A Zanthoxylum limonella (Dennst.) Alston farmakognosztikai specifikációja: gyümölcsök és magvak Thaiföldön

Rawiwan Charoensup

Egészségtudományi Iskola, Mae Fah Luang Egyetem, Chiang Rai 57100, Thaiföld

Thidarat Duangyod

Egészségtudományi Iskola, Mae Fah Luang Egyetem, Chiang Rai 57100, Thaiföld

Pravaree Phuneerub

Egészségtudományi Iskola, Mae Fah Luang Egyetem, Chiang Rai 57100, Thaiföld

Chatubhong Singharachai

Egészségtudományi Iskola, Mae Fah Luang Egyetem, Chiang Rai 57100, Thaiföld

Absztrakt

Zanthoxylum limonella (Dennst.) Alston. (Rutaceae) vagy a Ma-khwaen a thai hagyományos orvoslás egyik gyógynövénye. A Z. limonella gyümölcsök és magvak farmakognosztikai jellemzőinek és kémiai alkotóelemeinek vizsgálata. A Z. limonella gyümölcsét és magvát 15 forrásból gyűjtötték Thaiföldön; majd megvizsgálta a farmakognosztikai specifikációt a WHO gyógynövény-anyagok minőség-ellenőrzési módszere alapján. A Z. limonella porok mikroszkópos meghatározása kimutatta a mezokarp töredékét, a barna vitta töredékét, az olajmirigyeket, az endokarp töredékét és az olajgömböt, trichómot és halványbarna kősejteket tartalmazó endospermiumot. A sztómás index és a pellucid pontok mm2-ben 19,87, illetve 4,2 voltak. A fizikai-kémiai paraméterek azt mutatják, hogy a szárítás során bekövetkező veszteség, a víztartalom, az összes hamu és a savban oldhatatlan hamu nem lehet nagyobb, mint a szárított tömeg 17,90%, 9,18%, 4,50% és 0,60%; míg az etanol, a víz és a hexán extrakciós értéke és az illékony olaj tartalma nem szabad. Gázkromatográfia/tömegspektrometria, farmakognosztikai specifikáció, fizikai-kémiai paraméter, vékonyréteg-kromatográfiai ujjlenyomat, Zanthoxylum limonella

BEVEZETÉS

A Zanthoxylum limonella (Dennst.) Alston., Thaiföldön „Ma-khwaen” néven a Rutaceae családhoz tartozik, és örökzöld fa. Hagyományos orvoslásként használták, beleértve a gyümölcsöket és a magokat fűszerként, és vannak illóolajok, amelyek stimuláló hatást gyakorolnak az izomterhelés csökkentésére [1], és egyes metabolitok citotoxikus, antibakteriális, gyulladáscsökkentő, gombaellenes és érzéstelenítő tulajdonságokat mutatnak. [2,3] A limonén a Z. limonella egyik fő vegyülete, amely a narancsillatú monoterpén. Általában élelmiszer- és kozmetikai termékeknél alkalmazták. [4,5] A gázkromatográfia/tömegspektrometria (GC/MS) elfogadott módszer a növényi gyógyszerek illékony összetevőinek elemzésére érzékenysége, stabilitása és magas hatékonysága miatt. [6] A Z. limonella farmakognosztikai értékeléséről szóló jelentést Thaiföldön azonban nem készítették el teljes egészében. Ebben a tanulmányban a Thaiföldön 15 forrásból származó Z. limonella gyümölcsét és magvát ellenőrizték a gyógyászati növényi anyagok minőség-ellenőrzési módszerének WHO-iránymutatása alapján annak érdekében, hogy megállapítsák a minőség és tisztaság garantálásához biztosított farmakognosztikai paramétereket és szabványosítást.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Vegyszer és reagens

n-Hexánt (AR minőségű), diklór-metánt (AR minőségű), toluolt (AR minőségű), 99,9% etanolt (abszolút denaturált) (AR minőségű) és 37% -os sósavat (AR minőségű) vásároltak a QRëC-től (Új-Zéland). 98/100% hangyasavat (AR minőségű) a Fisher tudományos cégtől (Loughborough, Egyesült Királyság) vásároltunk. A metanolt (AR minőségű) és az etil-acetátot (AR minőségű) az RCI Labscan-tól (Bangkok, Thaiföld) vásárolták.

