítés injekcióját a korábban leírtak szerint (15), és sztereotaxiás készülékbe helyeztük. Ezt követően egy 10 μl-es Hamilton-fecskendő 26-os tűjét egy koponya sorjafuraton keresztül a laterális kamrába illesztették a bregmához viszonyítva a következő koordinátákon: elülső/hátsó tengely, 0,34 mm a bregmától hátulig; oldalirányú, 1 mm-re a középvonaltól; dorsoventralis, a koponya felületétől 2,2 mm-re. Fogászati ​​akril ragasztót adtak a kanül rögzítéséhez a helyes elhelyezést követően. A műtét után az állatokat meleg párnán hagyták kiheverni az altatásból. A kanül elhelyezését az i.c.v.-re adott dipsogén válasz mérésével teszteltük. angiotenzin II injekciója (2 μl 10-6 M oldat) (Sigma-Aldrich, MO, USA). A PNU-282987 kezelés idejét és dózisát időbeli lefolyású és dózis-válasz kísérletekből standardizálták (az adatokat nem közöljük).

Valós idejű PCR elemzés

A teljes RNS-t a hipotalamuszból, a májból és a lépből Trizol® Reagent (Invitrogen Corporation, CA, USA) segítségével extraháltuk a gyártó ajánlásai szerint, és egy Nanodrop ND-2000 (Thermo Electron, WI, USA) alkalmazásával számszerűsítettük. A reverz transzkripciót 3 μg teljes RNS-sel és nagy kapacitású cDNS reverz transzkripciós készlettel (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA) végeztük. A relatív expressziót TaqMan ™ detektáló rendszer és primerek segítségével határoztuk meg a célgének esetében: Mm01312230_m1 a CHRNS7 esetében; Mm00443258_m1 a TNF-a esetében; Mm00434228_m1 az IL-1β esetében; Mm00446190_m1 IL-6 esetében; Mm01288386_m1 IL-10 esetében; Mm00657889_mH a Chil3 esetében; Mm00436450_m1 a CXCL2 esetében; Mm00441242_m1 a CCL2 esetében; és az Mm00436454_m1 a CX3CL1 (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA) esetében. A GAPDH-t használtuk endogén kontrollként (4352339E egér GAPDH, Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA). Minden PCR reakció 20 ng cDNS-t tartalmazott. A génexpressziót ABI Prism 7500 Fast platformon végrehajtott valós idejű PCR-rel számszerűsítettük. Az adatokat egy Sequence Detection System 2.0.5 (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA) segítségével elemeztük, és az összehasonlító küszöbciklus (Ct) módszerrel (2 – ΔΔ Ct) meghatározott relatív értékekben fejeztük ki a gyártó ajánlásai szerint. (16).

Western Blotting

Immunfluoreszcencia és konfokális mikroszkópia

ELISA a citokinkoncentráció meghatározására a szérumban és a hipotalamuszban

Az izolált hipotalamust és a szérumot azonnal fagyasztva tartottuk (−80). A hipotalamust sóoldatban, foszfáttal pufferolva, proteázgátlókkal kiegészítve, beadruptor®-ban közepes sebességgel 15 másodpercig homogenizáltuk. Ezután a mintákat 11 000 fordulat/perc sebességgel 20 percig (4 ° C) centrifugáltuk az oldhatatlan anyag eltávolítása érdekében, és a vizsgálathoz csak a felülúszót használtuk. A citokinek koncentrációját a hipotalamuszban és a szérumban (TNF-α és IL-1β) a felülúszókban ELISA-val értékeltük Duo Set kit (R&D System) és IL6 segítségével IL-6 egér ELISA kit (Thermofischer Scientific) alkalmazásával. A koncentrációkat a mintákban lévő fehérje mennyiségével normalizáltuk, amelyet a Bradford által leírt módszerrel határoztak meg.

Statisztikai analízis

Idézet: Souza ACP, Souza CM, Amaral CL, Lemes SF, Santucci LF, Milanski M, Torsoni AS és Torsoni MA (2019) A rövid távú magas zsírtartalmú étrend-fogyasztás csökkenti a nikotin-acetilkolin-receptor α7 alegységének (α7nAChR) hipotalamusi expresszióját Hatással van a gyulladáscsökkentő reakcióra a szepszis egérmodelljében. Elülső. Immunol. 10: 565. doi: 10.3389/fimmu.2019.00565

Beérkezett: 2018. május 19 .; Elfogadva: 2019. március 4 .;
Publikálva: 2019. március 22.

Jia Sun, Jiangnan Egyetem, Kína

Charles E. McCall, Wake Forest Baptista Orvosi Központ, Egyesült Államok
Patricia Cristina Lisboa, Rio de Janeiro Állami Egyetem, Brazília