Határok a mikrobiológiában

Mikrobiális immunológia

Ez a cikk a kutatási téma része

Mikrobiális és környezeti tényezők autoimmun és gyulladásos betegségekben Az összes 18 cikk megtekintése

Szerkesztette

Ryo Inoue

Setsunan Egyetem, Japán

Felülvizsgálta

M. Victoria Delpino

CONICET Immunológiai, Genetikai és Metabolizmus Intézet (INIGEM), Argentína

Gustavo A. Romero-Perez

Kiotói Táplálkozási és Patológiai Intézet

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

Cikk letöltése
- PDF letöltése
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Kiegészítő
  Anyag
Exportálás
- EndNote
- Referencia menedzser
- Egyszerű TEXT fájl
- BibTex

OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

1 Fundamentális Orvostudományi és Biológiai Intézet, Kazan Szövetségi Egyetem, Kazan, Oroszország
2 Kazan Állami Orvostudományi Egyetem, Kazan, Oroszország
3 Nevada Biomedical Research Center, Reno, NV, USA
4 Klinikai Laboratóriumi Diagnosztikai Osztály, Kazan State Medical Academy, Kazan, Oroszország

Bevezetés

Helicobacter pylori (H. pylori) 1982-ben azonosították, és a gyomorhurut és a gyomorfekély kórokozójának javasolták (Marshall és Warren, 1984). Ez a spirál alakú gram-negatív baktérium kolonizálja a gyomor nyálkahártyáját, és krónikus fertőzésként fennmarad (Marshall és mtsai., 1985a; Morris és Nicholson, 1987). H. pylori az egyik leggyakoribb gyomor-bélrendszeri fertőzés, a felnőtt lakosság körülbelül 50% -ánál fordul elő (Sipponen et al., 1996; Kosunen et al., 1997). Nagy része a H. pylori a fertőzések továbbra is tünetmentesek, a hordozók csak 15% -ánál jelentkeznek tünetek (Atherton, 1998; Ernst és Gold, 2000). Kimutatták, hogy a gyakran kora gyermekkorban elért fertőzés a rossz higiéniával és az elszegényedett életkörülményekkel jár (Malaty és Graham, 1994; Kivi és mtsai, 2003; Konno és mtsai, 2005; Dattoli és mtsai, 2010). Úgy tartják H. pylori széklet-orális vagy orális-orális úton továbbítják (Goh et al., 2011).

A gyomor hám kolonizációja során, H. pylori tartós fertőzést hoz létre a nyákrétegben anélkül, hogy átlépné az epitheliális gátat (Noach et al., 1994). A fertőzést szövettanilag a felszíni hám degenerációja, a gyulladás és a leukocita beszivárgása jellemzi a gyomor nyálkahártyájába (Bodger és Crabtree, 1998; Peek és mtsai, 2010).

H. pylori a virulencia faktorok a szövetkárosodás fő okai, és magukban foglalják a vakuolizáló citotoxint (vacA), a citotoxinnal társított A gént (cagA) és a neutrofileket aktiváló fehérjét (HP-NAP; Atherton, 1998; Cellini és Donelli, 2000; Fu, 2014) . Kötése VacA a gyomorsejtekhez kiváltja a hám vakuolizációját és degenerációját, a mikrovillusok elvesztését és a citoplazmatikus szétesést (Goodwin és mtsai., 1986; Papini és mtsai., 1994; Garner és Cover, 1996; Smoot és mtsai., 1996). Állatkísérletek igazolták, hogy tisztított vacA a toxin gyomor hámkárosodást okoz, csekély hatással a gyulladásos leukocita infiltrációra (Telford et al., 1994; Ghiara et al., 1995). Ezenkívül kimutatták, hogy a cagA szorosan összefügg a helyi gyulladás kialakulásával és a pro-gyulladásos citokinek expressziójával (Peek et al., 1995). Ezenkívül felvetették, hogy a cagA gén és a közeli szekvenciák olyan fehérjéket kódolnak, amelyek szinergikusan hatnak, és elősegítik a gyulladásgátló citokinek termelését és szekrécióját (Tummuru et al., 1995; Censini et al., 1996), és hogy a virulencia faktor A HP-NAP elősegíti a neutrofil adhéziót, a kemotaxist és az aktivációt (Satin et al., 2000). Ezen virulencia faktorok együttes hatása a helyi szövet gyulladása, amelyet a gyomor hámsejtjeinek károsodása okoz, és a pro-gyulladásos citokin termelés aktiválása.