Növényi anyagok

Tizenöt mintát gyűjtöttek a Z. limonella gyümölcséből és magjából Thaiföld különböző földrajzi területeiről, ideértve a következőket: Mae Hong Son, Chiang Mai, Chiang Rai (Mae Sai körzet), Chiang Rai (Doi Hang alkörzet), Chiang Rai (Wiang Chai körzet), Tak, Lam Pang, Uttaradit, Nan (Chetawan körzet), Nan (Na Muen körzet), Nan (Song Kawe körzet), Phrae (Muang körzet), Phrae (Song körzet), Lam Phun és Phayao. Ruangrungsi N. hitelesítette az összes nyers gyógyszerkészletet. Az utalvány mintákat a thaiföldi Mae Fah Luang Egyetem Egészségtudományi Karán helyezték el.

Makroszkopikus és mikroszkópos azonosítás

Z. limonella makroszkopikus jellegét a növény rajzaként illusztrálta a szerző. A Z. limonella gyümölcsök és magvak keresztmetszetének és porának anatómiai és szövettani jellemzőit mikroszkóp alatt megvizsgáltuk a növényi minták szerkezeti jellemzőinek, sejtjeinek és ergasztikus anyagainak azonosítására. [7,8,9,10,11,12,13 ]

Sztomatális index meghatározása

A sztómás indexet 30 levél felületén 1 mm 2 -enként 3 pontból számítottuk ki e képlet alkalmazásával. Sztomatális index = sztómák száma/(sztómák száma + epidermális sejtek száma) × 100. [7,13]

Pellucid pontok meghatározása

A pellucid pöttyök olyan kis területek, amelyeken világos színű, kör alakú területek láthatók, és a szórólap fényig tart. Vannak éteri olajok, aromás illékony olaj másodlagos növényi termékek, amelyek fényesen ragyognak, ha a nap ellen tartják, és amelyek általában a Rutaceae-ban találhatók. [7,13]

Fizikai-kémiai meghatározás

A Z. limonella gyümölcsök és magvak összes hamu, savban oldhatatlan hamu, száradási veszteség, víztartalom, illékony olajtartalma és extraktív anyag-értékei a WHO gyógynövény-anyagok minőség-ellenőrzési módszereire vonatkozó iránymutatásának megfelelően kerültek elvégzésre, az alábbiakban röviden ismertetve: [7] ]

Három gramm őrölt mintát 105 ° C-on állandó tömegig szárítottunk, hogy meghatározzuk a szárítás során bekövetkező veszteség százalékát. Ezután 3 g őrölt mintát égetünk 500 ° C-on fehéredésig, így kapjuk a széntelen teljes hamut. A hamut 25 ml sósavval (70 g/l) forraljuk; oldhatatlan anyagokat ismét 500 ° C-on 5 órán át égetünk, hogy megkapjuk a savban oldhatatlan hamu százalékos arányát. A víztartalmat azeotrop desztillációs módszerrel, vízzel telített toluol alkalmazásával határoztuk meg. Az illékony tartalmat Clevenger készülékkel határoztuk meg. Az extrakciós anyag meghatározása hexánnal, 95% -os etanollal és vízzel oldószerként történt. Öt gramm őrölt mintát 100 ml oldószerrel maceráltunk 6 órán át rázás közben és 18 órán át állni a szűrés előtt. A szűrlet húsz milliliterét vízfürdőn bepároljuk, majd 105 ° C-on tovább szárítjuk, amíg állandó súlyt nem kapunk.

