Szulfit által közvetített oxidatív stressz a vesesejtekben - ScienceDirect

Szulfit által közvetített oxidatív stressz a vesesejtekben.

által

Háttér

A krónikus veseelégtelenséget oxidatív stresszel társították. A szérum-szulfit, szulfát, cisztein, homocisztein, cisztein-szulfinsav és γ-glutamil-cisztein emelkedett a hemodialízisben szenvedő betegeknél, ami a kéntartalmú aminosavak gyorsított katabolizmusára vagy a szulfit/szulfát csökkentett eliminációjára utal, vagy mindkettőre utal. A metabiszulfit beadása szintén bizonyítottan károsítja a vesesejteket.

Mód

A reaktív oxigénfajok (ROS) mérését a diklór-fluoreszcein (DCF) fluoreszcenciájával, az intracelluláris ATP-t pedig a luciferin-luciferáz reakcióval végeztük. A szulfit és a szukcinát oxidációját patkány vese izolált mitokondriumával polarográfiai úton követtük nyomon. Az 5, 5 ′, 6, 6′-tetraklór-1,1 ′, 3,3′-tetraetil-benzimidazol-karbocianin-jodid (JC-1) fluoreszcens szondát alkalmaztuk a feszültség alatt álló légző mitokondrium membránpotenciáljának esetleges veszteségeinek felmérésére. A glutamát és a malát dehidrogenázok (GDH, illetve MDH) aktivitását a NADH spektrofotometriás mérésével határoztuk meg. A szulfitot a monoklorobimán-szulfit HPLC-fluorimetriás mérésével, a sejtek életképességét MTT eljárással határoztuk meg.

Eredmények

Az ROS azonnali növekedése követte a Madin-Darby kutyavese (MDCK), a II. Típusú és az oposszum vesesejtek (OK) 5–500 μmol/l-es szulfitra való expozícióját. Az intracelluláris ATP kimerülését is megfigyelték. Az izolált vese mitokondriumokban polarográfiai szempontból alacsony, 100 μmol/l szulfit oxidációs sebességet figyeltünk meg, de az ADP által stimulált 3. állapotú légzés nem volt látható. Patkány vese mitokondriumában a glutamát oxidációjából származó ATP bioszintézist jelentősen gátolta a 100 μmol/l szulfittal való egyeztetés; ez nem volt a malát, a szukcinát és a TMPD/aszkorbát esetében. Ugyanakkor a GDH és az MDH aktivitása a vese mitokondriális kivonatában gátolt volt. A mitokondriális membránpotenciál és a sejt életképessége nem sérült.

Következtetés

A mikromoláris szulfit az RC azonnali növekedését váltotta ki az MDCK, a II. Típusú és az OK sejtekben. Ez az intracelluláris ATP kimerülésével járt, ami a mitokondriális GDH-ra kifejtett gátló hatásával magyarázható. Bár az MDH-t hasonlóan gátolták, a hatást pufferelte ennek az enzimnek a vese mitokondriumokban mutatott magas szintje.

Előző kiadott cikk Következő kiadott cikk