Itt bemutatjuk a gastroduodenitisben szenvedő gyermekek szérumában a citokin aktivációra vonatkozó adatokat. Hatvankét fiatalkorú gastroduodenitisben szenvedő fiatalt vontak be ebbe a vizsgálatba, 30-nál diagnosztizálták H. pylori fertőzés. Függetlenül a jelenlététől vagy hiányától H. pylori patogenitási markerek, a hatékony neutrofil kemoattraktánsok, a CXCL5 és a CXCL6 upregulációja történt. A neutrophil attrotáns prototípusú IL8 szérumszintje azonban statisztikailag nem különbözött a diagnózisok között. Ezért adataink azt sugallják, hogy egy új kemokinkészlet, a CXCL5 és a CXCL6, szerepet játszik a gyulladt gastroduodenális szövetek neutrofil-kereskedelmében. Érdekes megfigyelés volt továbbá, hogy a CCL25/GM-CSF arány jelentősen eltér egymástól H. pylori pozitív és negatív gastroduodenitisben szenvedő gyermekek.

Anyagok és metódusok

Tárgyak

Hatvankét beteget (24 fiú, 38 lány; 14,0 ± 2,1 év) kórházba szállítottak, akiket a republikánus gyermekgyógyászati kórházban (Kazan, Oroszország) gasztritisz és duodenitis diagnózissal diagnosztizáltak. A kezdeti diagnózis H. pylori a betegek 30 fertőzése klinikai megjelenésen és felső GI endoszkópián alapult. Jelenléte H. pylori karbamid lélegzetvizsgálattal és PCR-rel igazolták.

A biopsziákat minden egyes betegnél összegyűjtöttük a felső GI traktus endoszkópiája során: kettőt a gyomor antrális részéből a fő és a kisebb görbületek mentén, és 2-3 a gyomor testéből, a nagyobb és kisebb görbületek mentén. Ezenkívül gyomorbiopsziát gyűjtöttek három kontrollból, amelyek diagnosztikai eredménye a gasztroduodenális patológiákra diagnosztizálódott a felső GI traktus endoszkópiájával. Biopsziákat alkalmaztunk mind a PCR elemzésekhez, mind a szövettani vizsgálatokhoz.

Szérummintákat vettünk mind a 62 gasztritiszben és duodenitiszben szenvedő fiatalkorúból, valamint 20 életkor és nem szerint egyeztetett kontrollból. Valamennyi kontroll negatív volt a felső GI traktus fertőzésének vagy a gastritis tüneteinek szempontjából. A szérummintákat –80 ° C-on tároltuk. A Kazan Állami Orvostudományi Egyetem Etikai Bizottsága jóváhagyta ezt a vizsgálatot (N6, 2012.2.6.), És a Helsinkiben kiadott nyilatkozatnak és az „Egészségvédelem” szövetségi törvény 20. cikkével összhangban minden vizsgálati alany törvényes gondviselőjétől megkapta a tájékozott beleegyezést. Az Orosz Föderáció polgárainak joga ”(N323-Φ3, 2011.2.11.).

Karbamid légzési teszt

A megerősítéshez a Breath ID Hp-t (Exalenz, USA) használtuk H. pylori fertőzés. Ez a lélegzetvizsgálat a 13 C-val jelzett CO2 jelenlétét méri a beteg légzésében, miután egy 13 C-os jelzett karbamidot tartalmazó oldatot bevitt. 10 perc elteltével a kilélegzett levegőt összegyűjtjük és megvizsgáljuk 13 CO2 jelenlétét, ami jelzi H. pylori fertőzés.

