A koffein farmakokinetikája a kávé beöntés és az orális kávéfogyasztás egyszeri beadását követően egészséges férfi alanyokban

Supanimit Teekachunhatean

1 Farmakológiai Tanszék, Orvostudományi Kar, Chiang Mai Egyetem, Chiang Mai 50200, Thaiföld

2 Thai Hagyományos és Kiegészítő Orvostudományi Központ, Orvostudományi Kar, Chiang Mai Egyetem, Chiang Mai 50200, Thaiföld

Nisanuch Tosri

3 Phisaleeh Kórház, Nakhon Sawan 60220, Thaiföld

Noppamas Rojanasthien

1 Farmakológiai Tanszék, Orvostudományi Kar, Chiang Mai Egyetem, Chiang Mai 50200, Thaiföld

Somdet Srichairatanakool

4 Biokémiai Tanszék, Orvostudományi Kar, Chiang Mai Egyetem, Chiang Mai 50200, Thaiföld

Chaichan Sangdee

1 Farmakológiai Tanszék, Orvostudományi Kar, Chiang Mai Egyetem, Chiang Mai 50200, Thaiföld

Absztrakt

1. Bemutatkozás

2. Anyagok és módszerek

2.1. Dizájnt tanulni

Ez a tanulmány a vizsgálattal kapcsolatos alelemzés volt, amelyről Teekachunhatean et al. [9]. Ez a vizsgálat nyílt, randomizált kétfázisú crossover vizsgálat volt. Tizenegy egészséges alanyot véletlenszerűen osztottak be, hogy vagy 500 ml kávé beöntést kapjanak 10 percig, vagy hogy 180 ml kávé italt fogyasszanak. Legalább 10 napos lemosási időszak után az összes alanyot átváltották, hogy megkapja az alternatív kávéeljárást. Az alanyokat véletlenszerűen egy számítógép által létrehozott lista alapján választották ki. A kiosztási sorrendet úgy valósítottuk meg, hogy a kiosztási kártyákat átlátszatlan, lezárt és kapcsolt borítékokban helyezték el az elrejtés megőrzése érdekében. A borítékokat előre megszámozták, és csak akkor nyitották meg egymást követően, amikor a beiratkozott alanyok elvégezték az összes alapértékelést, és ideje volt kiosztani, hogy melyik kávét kell először beadni egy adott sorrendben.

2.2. Tárgyak

2.3. Kávé beöntés és kávé beöntés eljárás

A beöntési eljárásban használt kávéoldatot 4 g finomra őrölt kávébab (VS kávé, gyártó: V.S. coffee, Thaiföld) keverésével 100 ml tisztított vízzel készítettük. Az oldatot 100 ° C-on 15 percig (percig) forraljuk, majd kb. 15 percig 60 ° C-on pároljuk. Ezután az oldatot finom szitán leszűrjük, a teljes térfogatot 500 ml-re állítva, majd hagyjuk lehűlni 37 ° C-ra.

Az ebben a vizsgálatban használt kávé beöntés eszközei az eldobható kereskedelmi készlet voltak (Mexikóban gyártott Cleansing Enema készlet, a Thanyaphu Co. Ltd., Thaiföld behozottja), amely egy műanyag fúvókából áll, amelyet cső köt össze egy műanyag zacskóba, amely a kávét tartalmazza. beöntés folyadék. A fúvókát 2 csepp szerves olívaolajjal kenték meg, majd 2 hüvelyknyit helyeztek a végbélnyílásba, miközben az alany a bal oldalán feküdt, lábaival a hasába görbült. Az ágy magassága 3 lábnyira volt a padló felett, míg a beöntéstáskát 5 méterrel a padló fölé akasztották. A beöntéstáskában lévő kávéoldatot 5–10 perc alatt teljesen beöntötték. Felkértük az alanyot, hogy tartsa 10 percig a kávé beöntése folyadékot. Ebben az időszakban az alany utasítást kapott, hogy 3,5 percig változtassa meg fekvő helyzetét a jobb oldalon, majd az evakuálás előtt 3 percre visszavált a bal oldalra, végül 3 percig a fekvő helyzetbe. A beöntési eljárást a Chiang Mai Egyetem Orvostudományi Karának Farmakológiai Tanszékén, a Klinikai Farmakológiai Osztályon hajtották végre, a kutatónő segítségével.

