A Rosa damascena kivonat ígéretes hatása a magas zsírtartalmú étrend okozta alkoholmentes zsírmájra

Ida Davoodi

gyógyszerészi kar, Teheráni Orvostudományi Egyetem, Teherán, Irán

Roja Rahimi

b Hagyományos gyógyszerészeti tanszék, Hagyományos Orvostudományi Kar, Teheráni Orvostudományi Egyetem, Teherán, Irán

Mohammad Abdollahi

c Gyógyszerészeti és Gyógyszerésztudományi Kar Kutatóközpont, Teheráni Orvostudományi Egyetem, Teherán, Irán

Fatemeh Farzaei

d Orvosi Biológiai Kutatóközpont, Kermanshah Orvostudományi Egyetem, Kermanshah, Irán

Mohammad Hosein Farzaei

e Gyógyszerésztudományi Kutatóközpont, Kermanshah Orvostudományi Egyetem, Kermanshah, Irán

f PhytoPharmacology Érdekcsoport (PPIG), Egyetemes Tudományos Oktatási és Kutatási Hálózat (USERN), Kermanshah, Irán

Zahra Memariani

g Iráni hagyományos orvoslás, a hagyományos orvoslás és az orvostudomány története kutatóközpont, Babol Orvostudományi Egyetem, Babol, Irán

Fariba Najafi

h Kermanshah Orvostudományi Egyetem, Kermanshah, Irán

Absztrakt

A NAFLD krónikus májbetegség, amely a világ népességének nagy részét érinti, és anyagcsere- és májkárosodást okoz. A Rosa damascena malmot hagyományosan táplálékkiegészítőként használják májbetegségek esetén. Ezt a vizsgálatot a R. damascena standardizált kivonatának nem alkoholos zsírmájbetegség (NAFLD) állatmodelljére gyakorolt jótékony hatásának meghatározására végezték. A NAFLD-t magas zsírtartalmú étrend (HFD) indukálta Wistar patkányokban. A HFD patkányok növekedést mutattak (p Kulcsszavak: Zsírmáj, oxidatív stressz, Rosa damascena, étrend-kiegészítő, gyógynövény

Grafikai absztrakt

1. Bemutatkozás

Az alkoholmentes zsírmájbetegség (NAFLD) a zsír felhalmozódása a májszövetben, amely jelentős etanolfogyasztás hiányában meghaladja a súlyának 5–10% -át, és számos kapcsolódó rendellenességre utal, az egyszerű máj steatosistól a steatohepatitisig., előrehaladott fibrózis, valamint cirrhosis. 1 A zsírmáj és a máj triglicerid felhalmozódása kulcsfontosságú szerepet játszik a különböző anyagcserezavarok, például a cukorbetegség, az elhízás, az inzulinrezisztencia, a magas vérnyomás, valamint a diszlipidémia előrehaladásában, jelezve a NAFLD kezelésének kulcsfontosságú hozzájárulását az egészségfejlesztésben. 2 A legújabb bizonyítékok aggályokat vetettek fel azzal kapcsolatban, hogy a NAFLD új kockázati tényező lehet a májon kívüli rákos megbetegedésekben. 3 Jelenleg az emberi étrend és az életmód megváltozása miatt felmerült a NAFLD előfordulása, amelynek eredményeként ez a betegség az egyik leggyakoribb krónikus betegség. 4

A hagyományos gyógyszerek korlátozásait hasznosnak ítélték meg a NAFLD kezelésében, ideértve a súlyos káros hatásokat, a betegség megismétlődését és a gyógyszerkölcsönhatásokat a kezelések új erőforrásainak kiterjedt tendenciájához vezetnek. A természetes drogok hosszú ideje hatékonyan és biztonságosan használják a különböző nemzetek hagyományos orvoslásában. A zsírmáj patogenezisének táplálkozási vonatkozásaival kapcsolatos legújabb vizsgálatok a gyógynövénykivonatok és kiegészítők mint funkcionális élelmiszer-összetevők potenciális hatásainak értékelésére összpontosítottak a máj lipidfelhalmozódásának megakadályozásában. 5.

Flavonoidokat, glikozidokat, terpéneket és antocianinokat tartalmazó R. damascena csípőiből, szirmaiból és virágaiból fitokémiai összetevők széles skáláját izolálták. Az R. damascena fő hatóanyaga a fenolos vegyületek, beleértve a kaempferolt, a kvercetint, a gallusavat, a cianidin 3, 5, D-glikozidot. 12 β-citronellol, nonadekán, geraniol, nerol és kaempferol a R. damascena virág illékony olajának fő kémiai alkotóeleme. 13 A galaktozid, a xilozid, a galaktozid, a rutinosid és az arabinosid a növény glikozid komponensei közé tartozik. 12 Ezenkívül a karbonsav, a mircén, azlyn, a linalool, a geraniol és a C-vitamin a R. damascena további azonosított vegyületei. 9., 14. Jelen tanulmány a R. damascena standardizált kivonatának hatékonyságának vizsgálatára a NAFLD kísérleti modelljében és a lehetséges mechanizmusok feltárásával készült.

