Az Actinidiakolomikta leveleiből kivont teljes flavonoid hipolipidémiás hatása magas zsírtartalmú táplálékkal etetett patkányokban

Zhenxiang Yu

1 Jilin Egyetem első kórháza, Csangcsun, 130021, Kína

Huali Xu

2 Farmakológiai Tanszék, Gyógyszerészeti Iskola, Jilin Egyetem, Changchun, 130021, Kína

Xiaofeng Yu

2 Farmakológiai Tanszék, Gyógyszerészeti Iskola, Jilin Egyetem, Changchun, 130021, Kína

Dayun Sui

2 Farmakológiai Tanszék, Gyógyszerészeti Iskola, Jilin Egyetem, Changchun, 130021, Kína

Guangzhu Lin

1 Jilin Egyetem első kórháza, Csangcsun, 130021, Kína

Absztrakt

Cél (ok):

Ennek a tanulmánynak az Actinidiakolomikta (TFAK) teljes flavonoid kivonatának antihiperlipidémiás és antioxidáns hatását kellett megvizsgálnia magas zsírtartalmú étrend által kiváltott hiperlipidémiában.

Anyagok és metódusok:

A hím SD patkányokat véletlenszerűen 6 csoportba osztották: normál csoport, modell (hiperlipidémiás étrend) csoport, hiperlipedémiás étrend TFAK-tal kiegészítve (50, 100 és 200 mg/kg) és szimvasztatin (30 mg/kg) csoportok. A patkányoknak TFAK-ot adtunk orálisan 28 napig. Testtömeg, összkoleszterin (TC), triglicerid (TG), alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterin (LDL-c), nagy sűrűségű lipoprotein koleszterin (HDL-c), szuperoxid-diszmutáz (SOD), kataláz (CAT), glutation-peroxidáz ( GSH-Px) és malondialdehidet (MDA) mértünk. Kiszámítottuk az aterogén indexet (AI) és a koszorúér-kockázati indexet (CRI). Megvizsgálták a hidroxi-metil-glutaril-koenzim A (HMG-CoA) reduktáz aktivitását a májszövetben. A hisztopatológiai változásokat is ellenőriztük.

Eredmények:

A TC, TG és az LDL-c szintje megnőtt a modellcsoportban. A modellcsoporthoz képest a TFAK jelentősen csökkentette a testtömeget, a TC-t, a TG-t, az LDL-c-t, az AI-t, a CRI-t és megemelte a HDL-c szintjét. Ezenkívül a SOD aktivitása jelentősen megemelkedett, míg az MDA tartalma csökkent. A HMG-CoA reduktáz aktivitása szintén csökkent. A morfológiai értékelés megállapította, hogy a modellcsoport patkányaiban súlyos steatosis alakult ki, de a máj steatosisának súlyossága enyhült a TFAK-val kezelt csoportokban. A lehetséges mechanizmus a HMG-CoA reduktáz aktivitás csökkenésével hozható összefüggésbe.

Következtetés:

Eredményeink azt sugallják, hogy a TFAK erős antioxidáns és lipidcsökkentő hatást fejt ki, megakadályozza a máj zsírlerakódását és szabályozza a HMG-CoA reduktázt.

Bevezetés

A hiperlipidémia súlyos járványos betegség, amely lipid anyagcsere-rendellenességgel jár, és az ateroszklerózissal és az ischaemiás szívbetegséggel járó fő kockázati tényezőnek tekinthető (1). A koleszterin és a lipidfehérje csökkentése hasznosnak bizonyult a betegeknél a sztrók, a szív- és érrendszeri betegségek, valamint az akut szívbetegségek megelőzésében sztatinokkal, nikotinsavakkal és epesavmegkötőkkel. Bár ezek a gyógyszerek mind a preklinikai, mind a klinikai vizsgálatokban hatékonyak a hiperlipidémia modulálásában, a máj és a vese toxicitását nem hagyják figyelmen kívül. Az elmúlt években a kínai gyógynövények és azok kivonatai nagy figyelmet kaptak a hatékony szinergia és kevés mellékhatás miatt (2, 3).

Számos hagyományos kínai gyógyszert, köztük a ginzenget, a coptis rizómát használják a hiperlipidémia megelőzésére és kezelésére (4). Számos hagyományos étel és ételízesítő, mint a viasz tök, a keserű dinnye, a gyömbér és a zeller, bizonyítottan jótékony hatású a hiperlipidémia szempontjából (5–7).