2.4. Orális kávéfogyasztás

Az ebben a vizsgálatban orális fogyasztásra használt kávé a kereskedelemben kapható, kész kávé ital (instant kávé tejjel és cukorral), a Red Bull Coffee, amelyet a TC Pharmaceutical Industry Co., Ltd. gyártott. 1 adag nettó mennyisége 180 volt. ml. Minden alanynak azt az utasítást adták, hogy az egész kávét 1 percen belül, majd 100 ml vizet fogyassza el.

2.5. A kávé beöntése és az orális kávéfogyasztás beadása

Az alanyokat arra kérték, hogy látogassanak el a Chiang Mai Egyetem Orvostudományi Karának Farmakológiai Klinika Klinikai Farmakológiai Osztályára a protokoll szerinti ütemterv szerint. Véletlenszerűen beosztották őket a kávé beöntésének befogadására vagy a kávéital szájon át történő fogyasztására. A vérmintákat különböző meghatározott időpontokban vettük (lásd alább). A vérmintavétel után 12 órával (h) az adagolás után az alanyokat a Klinikai Farmakológiai Osztályból engedték ki. Legalább 10 napos kimosási periódus után az alanyokat a második fázisra állítják át, ahol az alternatív kávékészítményt kapják, és a vérmintákat ugyanúgy gyűjtik. A 2 vizsgálati szakaszban azonos ételeket és folyadékokat szolgáltak fel. Valamennyi személynek a szűrés időpontjától a kutatási tanulmány végéig tartózkodnia kellett a koffeint tartalmazó italok (az ebben a tanulmányban megadottak kivételével) és az alkohol fogyasztásától. Az egyes kávéeljárások megkezdése után az alanyok folytatták a böjtöt, amíg a vizet és az ebédet 2, illetve 6 órával később felszolgálták.

2.6. Vérmintagyűjtés a koffein farmakokinetikai paramétereinek meghatározásához

Minden vizsgálati fázisban az alanyokat egy éjszakán át legalább 8 órán át éheztettük. A vénás vérmintákat az alkar vénájába behelyezett heparinizált IV katéteren keresztül vettük. Tizenöt ml vérmintát vettünk mindegyik alanyból a kávé beöntése vagy az orális kávéfogyasztás beadása előtt, majd ismét 10, 20, 30, 40 és 60 percet, valamint 1,5, 2, 4, 8 és 12 órát mindegyik után. eljárás. A vérgyűjtő csöveket 1200 fordulat/perc sebességgel 15 percig centrifugáltuk, majd a plazmát elválasztottuk és -80 ° C-on lefagyasztottuk későbbi elemzés céljából.

2.7. Koffein-koncentrációk meghatározása a kávéoldatokban

A koffeintartalom meghatározását a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) módszerrel és a korábban másutt ismertetett körülmények között módosítottuk [18, 19]. Minden kávékészítményből 1 ml-t (beöntés oldat vagy ital kész kávéital) 10-szeres hígítással 10% metanollal hígítottunk, majd 10 μl belső standarddal (IS, 100 μg/ml acetaminofen) adtunk hozzá. Öt µL mintaoldatot injektáltunk a HPLC rendszerbe. A kromatográfiás elválasztást 5 μm C18-on végeztük, 100 × 4,6 i.d. elemző és őroszlopok. A kromatográfiai állapot két mozgófázisból állt. Az alkalmazott mobil A fázis 1 mmol/l perklórsav/izopropanol (1000/56, v/v)/2,2 mmol/l nátrium-dodecil-szulfát volt, amelyet 1 ml/perc áramlási sebességgel, 7 percig szivattyúztunk az oszlopon. Az alkalmazott mobil B fázis 1 mmol/l perklórsav/izopropanol (1000/88, v/v)/3 mmol/l nátrium-dodecil-szulfát volt, és az oszlopon keresztül 1 ml/perc áramlási sebességgel 8 percig pumpáltuk, és az analitokat UV-abszorpcióval detektáltuk 274 nm-en, miközben az oszlopot 40 ° C-on tartottuk. Az ismeretlen minták koffeintartalmát lineáris regresszió alkalmazásával határoztuk meg a koffein és az IS csúcsmagasság-arányának és a megfelelő koffein-koncentráció (2 500–100 000 ng/ml) függvényében.