2. Anyag és módszer

2.1. Vegyszerek és reagensek

A triglicerid (TG), a koleszterin (Chol), a nagy sűrűségű lipoprotein (HDL), a kis sűrűségű lipoprotein (LDL), az alanin-aminotranszferáz (ALT) és az aszpartát-transzamináz (AST) reagenskészleteit (Sigma-Aldrich, Steinheim, Németország). Egyéb vegyszereket, hacsak másként nem jelezzük, a Sigma Chemicals Co.-tól (St. Louis, MO, USA) szereztünk be.

2.2. Növényi anyag és kitermelés

Az R. damascena virágokat 2015 júliusában gyűjtötték össze Teherán helyi gyógynövényboltjából, hitelesítették, és egy utalványmintát [No: PMP-507] letétbe helyeztek a Teheráni Orvostudományi Egyetem Gyógyszerésztudományi Kar herbáriumában. A virágokat szobahőmérsékleten árnyékban szárítottuk, és durva részecskékké őröltük. A hidroalkoholos extraktum előállításához 700 g növényi port háromszor 70% -os etanollal extraháltunk. Mindegyik kivont oldatot leszűrjük, és 40 ° C-on szárazra pároljuk, így 19,65% maradékot kapunk. Az R. damascena hidroalkoholos extraktumot (RHE) három polifenol (sziringinsav, galluszsav és kvercetin) alapján standardizáltuk HPLC módszerrel, a korábban leírtak szerint. 15

2.3. Állatmodellek és kísérleti tervezés

A hím 10 hetes Wistar-albino patkányokat (300-350 g) normál hőmérsékleti körülmények között (20-25 ° C), 12 órás világos/sötét ciklusban és relatív páratartalomban (55 ± 10%) helyeztük el. elegendő táplálék (standard pellet) és ad libitum víz elérése. Valamennyi állatgyakorlatot az Országos Egészségügyi Intézet laboratóriumi állatainak gondozására és felhasználására vonatkozó útmutató alapján hajtották végre, amelyet a Teheráni Orvostudományi Egyetem etikai bizottsága hagyott jóvá.

42 patkányt véletlenszerűen választottak szét hét, hat-hat csoportra. Az egyik csoport rutin étrendet kapott, mint általában. Más csoportokat magas zsírtartalmú étrenddel (HFD) tápláltak, amely 83% alaptakarmányt, 10% zsírzsírt, 5% tojássárgája port és 2% koleszterint tartalmazott, 8 héten keresztül. Két hetes vizsgálat után a HFD-csoportok tervezték, hogy vivőanyagot (desztillált víz), szimvasztatint (pozitív kontrollként), valamint 25, 50, 100 és 200 mg kg -1 RHE-t kapjanak. A szájon át történő kezelést 24 óránként, 6 héten keresztül végeztük. Hetente mértük a testtömegeket. A vizsgálat utolsó napján feláldozott patkányok vérmintáit gyűjtöttük a hasi aortából a TC, LDL, HDL, TG, ALT és AST mérésére.

2.4. Az oxidatív stressz biomarkerek értékelése

A vérmintákat EDTA-t tartalmazó csövekbe gyűjtöttük, és 3000 g-vel 15 percig centrifugáltuk az oxidatív stressz biomarkerek értékelése céljából. A következő biomarkerek meghatározásához az elválasztott plazmát -80 ° C-on tartottuk.

2.5. Myeloperoxidase (MPO)

Kiolvasztott plazmát és 0,167 mg/ml o-dianizidin-hidrokloridot és 0,0005% H2O2-t tartalmazó 50 mM foszfátpuffert keverünk össze. Ezt követően UV-látható spektrofotométerrel (GBC, Cintra 40) 3 percen keresztül 460 nm-en rögzítettük az abszorbanciát. Az MPO-aktivitás egy egységének meghatározása az abszorbancia változása percenként szobahőmérsékleten, a végső reakcióban.

2.6. Lipidperoxidáció (LPO)

Az LPO-t tiobarbitursav-reaktív anyagok vizsgálatával értékeltük. A triklór-ecetsavat (20%) vérmintákkal reagáltattuk, és a maradékot összekevertük 0,05 M H2SO4 oldattal. Ezután forrásban lévő vízfürdőben 2-tiobarbitursavat adunk hozzá, majd 30 percig inkubáljuk. Az elegy extrakciójához n-butanolt használtunk, és az abszorbanciát 532 nm-en regisztráltuk (ELISA olvasó, Biotek, Németország). 16.