A hiperlipidémia és a szabad zsírsavak növelik a lipid által közvetített oxidatív stresszt (8). A lipidek, a fehérje és az egyéb antibiotikus molekulák oxidációja a reaktív oxigénfajok (ROS) által DNS-mutációt okozhat, amely sejtpusztulást eredményez (9). Az ROS biológiai hatásait számos antioxidáns enzim, például SOD, CAT és GSH-Px szabályozza. Sok növény antioxidáns hatású, például ginzeng, szőlő és kivi (10–12).

A kivi őshonos Észak-Kínában, Koreában, Szibériában és Japánban. A kivi gyümölcse számos tápanyagot tartalmaz, például C-vitamint, E-vitamint, folátot, káliumot, magnéziumot, ursolsavat, karotinoidokat és számos polifenolt (13). A kivi beszámolt arról, hogy in vitro antioxidáns aktivitással rendelkezik (14). A kivi védelmet nyújt az oxidatív DNS károsodása vagy az oxidatív stressz ellen is (15, 16). Az Actinidiakolomikta a kivi családjába tartozik. A közelmúltban publikált bizonyítékok az Actinidiakolomikta néhány jótékony hatását mutatták ki, amelyek magukban foglalják az antioxidáns aktivitást in vitro (17) és az anticaner hatásokat (16, 18). Az azonban továbbra sem világos, hogy az A. kolomiktából (TFAK) származó teljes flavonoid kivonat miként fejti ki hipolipidimikus hatásait in vivo.

Jelen vizsgálatot a TFAK-hiperlipidémia patkányok hipolipedémiás hatásának értékelésére végeztük. Az eredmények azt mutatják, hogy a TFAK megakadályozhatja a súlygyarapodást, csökkentheti a lipidek és lipoproteinek szérumszintjét, megakadályozhatja a máj zsírlerakódását, csökkentheti a lipidoxidációs termék szintjét, növelheti az antioxidáns enzim aktivitását és csökkentheti a HMG-CoA reduktáz aktivitását.

Anyagok és metódusok

Kémiai

A szimvasztatint, a hidroxil-amin-hidrokloridot, a foszfatidátot, a triklór-ecetsavat és a ditiotreitolt a Sigma-tól (USA) szerezték be. Az etilén-diamin-tetraecetsavat és az etilén-glikol-tetraecetsavat a Dingguo Changsheng Biotechnology-tól (Changchun, Kína) szereztük be. A TC, TG, LDL-c, HDL-c, SOD, MDA, CAT és GSH-Px kiteket az Instituted of Jiancheng Biotechnology-tól (Nanjing, Kína) szereztük be. Az összes többi vegyi anyag volt az analitikai reagens.

Növényi anyag

Az A. kolomikta leveleit a kínai Jilin tartomány Jingyu megyében gyűjtötték össze. A mintákat Minglu Deng professzor azonosította, aki a Changchun Kínai Orvostudományi Egyetemen gyógynövényekkel foglalkozik. Röviden, 3 kg szárított leveleket durván hajtottunk, és 30 liter etanolban 2 órán át forraltuk, majd az extraktumot leszűrtük. A maradékot ismét extraháljuk és szűrjük. Az egyesített szűrletet bepároljuk. Az etanol-kivonat 374 g volt. Az etanolos kivonatot vízzel keverjük. A TFAK-on lévő koncentráció körülbelül 0,2 g/ml volt. Az extraktumban lévő vegyületek kvalitatív meghatározásához nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszert alkalmaztunk (1. ábra).

Az Actinidiakolomikta (TFAK) teljes flavonoid kivonatának nagy teljesítményű folyadékkromatográfiája

Állatok

Az összes kísérletet a Jilin Egyetem Laboratóriumi Állatok Etikai Bizottsága hagyta jóvá, és az állatok gondozására és felhasználására vonatkozó nemzeti irányelveket követte. A hím-SDrátokat (180-220 g) a Jilin Egyetem Kísérleti Állatközpontjából szereztük be. A patkányokat egy környezetileg ellenőrzött helyiségben helyeztük el (22 ± 2 páratartalom 40-65%, és 12 órás világos/sötét ciklus), és szabad hozzáférést kaptunk a rágcsáló chow-hoz és a vízhez ad libitum. A kísérleteket a Jilin Egyetem laboratóriumi állatok gondozásának és felhasználásának útmutatójával összhangban hajtották végre, és az Etikai Bizottság jóváhagyta.