2.8. A koffein-koncentrációk meghatározása a plazmában

A vizsgálatot a korábban másutt leírt fehérje kicsapási eljárással módosítottuk [18, 20]. Kétszázötven μl mintaplasmából 10 μl IS-t adtunk, majd a plazmamint 380 μL acetonitrillel összekeverve kivontuk, és 20 percig szobahőmérsékleten tartottuk. Örvénykeverés után a fehérjét centrifugálással eltávolítottuk 14 000 g-nál (szobahőmérsékleten) 5 percig. A felülúszó alikvot részét (600 μl) eltávolítottuk és bepároltuk, majd vákuumban szárítottuk 2 órán át 60 ° C-on. A maradékot feloldottuk 50 μl mobil B fázissal, majd 20 percig örvényeltük meg. Ebből az oldatból öt μl-t injektáltunk a HPLC rendszerbe a fent leírtak szerint. A koffeint és az IS-t tartalmazó plazma kromatogramja az 1. ábrán látható. A koffein plazmakoncentrációit a koffein és az IS csúcsmagasság-arányának és a megfelelő koffein-koncentráció (0,1–4 μg/ml) interpolálásával határoztuk meg.

4,00 μg/ml belső standardot (IS, retenciós idő = 4,217 perc) és 4,00 μg/ml koffeint (retenciós idő = 7,082 perc) tartalmazó plazmaminta kromatogramja.

A napközbeni pontosság variációs együtthatójának (% CV) százaléka a plazma koffeinkoncentrációra 1,69 és 3,91% között mozgott, míg a napközi pontosság% -os CV értéke 4,47 és 5,78% között mozgott. A napközbeni és a napközi teszt eltérése a plazma koffein-koncentrációtól −8,45 és 2,00% között, illetve −3,43 és 5,52% között mozgott. A kvantifikáció alsó határa (LLOQ) 0,1 μg/ml volt. A koffein átlagos kinyerése a meghatározási eljárásból 96,97% volt.

2.9. A vérnyomás és a pulzus meghatározása

A vérnyomást és a pulzusszámot Omron digitális vérnyomásmérővel (IntelliSense, Model HEM-711, Omron Healthcare, Inc.) mértük a kávé beöntése vagy az orális kávéfogyasztás előtt, majd ismét 10, 20, 30, 40 és 60 perc és 1,5, 2, 4, 8 és 12 óra mindkét kávéeljárás után. Az alanyokat arra utasították, hogy minden mérés előtt tartsanak nyugodt, félig fekvő helyzetet egy 5 perces stabilizációs periódus alatt.

2.10. Adatok elemzése és statisztikai módszerek

Minden statisztikai elemzést az SPSS for Windows és a StatsDirect 2.5.6 alkalmazásával végeztünk. Az összes adatot összehasonlítottuk a kétoldali teszttel. A különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük P2-nél. A szisztolés vérnyomás, a diasztolés vérnyomás és a pulzus (HR) átlagos értéke 112,40 ± 6,87 Hgmm, 73,00 ± 8,52 Hgmm, illetve 69,20 ± 12,62 ütés/perc volt.

Minden kávéoldatból hat adagot mértünk a koffeintartalomra. Az átlagos koffeintartalom 107,24 ± 2,22 mg/500 ml volt a kávé beöntéses oldatnál, és 96,34 ± 1,39 mg/180 ml volt az italra kész kávéitalnál. A koffeintartalom ezen átlagértékei statisztikailag nem különböztek a beöntéshez készített kávéoldat és az italra kész kávéital között (P = 0,972).

A koffein átlagos plazma-koncentráció-idő profiljai és a koffein farmakokinetikai paraméterei (C max⁡, AUC0–12, AUC0 – ∞, T max⁡ és t 1/2) a kávé beöntés egyszeri beadása és az orális kávéfogyasztás után a 2. ábra, illetve az 1. táblázat mutatja. A kávé beöntéséből származó koffein C max⁡, AUC0–12 és AUC0 – mean átlagértéke körülbelül 3,5-szer lényegesen kisebb, mint a szájon át fogyasztott kávéé, annak ellenére, hogy kissé, de statisztikailag gyorsabb T max⁡. Mindazonáltal a mindkét kávéeljárás során kapott átlagos t 1/2 koffein statisztikailag nem különbözött.

Az átlagos plazma koffein-koncentráció-idő görbék a kávé beöntés (CE) vagy az orális kávéfogyasztás (CC) egyszeri beadását követően (n = 11). * Statisztikailag szignifikáns a csoportok között (P Richards DG, McMillin DL, Mein EA, Nelson CD. A vastagbél öntözései: a történelmi vita és a káros hatások áttekintése. Journal of Alternative and Complementary Medicine. 2006; 12 (4): 389 –393. [PubMed] [Google Tudós]