2.7. Teljes tiolmolekula (TTM)

A plazma TTM szintjének értékelése érdekében az 5′5 ′ ditiobisznitrobenzoesavat (DTNB) vérmintákkal reagáltuk, így sárga komplexet kaptunk. Az abszorbanciát spektrofotometriával mértük 412 nm-en. 17.

2.8. Vas plazma redukáló képessége (FRAP)

Megmértük az FRAP-ot friss FRAP reagens (25 ml 0,3 M acetátpuffer, 2,5 ml TPTZ oldat és 2,5 ml FeCl3 · 6H2O oldat) felhasználásával, kiolvasztott plazmamintákkal keverve, és az abszorbanciát 593 nm-en rögzítettük. 18.

2.9. Szövettani elemzés

A hisztopatológiai elemzés kiértékeléséhez a formalin 10% -ában rögzített szegmenseket paraffinba ágyazottuk és hematoxilinnel és eozinnal festettük a máj steatosisának, gyulladásának és nekrózisának kimutatására. Egy vak patológus végezte el a szövettani értékelést.

2.10. Statisztikai analízis

Az adatokat SPSS elemezte (SPSS Inc., Chicago, Ill., USA). Többutas összehasonlításhoz egyirányú ANOVA-t, majd Newman – Keul post hoc tesztjét alkalmaztuk. A 0,05 alatti p értékeket szignifikánsnak tekintettük. Az eredményeket átlag ± ± az átlag standard hibájaként (SEM) fejezzük ki.

3. Eredmények

3.1. Az RHE hatása a súlygyarapodásra és a lipidprofilra

Asztal 1

Az R. damascena kivonat hatása a HFD által kiváltott zsírmájú patkányok testtömegére.

Testtömeg (g)

Normál	326,5 ± 16,03
HFD-vel táplált + V	367,33 ± 12,41 a
HFD-vel táplált + szimvasztatin (20 mg/kg)	337,16 ± 16,75 b
HFD-vel táplált + RHE 25 mg kg −1 nap −1	350,33 ± 22,50 a
HFD-vel táplált + RHE 50 mg kg −1 nap −1	348,33 ± 18,59 a, b
HFD-vel táplált + RHE 100 mg kg −1 nap −1	342,83 ± 17,21 b
HFD-vel táplált + RHE 200 mg kg −1 nap −1	335,83 ± 13,79 b

Az értékek átlag ± SEM. HFD: magas zsírtartalmú étrend; RHE: R. damascena hidroalkoholos kivonat; V: jármű.

Az értékek átlag ± SEM. V: jármű; HFD: magas zsírtartalmú étrend; RHE: R. damascena hidroalkoholos kivonat.

MPO (mieloperoxidáz) értékek a HFD által kiváltott zsírmájú állatokban. Az értékek átlag ± SEM. DS: Desztillált víz; HFD: magas zsírtartalmú étrend; RHE: Rosa damascena kivonat; SV: szimvasztatin. a Jelentősen különbözik a normál csoporthoz pb-n Jelentősen különbözik a HFD-táplált + DS-csoporttól pa szignifikánsan eltér a normál csoporthoz pb-n Jelentősen eltér a HFD-vel táplált + DS csoporthoz szignifikánsan különbözik a HFD-vel táplált + DS-csoporttól pa szignifikánsan eltér a normál csoporthoz pb-n Jelentősen eltér a HFD-vel táplált + DS-csoporttól p-nél 6. ábra A normál patkány májszövetét mutatja be, amelyben nagy, kerek és meglehetősen euchromatikus és gyulladásos sejtek nélküli magok jelentek meg. Magasabb steatosis volt megfigyelhető azoknál az állatoknál, akiket HFD-vel etettek 8 hétig (6. ábra C). A máj steatosisát a májszövet festésével (hematoxilin-eozin) határoztuk meg. A HFD-vel etetett állatokban súlyos zsírvakuolok felhalmozódása a hepatociták citoplazmájában, steatohepatitis és pericentralis nekrózis, valamint szétszórt gyulladásos sejtek beszivárgása volt látható (6. ábra C). Amint azt a 6. B ábra mutatja, a szimvasztatin csoport májsejtjeinek korlátozott tünetei azt jelzik, hogy a gyógyszer megakadályozza a trigliceridek felhalmozódását a hepatocitákban. A steatohepatitis és a nekrózis nyilvánvalóan elnyomott RHE kezeléssel (6. ábra D).