Kísérleti terv

A kísérlet előtt a patkányokat 1 hétig standard táplálékkal etették. Hatvan patkányt véletlenszerűen két csoportra osztottak: normál (10 patkány) standard táplálékkal etetett csoportot és hiperlipidémiás étrendet tartalmazó csoportot (50 patkány) magas zsírtartalmú étrenddel 2 héten keresztül (19., 20.) (1. táblázat). A magas zsírtartalmú étrenddel etetett első 2 hét után a hiperlipidémiás étrend 50 csoportjának a farokvénából vettük a vérmintát a lipidek mérésére, és véletlenszerűen 5 csoportba osztottuk, mindegyik csoportban 10 patkány: modellcsoport (magas zsírtartalmú étrend), a TFAK-csoportok (magas zsírtartalmú étrenddel és TFAK 50, 100 és 200 mg/kg-os táplálékkal) és a szimvasztáló csoport (magas zsírtartalmú étrenddel és 30 mg/kg szimvasztatinnal táplálva) pozitív csoportként. A TFAK-ot és a szimvasztatint naponta egyszer adtuk be orálisan, 28 napig. A normál és a modellcsoportokat azonos térfogatú desztillált vízzel adtuk be. A testtömeg és az étkezés mennyiségét hetente kétszer regisztrálták. 28 nap elteltével a patkányokat 12 órán át éheztettük, és klór-hidráttal (350 mg/kg IP) altattuk.

Asztal 1

A kísérleti étrendek összetétele (%)

Összetevő Alapvető étrend Nagy zsírtartalmú étrend

Kukorica liszt	30	26.3
Szójabab étel	20	17.5
Búzakorpa	25	21.9
Búzaliszt	16.	14
Halétel	5.	4.4
Csontliszt	2	1.8
Élesztőpor	1	0.9
NaCl	1	0.9
Koleszterin	0	2
Disznózsír	0	10.
Nátrium-kolát	0	0,3

A lipidek mérése a szérumban és a májszövetben

28 napos kezelés után a patkányokat 12 órán át éheztettük. Vérmintákat vettünk a hasi aortából. A mintákat szobahőmérsékletre tettük a teljes alvadás érdekében, centrifugáltuk a szérum megszerzéséhez, és -80 ° C-on tároltuk az elemzésig. Az összes koleszterint (TC), a trigliceridet (TG), az alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterint (LDL-c) és a nagy sűrűségű lipoprotein koleszterint (HDL-c) kereskedelmi készletek felhasználásával mértük a gyártók automatikus biokémiai analizátorra vonatkozó utasításainak megfelelően. (Hitachi 7600, Japán). Az aterogén indexet (AI) és a koszorúér-kockázati indexet (CRI) a következőképpen számítottuk ki: AI = (TC-HDL-c)/HDL-c, illetve CRI = TC/HDL-c (21). A májban lévő lipideket Folch módszerével mértük (22).

Antioxidáns enzim meghatározása a szérumban

A szuperoxid-diszmutáz (SOD) aktivitását és a malondialdehid (MDA) tartalmát kereskedelmi készletek segítségével mértük a gyártó utasításai szerint.

Májindex

A vérmintavétel után a májat eltávolítottuk, fiziológiás sóoldattal öblítettük és selyempapírral szárítottuk. Feljegyeztük a máj súlyát a testtömegükhöz viszonyítva.

Máj lipid peroxidáció és antioxidáns profilok

Ezt követően a máj egy részét megmérjük és jéghideg PBS-ben homogenizáljuk. A homogenizátumot centrifugáltuk, és a felülúszót a SOD aktivitásának és az MDA tartalmának mérésére spektrofotométerrel végeztük a gyártó utasításainak megfelelően.

A HMG-CoA reduktáz becslése

A máj HMG-CoA redukciós aktivitását Visavadiya módszerével mértük (23). Röviden: a májszövetet eltávolítottuk és sóoldat-arzenát oldatban homogenizáltuk. A homogenátumot fehérjéből eltávolítottuk, és frissen készített hidroxil-amin-reagenst vas-klorid-reagenssel elegyítettünk. Az abszorbanciát 10 perc múlva leolvassuk 540 nm-en. Kiszámítottuk a HMG-CoA/mevalonát arányát (24). Az arány fordítottan arányos az enzimaktivitással, vagyis az arány növekedése az enzimaktivitás csökkenésének felel meg.

A máj szövettani elemzése

A kísérlet végén a patkányokat leöltük. A májszövetet gyorsan eltávolítottuk és a 4% -os paraformaldehid oldatba rögzítettük napokig, majd paraffinba ágyazottuk. Öt μm-es metszetet vágtunk le, a májszövet-metszeteket hematoxilin-eozinnal (H&E) festettük. A metszeteket mikroszkóppal megvizsgáltuk, majd mikroszkópos felvételeket készítettünk.

