Kacsa csőr atrófiájának és törpeszindrómájának diagnosztizálása és jellemzése Kína Csongkingban

Guang Wei Zhao

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Chongqing, Kína;

Tingting Huang

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

Di Wu

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

Liwu Zhang

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Chongqing, Kína;

3 Chongqing Health-Forever Biotech Co. Ltd., Chongqing, Kína .

Zeli Luo

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

Jia Liu

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

Xiaowei Yang

1 Állatbetegségek gyors diagnosztikai központja, Southwest University, Chongqing, Kína;

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Chongqing, Kína;

Absztrakt

A kacsacsőr atrófia és a törpeszakasz (BADS) 2015 óta újonnan megjelenő betegség Kínában. 2017 októberében egy azonosítatlan betegség fordult elő Cherry Valley kacsákban, Chongqing községben, Kínától délnyugatra. Az érintett madarak rövid csőr- és növekedési retardációs klinikai tüneteket mutattak. A betegség a késleltetett növekedés miatt körülbelül 20,00% -os morbiditást és súlyos fogyást okozott. A BADS kórokozójának azonosítása érdekében máj-, lép-, tüdő- és szívmintákat gyűjtöttünk vírusizoláció, hemagglutinációs teszt, PCR-azonosítás és részleges génszekvenálás céljából. Az izolált vírust kísérletileg SC16-nak nevezték el. A hemagglutinációs teszt azt mutatta, hogy a vírus negatív volt a csirke vörösvérsejtjeivel szemben. A PCR és a szekvenálási eredmények alapján a BADS kórokozója egy új kacsa eredetű liba parvovírus (DGPV) volt, míg ebben az esetben nem találtak más együttfertőző kórokozót. További elemzés betekintést nyújthat a DGPV kacsa elleni védekezési stratégiáiba.

Bevezetés

A kacsa csőr atrófiája és a törpegyulladás szindróma (BADS), amelyet a csőr és a nyelv diszpláziája jellemez, 2015 óta újonnan megjelenő betegség Kínában. 1

A BADS okozta szembeszökő súly- és méretvesztés miatt a betegség jelentős gazdasági veszteséget okoz a kínai kacsaipar számára. A vírusizoláció és a kísérleti állatfertőzés alapján egy új liba parvovírust (GPV) azonosítottak a BADS kórokozójaként az inasokban. 2 A GPV a Dependovirus nemzetség, a Parvoviridae család tagja, és az egyik kórokozó a Derzsy-féle kullancsok és pézsma kiskacsák kórképének. 3 A BADS legutóbbi előfordulását a Cherry Valley kacsákban azonban egy új GPV-vel kapcsolatos vírus okozza, amelyet kacsa eredetű GPV-nek (DGPV) vagy új GPV-vel kapcsolatos vírusnak (NGPV) neveznek. 2 Kínában a Cherry Valley kacsa és az öszvér kacsa BADS-sel izolált DGPV törzsei 90,80% és 94,60% nukleotidszekvencia azonosságot mutatnak a klasszikus GPV izolátumokkal, jelezve, hogy ez a GPV származék törzse. 4

A BADS kitörése Kínában nagyon gyors és széles körű volt. Az elmúlt két évben BADS eseteket találtak főleg kacsatermelő tartományokban, köztük Fujian, Jiangsu, Shandong, Anhui, Zhejiang és Guangdong. Kína délnyugati részén fekvő 3, 5 Csungking község szintén jelentős kacsatermelő terület, ahol soha nem jelentettek BADS-t. A közelmúltban a BADS-t találták egy kacsatelepen Chongqing Dazu kerületében. Ez a jelentés a kínai Chongqingban azonosított BADS diagnózisát és jellemzését írja le.

Eset leírása

2017 októberében a Chadley Valley kacsákban a rövid csőrrel és erős növekedési retardációval jellemezhető BADS-járvány (1. A és B ábra) a délnyugat-kínai Dazuban (Chongqing község) egy kacsafarmban történt. A betegség körülbelül 20,00% -os morbiditást és súlyos fogyást okozott a késleltetett növekedés miatt. A betegség kórokozójának, valamint az azonosított kórokozó és a jelenleg ismert madár parvovírusok közötti evolúciós kapcsolatok jellemzésére filogenetikai fát készítettek. Beteg kacsákból máj-, lép-, tüdő- és szívmintákat gyűjtöttünk, és mindegyik szövetmintát külön-külön homogenizáltuk foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS; Sangon Biotech, Shanghai, Kína), így 10% (w/v) szuszpenziót kaptunk. A minták háromszori fagyasztása és felolvasztása után a szuszpenziókat 12 000 g-vel 10 percig 4 ° C-on végzett centrifugálással tisztítottuk, majd 0,22 μm-es szűrőn (Sangon Biotech, Shanghai, Kína) átszűrtük. A szűrt szuszpenziókat vírusizolálásra és azonosításra használtuk.

A és B) Cseresznyevölgyi kacsák a BADS tipikus jeleivel (rövid csőr kiálló és lelógó nyelvvel, piros nyilak) egy kacsatelepen fordultak elő Kínától délnyugatra, Dazuban (Chongqing község).

Először az elkészített szűrt szuszpenziókat oltottuk be az allantois üregen keresztül 9 napos, SPF-ben embrióztatott kacsatojásba. Az eredmények azt mutatták, hogy a kacsa-embriók 84-144 órával haltak meg, háromszor egymás utáni átoltás után. A fertőzött allantois folyadékokat összegyűjtöttük, betöményítettük és polietilénglikol-6000 (Sangon Biotech) kicsapással tisztítottuk. Ezután a megtisztított mintákat hemagglutinációs teszt alkalmazásával vizsgáltuk Johnston és munkatársai szerint. 6 Az eredmények azt mutatták, hogy az izolált kórokozó nem képes agglutinálni a csirke vörösvérsejtjeit.