PCR detektálása H. pylori

A biopsziás szövetből DNS-t nyertünk a Helicopol Kit segítségével (Lytech, Moszkva). H. pylori A pozitív biopsziákat PCR-rel elemeztük a kórokozó marker profiljára Helicopol II Kit segítségével (Lytech, Moszkva). Röviden: 2 μl teljes DNS-t összekevertünk 4 μl 10x PCR pufferrel, 2 μl 25 mM MgCl2-vel, 0,5 μl (100 pmol) primerrel, 40,7 μl desztillált vízzel és 0,3 μl (2,5 U) Taq DNS-polimerázzal. A reakcióelegyet ezután 35 ciklusnak vetjük alá, amelyek mindegyike 30 másodpercet tartalmaz 94 ° C-on, 30 másodperc 50 ° C-on és 2 perc 72 ° C-on. A PCR-termékeket 1% -os agarózgélen analizáltuk.

Citokin analízis

A szérum citokinszinteket Bio-Plex Pro Human Chemokine Panel (40-Plex; Bio-Rad, Hercules, CA), multiplex mágneses gyöngy alapú antitestdetektáló készlet alkalmazásával elemeztük.

Immunhisztokémiai elemzés

A kezdeti elemzés után felesleges klinikai diagnosztikai biopsziás minták voltak 21-től H. pylori pozitív és 13 negatív eset. Ezeket használtuk az immmunohisztokémiai elemzéshez. A lyukasztásos biopsziákat 4% paraformaldehidben rögzítettük 4 órán át, 4 ° C-on, majd 30% szacharózzal PBS-ben krioprotektáltuk. Immunhisztokémiai festést végeztünk 5 μm vastag metszeteken. A tárgylemezeket para-xinmentesítettük xilollal, és rehidratáltuk osztályozott alkoholsorozaton keresztül. A szöveti morfológiát fénymikroszkóppal értékeltük hematoxilin-eozin festéssel. Ezenkívül Alcian blue (pH 2,5) és periodikus sav Schiff (PAS) festést végeztek a szialomucinok jelenlétének kimutatására.

Statisztikai analízis

A statisztikai elemzést a STATISTICA 7.0 szoftvercsomag (StatSoft, Tulsa, OK) és az IBM SPSS Statistics 20 szoftvercsomag (IBM Corp, Armonk, NY, USA) segítségével végeztük. Az adatokat a folytonos változók mediánjaként mutatjuk be (5–95% -os tartomány). A független vizsgálati csoportok közötti különbségeket nem paraméteres módszerekkel tesztelték. Az 1. típusú hiba elhárítása érdekében a Kruskal – Wallis ANOVA by Ranks teszttel több független mintát követett a többszörös összehasonlítás (az összes pár) nem paraméteres poszt-hoc Steel-Dwass teszt A paraméter nélküli többszörös összehasonlítást [újraszámolták és megerősítették] az Steel-Dwass összes pár tesztjével JMP ® 13.0.0 szoftverrel (SAS Institute Inc., USA). A különbségeket jelentősnek tekintették a P Kulcsszavak: H. pylori, virulencia faktorok, citokinek, gastroduodenitis

Idézet: Khaiboullina SF, Abdulkhakov S, Khalikova A, Safina D, Martynova EV, Davidyuk Y, Khuzin F, Faizullina R, Lombardi VC, Cherepnev GV és Rizvanov AA (2016) Szérum citokin-aláírás, amely diszkriminál Helicobacter pylori Pozitív és negatív fiatalkori gastroduodenitis. Elülső. Microbiol. 7: 1916. doi: 10.3389/fmicb.2016.01916

Beérkezett: 2015. szeptember 10 .; Elfogadva: 2016. november 15 .;
Publikálva: 2016. december 15.

Ryo Inoue, Kiotó prefektúra Egyetem, Japán

M. Victoria Delpino, Országos Tudományos és Műszaki Kutatási Tanács (CONICET), Argentína
Gustavo Adolfo Romero-Perez, Kiotói Táplálkozási és Patológiai Intézet, Japán