Statisztikai analízis

Minden adat átlag ± SD értékként jelenik meg. Egyirányú ANOVA-t hajtottak végre. #P * P A 2. ábrán a TC, TG szintje jóval magasabb volt a modellcsoportban a normál csoporthoz képest 28 napos kezelés után (P 2A ábra). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a TFAK csökkentheti a TC-szintet hiperlipidémiás patkányokban. A TG szint jelentős csökkenését, 35,55% -kal, 34,07% -kal és 41,48% -kal figyelték meg hiperlipidimikus patkányokban, miután 50, 100, illetve 200 mg/kg-mal kezelték őket (2B. Ábra). Ugyanezt a tendenciát találtuk a májszövetben is (2C. És 2D. Ábra). 2D). A fenti eredmények azt mutatták, hogy a TFAK nagy dózisa nagyobb mértékben képes csökkenteni a TC és a TG szintjét a szérumban.

Az Actinidiakolomikta (TFAK) teljes flavonoid kivonatának hatása a TC-re és a TG-re hiperlipidémiás patkányokban

(A) A TC szintje a szérumban, (B) A TG szintje a szérumban, (C) A TC szintje a májszövetben és (D) A TG szintje a májszövetben. Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki. #P 3A. Ábra). 28 napos kezelés után 50, 100 és 200 mg/kg TFAK-mal a HDL-c szérumszintje 2,81% -kal, 8,17% -kal és 15,41% -kal emelkedett. A HDL-c-vel ellentétben az LDL-c szintje 21,02% -kal, 29,23% -kal és 49,41% -kal csökkent (3B. Ábra). A nettó előny nyilvánvaló volt, amikor a HDL-c-t az összes koleszterin vagy az ateroszklerotikus index (AI) százalékában fejezték ki. Amint azt a 3C. És a 3D. Ábra mutatja, a 3D, a CRI és az AI magasabb volt a modellcsoportban a normál csoporthoz képest (P és a GSH-Px szérumban, míg a lipidperoxid-termék MDA szintje megemelkedett a normál csoporthoz képest (P 5. ábra, a HMG-CoA reduktátum aktivitása nőtt a modellcsoportban a normál csoporthoz képest (P 6B ábra). a hepatocyták normál csoportban nem mutattak steatózist (6A. ábra). A TFAK beadása enyhíthette a zsírlerakódást a hepatocytákban (6C. ábra - -EE).

A patkány májszöveteinek szövettani képe

A hiperlipidémiás étrendi patkányokat az Actinidiakolomikta (TFAK) teljes flavonoid kivonatával (50, 100 és 200 mg/kg) kezeltük 28 napig. A májszöveteket eltávolítottuk, szövettani vizsgálatnak vetettük alá H&E-vel festve.

(A) Normál csoport, (B) Modellcsoport, (C) TFAK 50 mg/kg, (D) TFAK 100 mg/kg, (E) TFAK 200 mg/kg és (F) Szimvasztatin 30 mg/kg. Az összes panel nagyítása 200 ×

Vita

Jelen tanulmányban megmutatjuk, hogy az A.kolomikta (TFAK) leveleiből kivont teljes flavonoidnak az a tulajdonsága, hogy csökkenti a lipidprofilt. A TFAK csökkentheti a súlygyarapodást és csökkentheti a TC, TG, az LDL-kandellum szintjének szérumszintjét és a májsejtekben lerakódott zsírlerakódást, és ezáltal megakadályozhatja a hiperlipidimiával összefüggő patológiák kialakulását. Ezenkívül eredményeink kimutatták, hogy a TFAK csökkentette az oxidatív stresszt a vérben és a szövetekben.

A hiperlipidémia, különösen az LDL-c és a TG magas szintje, a szív- és érrendszeri betegségek egyik fő rizikófaktorának számít, mint például az érelmeszesedés, a szívinfarktus, a szívinfarktus, a stoke (25–27). Számos friss tanulmány kimutatta, hogy egyes kínai hagyományos gyógynövények vagy gyümölcsök csökkenthetik a szérum triacilglicerin és az összes koleszterin szintjét (28, 29). Eredményeink összhangban voltak a korábbi vizsgálatokkal, a TFAK 28 napos kezelése elegendő volt a TC, TG, LDL-c szintjének csökkentéséhez és a HDL-c szintjének növeléséhez hiperlipidémiás patkányokban. Ezek az eredmények határozottan arra utalnak, hogy a TFAK hipolipidémiás hatást fejt ki, és védőhatással bírhat az érelmeszesedés ellen. Ez a hatás hasonló a pozitív szimvasztatin gyógyszerhez.

Következtetés

Eredményeink szerint a TFAK erős antioxidáns és lipidcsökkentő hatást fejt ki, megakadályozza a máj zsírlerakódását és szabályozza a HMG-CoA reduktázt.

Elismerés

Ezt a munkát a Jilin Tudomány és Technológia Fejlesztési Terv kulcsfontosságú projektjei támogatták.