Az SC16 izolátum és az ismert vízimadár-parvovírusok genetikai kapcsolatának vizsgálatához a VP3 fehérje szekvenciákon alapuló filogenetikai fát Tamura 3 paraméteres modellen alapuló szomszédos csatlakozási módszerrel és bootstrap elemzéssel állítottuk elő MEGA 5.0 szoftverben (Biodesign Institute, Tempe (USA). 7

Az eredmények egyértelműen azt mutatták, hogy az SC16 izolátum szorosan csoportosul DGPV-kkel (2. ábra), megerősítve, hogy a parvovírus nemzetséghez tartozott, és kapcsolatban állt a DGPV törzsekkel.

A GPV, DPV, MDPV és SC16 izolátum generált filogenetikus fája a VP3 gén részleges szekvenciái alapján. A filogenetikai összefüggést a szomszédos csatlakozási módszerrel értékeltük, Tamura 3 paraméteres modellen és bootstrap elemzésen (1000 ismétlés) alapulva, MEGA5 szoftver alkalmazásával. A skála sávja 0,005% nukleotid divergenciát jelent. A szekvenciák GenBank belépési számait zárójelben tüntettük fel. A Cherry Valley kacsákból izolált SC16 vírus ebben a vizsgálatban (*) szoros kapcsolatban állt a kacsa parvovírussal (Cherry Valley kacsa, GenBank hozzáférési szám> KX384726), a kacsa eredetű GPV-vel (GenBank hozzáférési szám> KU844283.1) és a pekingi kacsa eredetű GPV (GenBank hozzáférési szám> KT751090.1,> KT935530.2 és> KT935531.2)

Az SC16 izolátum patogenitásának vizsgálatához 0,20 ml-enként 105 ELD50-et oltottunk be az allantois üregen keresztül 9 napos, SPF-ben embrionált kacsa petesejtekbe. Ezt követően húsz kétnapos kacsát választottak ki és vásároltak a Chongqing Orvostudományi Egyetemen (Chongqing), és kísérleti úton megfertőzték az SC16 izolátummal intramuszkuláris oltással, 5 × 105 ELD50 dózissal, madáronként 1,00 ml-ben. A fertőzött kacsák fő klinikai tüneteit a fertőzés utáni tizedik napon figyelték meg, és továbbra is fennállnak az egész kísérleti időszakban (30 nap). A klinikai tünetek, köztük a rövid csőr kiálló és lelógó nyelvvel és erős növekedési retardációval, összhangban voltak a természetesen fertőzött kacsákban jelentkező tünetekkel, és összhangban voltak Xiao és mtsai által közölt megállapításokkal. 5.

Vita

A BADS, más néven kacsa rövid csőr és törpe szindróma (SBDS), az öszvér kacsa állományokban először az 1970-es évek elején jelentett Franciaország délnyugati részén. 3 Tajvanon hasonló esetet tapasztaltak magasabb morbiditással és mortalitással, mint Franciaországban a kacsák parvovírus és kacsa hepatitis vírus együttes fertőzése esetén 1989-ben. 8 2015 óta a BADS széles körben megjelent Kína keleti részén, különösen Kínában. Shandong, Anhui és Jiangsu tartományok. 3, 9, 10 Bár Chongqing volt a kacsa egyik fő tenyészterülete Kína délnyugati részén, de a BADS-ről ezen a területen nem érkezett jelentés. Az ilyen alacsony fertőzöttségi okok ezen a területen még nem ismertek.

Egy korábbi vizsgálatban a DuCV-t a BADS-betegség társfertőzés-kórokozójának tekintették. Egy másik tanulmányban azt találták, hogy az NGPV-vel fertőzött kacsákban a minták (102/170) 60,00% -a pozitív volt a DuCV-re (1. és 2. típus), jelezte, hogy a DuCV nagy szerepet játszhat a BADS betegségben. 9 Jelen tanulmányban azonban a DuCV-t nem sikerült kimutatni. Eközben a vizsgált kacsák szintén negatívak voltak a másik nyolc kórokozó esetében, beleértve az AIV, NDV, DRV, DHAV, DTMUV, MDRV, CELOV és REV. Ezért csak a DGPV-t találták a jelenlegi BADS-járványban, és a többi ismeretlen kórokozóval való együttes fertőzés lehetősége további vizsgálatot igényel.

Amint arról korábban beszámoltunk, a VP1 és VP3 kapszid fehérjék megfelelőek voltak a molekuláris elemzéshez a GPV és az MDPV különböző törzseinek genetikai rokonságának meghatározásához. 4, 12 Ezért az SC16 izolátum és a többi ismert vízimadár-parvovírus közötti genetikai kapcsolatot a jelen vizsgálatban a VP3 fehérje szekvencia alapján értékeltük. Bár ezek a megállapítások feltárhatják, hogy a kórokozó újszerű DGPV, a teljes genomszekvencia-adatokra továbbra is szükség van az újonnan azonosított vírus további jellemzéséhez.

Köszönetnyilvánítás

Ezt a munkát Chongqing Helyi Tudományos és Technológiai Fejlesztési Alapja (2018), Chongqing alapkutatási és határkutatási projektje (cstc2018jcyjAX0264), valamint a Chongqing technológiai innováció és alkalmazásbemutató kutatási projektjei (cstc2018jszx-cyzd0026) támogatták.

Összeférhetetlenség

A szerzők kijelentik, hogy nem volt összeférhetetlenség.