4. Megbeszélés

Az alkoholmentes zsírmájbetegség (NAFLD) a krónikus májbetegségek gyakori oka, és prevalenciája az elmúlt évtizedben megközelítőleg megduplázódott az elhízás növekvő járványával. 19 A NAFLD szorosan összefügg az úgynevezett metabolikus szindrómával, a cukorbetegséggel, a magas vérnyomással, az érelmeszesedéssel, a hipertrigliceridémiával és az elhízással. Az egészségtelen táplálkozási szokások és a magas kalóriatartalmú étrend a legfontosabb kockázati tényezők közé tartozik. Másrészt számos tanulmány kimutatta, hogy a mediterrán étrend, különféle gyógynövények alkalmazása és telítetlen zsírsavak fogyasztása csökkenti a májbetegségek, köztük a NAFLD előfordulását és/vagy súlyosságát. A NAFLD az inzulinrezisztenciával és a hiperinsulinémiával társul, ami a zsírszövetekben az inzulin antilipolitikus hatásának rezisztenciájához vezet, a szabad zsírsavak növekedésével. 21, 22

A NAFLD számára korlátozottan vannak olyan hagyományos gyógyszerek, amelyek eltérő káros hatásokkal bírnak; ezért a lipidcsökkentő és antioxidáns, valamint gyulladáscsökkentő hatású gyógynövényes gyógyszerek jótékony szerepet játszhatnak a betegség kezelésében. 23

A R. damascena-t hagyományosan különböző betegségeknél alkalmazzák, beleértve a gyomor-bélrendszeri betegségeket is. 9 A R. damascena friss nedve in vitro antioxidáns potenciális hatást mutatott. 24 Jelen tanulmány megerősítette az RHE hatékonyságát a NAFLD állatmodelljében. Ebben a vizsgálatban a NAFLD-t magas zsírtartalmú étrend indukálta, és értékelték a kezelt állatok súlygyarapodásának, valamint a lipidprofilnak az RHE-vel történő kezelésének eredményét. Az RHE minden dózisa mérsékelheti a lipid plazmaszintét HFD-diéta alatt patkányokban a vivőanyaggal kezelt állatokhoz képest. Az RHE és a szimvasztatin kezelés elnyomhatja az AST és az ALT szintjét. Az RHE kezelés NAFLD-ben kifejtett jótékony hatásait hisztopatológiai vizsgálatokban is értékelik.

A NAFLD patogenezisében fontos kockázati tényező az oxidatív stressz. Kimutatták, hogy a citotoxikus szabad zsírsavak krónikus oxidatív stressz által okozott oxidációja a citokin szabályozásához és a máj antioxidáns szintjének kimerüléséhez vezethet. 25 A szabad gyököket manapság számos krónikus rendellenesség, köztük májbetegség gyulladásának és szövetkárosodásának egyik legfőbb gyanúsítottjaként ismerik. A lipidperoxidáció termékei, például a malondialdehid, a GGT és az oxidált LDL, amelyek a NAFLD betegeknél fokozódnak, összefüggésben lehetnek az antioxidánsok csökkenésével. 28 Ezért az antioxidáns kiegészítők alkalmazása fontos szerepet játszhat, és a NAFLD egyik jelenlegi farmakológiai kezelése. Memariani és munkatársai korábbi vizsgálata az R. damascena virágaiból származó fenolkomponensek HPLC-analízissel történő meghatározására három fenolos vegyület kimutatását és mennyiségi meghatározását eredményezte, beleértve a gallusavat (118,213 ± 0,12 mg/g szárított kivonat), a kvercetint (12,86 ± 0,31 mg)./g szárított kivonat) és fecskendősav (3,48 ± 0,19 mg/g szárított kivonat). Ezeknek a polifenoloknak a meghatározását HPLC analízissel végeztük az RHE standardizálása céljából.

5. Következtetés

A Rosaceace családból származó R. damascena hagyományosan alkalmazott gyógynövény, amely számos gyomor-bélrendszeri szövődmény esetén mutatott jótékony hatást. A jelenlegi tanulmány kimutatta az R. damascena mint étrend-kiegészítő és alternatív gyógyszer pozitív hatásait a NAFLD kezelésében. Az R. damascena jelentősen csökkentette a szérum TG, koleszterin, LDL és májenzimek emelkedését. Az antioxidáns státusz javítása, valamint a fenolos összetevők által közvetített hepatoprotektív aktivitás ezen természetes gyógymód fő potenciális hatásmechanizmusa. Mivel ez a növény jól ismert és biztonságos, ezért jelölt lehet adjuváns terápiaként, a hagyományos farmakológiai kezelésekkel együtt a NAFLD-ben szenvedő betegek jövőbeni humán vizsgálatai során.

Összeférhetetlenség

A szerzők kijelentik, hogy nincsenek összeférhetetlenségük.