Adatelemzés

A fizikai-kémiai paramétereket nagy átlag ± összesített standard eltérés (SD) értékekként (tömegszázalék) fejeztük ki. A nagy átlagot és az összesített SD értékeket 15 forrásból számították ki Thaiföldön, és mindegyik mintát három példányban készítették. [7]

Vékonyréteg-kromatográfiai azonosítás

A Z. limonella gyümölcsök és magvak etanolos kivonatait 10 mg/ml etanolban oldjuk. Minden mintából öt mikrolitert vittünk a vékonyréteg-kromatográfiás (TLC) lemezre. Szilikagélt 60 F254 használtunk bevonó anyagként. A mozgófázist hexán, toluol, etil-acetát, hangyasav (2: 5: 2: 1) keverékével alkalmaztuk. A foltokat ultraibolya (UV) fényben tettük láthatóvá 254 nm-en és 366 nm-en; majd detektáló reagenssel (10% kénsav metanolban) permetezzük, és 105 ° C-on 10 percig melegítjük. [9,14]

Gázkromatográfia/tömegspektrometriás elemzés

15 forrásból származó Z. limonellaolajat 10 μl/ml koncentrációjú hexánban tartalmazó keveréket alkalmaztunk a GC/MS elemzéshez. A GC ujjlenyomatát Agilent 6890N GC-vel határoztuk meg, amely HP-5ms kapilláris oszloppal (30 m × 0,25 mm, 0,25 μm filmvastagság) és Agilent 5973N MS detektorral volt felszerelve. A kemence hőmérsékletét 60 ° C-ról 240 ° C-ra emeltük állandó 3 ° C/perc sebességgel. Az injektálónyílást az elválasztás során 220 ° C-on tartottuk. A hordozógáz hélium volt, 1 ml/perc áramlási sebességgel. Az MS-t elektronionizációs móddal végeztük 70 eV-on. A tömegtartomány 30-300 amu volt. A Z. limonella olaj kémiai alkotóelemeit úgy határoztuk meg, hogy tömegspektrumukat és retenciós indexeiket illesztettük a Wiley Mass Spectral könyvtárhoz.

Eredmények és vita

Makroszkopikus és mikroszkópos azonosítás

Z. limonella (Dennst.) Alston egy 50 m magasságig növő fa. Kéreg barna tüske, 3-5 cm × 2-4 cm. A levelek váltakozó összetett levelek pengék, páratlan csúcsúak, lándzsás alakúak, 5-6 cm × 7-11 cm-esek, éles fűrészesek, csúcsuk arisztikus, egyenlőtlen az alapja, a levél felületén karcos. Virágok vannak nagy, összetett dichasiumban, polipetous rosaceous corolla és 5 fehér-sárga sziromban, 5 epipetalous porzóval. A gyümölcsök gömb alakú, 1-2 mm átmérőjű heszperídiumok. [15]

A makroszkopikus és mikroszkópos kiértékeléseket az 1-6. Ábrák szemléltették. A citológiai és szövettani jellemzés a mezokarp töredékét, a barna vitta töredékét, az olajmirigyeket, az endokarp töredékét és az olajgömböt tartalmazó trópusi és halványbarna kősejteket tartalmazza. Ez egy értékes berendezés a Z. limonella egyes összetevőinek azonosításához. A Rutaceae család kiemelkedő tulajdonságokkal rendelkezik a növény egy részében olajos mirigyet tartalmazó más növényeknél. Ennek a családnak a legfontosabb és diagnosztikus jellege a pellucid mirigy pöttyök jelenléte volt a levelekben, [16] amelyeknél Z. limonellának a pellucid pöttyök száma átlagosan 4,2 pont/mm 2 volt. Ezenkívül a sztómás indexet mikroszkóp alatt vizsgáltuk × 40 objektívvel és × 6 szemlencsével. A Z. limonella sztómája egyfajta anomocita vagy ranunculaceus (szabálytalan sejtű) volt, amelyet változó számú sejt vett körül, általában nem különbözött az epidermiszétől. [7] Ezt követően az egyes sztómák epidermális sejtjeinek számát négyzetmilliméterben (mm 2) a sztomatális index 19,43 volt.

A Zanthoxylum limonella termő ága