A petróleum-étrend-kivonat törzs kérgének urolithiatikus hatása Crataeva adansonii. patkányokban

Kutatási cikk

Teljes cikk
Ábrák és adatok
Hivatkozások
Idézetek
Metrikák
Újranyomtatások és engedélyek
PDF

Absztrakt

Bevezetés

Az urolithiasis a harmadik leggyakoribb húgyúti rendellenesség. Az urolithiasis szórványos előfordulása meglehetősen magas, és Észak-Indiában a vizeletkő több mint 80% -a kizárólag kalcium-oxalát kövekből vagy kalcium-oxalátból kalcium-foszfáttal keverve (Mitra et al., 1998). A hiperoxaluria az emberi idiopátiás kalcium-oxalát (CaOx) kőbetegség fő kiváltó tényezője. Az oxalát egy erőteljes kristályosodást ösztönző tényező, amely jelen van a vizeletben, amelynek visszatartása fokozza a sejtek sérülését és a litogenezis korai szakaszait okozza (Kumar et al., 2002). Az orvostudomány terén elért óriási fejlődés ellenére nincs igazán kielégítő gyógyszer a vesekövek kezelésére.

Másrészt a fitomedicinák számos betegség alternatív terápiás forrását kínálták, és további információkat is szolgáltattak a betegségek patogeneziséről. A Crataeva nemzetségből származó növényekről beszámoltak arról, hogy urolithiatikus aktivitással rendelkeznek (Anand et al., 1995). Ezért úgy gondolták, hogy meg kell vizsgálni az egyik fajt, Crataeva adansonii. DC., Patkányokban kifejtett urolithiatikus hatása miatt.

Crataeva adansonii. egy trópusi fa, amely 5-10 m magasságig megnő. Ezek a fák széles körben elterjedtek Indiában, Burmában és Ceilonban. Hagyományosan kéregeket, leveleket, virágokat és gyökérkéregeket alkalmaznak gyógyászati tulajdonságaik miatt.

A Yunani rendszerben a kérget említik az étvágy elősegítésére, az epe és a váladék szekréciójának csökkentésére, valamint a húgyúti szervek rendellenességeinek eltávolítására. Indiában hagyományosan a kéreg hasznos vizelési panaszok és láz esetén, valamint a bőrbetegségek enyhe formáiban. Bár a kérge Crataeva adansonii. a folklór irodalomban az urolithiasis kezeléséről számoltak be (Nadkarni, 1982), a Crataeva adansonii. potenciális urolithiatikus aktivitása miatt. A jelenlegi vizsgálat célja az volt, hogy vizsgálja a petroléter éter kivonat szár kérge Crataeva adansonii. patkányokban kísérletileg kiváltott urolithiasis ellen urolithiatikus aktivitásért.

Anyagok és metódusok

Növényi anyag és extrakciós eljárás

Szára kérge Crataeva adansonii. helyi piacról vásárolták és hitelesítették az Agharkari Kutatóintézetben (Pune, India). Durván porított, árnyékosan szárított kérget (350 g) petroléterrel (60-80 °) extraháltunk Soxhlet készülékkel. Az extrakciós eljárást megismételtük, és a kapott extraktumokat egyesítettük és desztilláltuk az oldószerek kinyerése céljából. Az extraktumokból az oldószerek utolsó nyomait vákuum alatt eltávolítottuk. Az így kapott petroléter-kivonat zöldes színű, a kitermelés körülbelül 0,3%.

Vegyszerek és készülékek

A kreatinin (Jaffe módszer) és a húgysav (uricase módszer) becslési készletet az Accurex Biomedical Pvt Ltd.-től (Mumbai, India) vásároltuk. A cinkhuzalt és a nátrium-oxalátot a S.D. Fine Chemicals Limited (Mumbai, India). A cisztont (shilapushpa 130 mg, pashanbheda 98 mg, manjishtha 32 mg, nagarmustha 32 mg, 32 mg apamarga, 32 mg gojiha, 32 mg sahadevi és 32 mg sahadevi és 26 mg shahajevi bhasma kivonatokat tartalmaz) a Himalaya Herbal Healthcare-től vásárolták (Banglore, India).

Kísérleti terv

Állatok

Hím Wistar patkányokat (200–250 g) a National Toxicology Center-től (Pune, India) vásároltak. 12 órás fény- és 12 órás sötét ciklus alatt 25 ± 1 ° C hőmérsékleten és 45–55% relatív páratartalom mellett tartottuk őket. Az állatok szabadon hozzáférhettek az élelmiszerpelletekhez (Chakan Oil Mills, Pune, India) és a vízhez. A kísérleti protokollokat a Poona Gyógyszerészeti Főiskola (Pune, India) Intézményi Állatetikai Bizottsága (IAEC) hagyta jóvá, és összhangban voltak az Állatokon végzett kísérletek ellenőrzése és felügyelete bizottság (CPCSEA) irányelveivel. A kísérleteket 0900 és 1600 óra között végeztük.

Urolithiatikus aktivitás

Nátrium-oxalát indukálta urolitiatikus modellt patkányban alkalmaztunk a petróleum-éter kivonat hatásának értékelésére Crataeva adansonii. A tanulmány célja az volt, hogy kiderítse a petróleum-éter kivonat hatását Crataeva adansonii. a nátrium-oxalát által kiváltott urolithiasis elleni megelőző és terápiás alkalmazásról. A csoportok az alábbiak szerint oszlanak meg:

Profilaktikus csoportok (gyógyszeres kezelés 7 napig nátrium-oxaláttal együtt)

I. csoportos sóoldat (1 ml/kg)

II. Csoport: nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.)

III. Csoport: nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + Tween 80 (1% v/v)

IV. Csoport: nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + petroléter-kivonat (50 mg/kg, p.o.)

V. csoport Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + petroléter-kivonat (100 mg/kg, p.o.)

VI. Csoport: nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + ciszton (500 mg/kg, p.o.)

Terápiás csoportok (gyógyszeres kezelés 8–14 napig a nátrium-oxalát-kezelés után)

VII. Csoport fiziológiás sóoldat (1 ml/kg)

VIII. Csoport: nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.)

IX. Csoport Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + Tween 80 (1 térfogatszázalék)

X csoport Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + petroléter-kivonat (50 mg/kg, p.o.)

XI. Csoport Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + petroléter-kivonat (100 mg/kg, p.o.)

XII. Csoport Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) + Ciszton (500 mg/kg, p.o.)

Valamennyi patkányt egyenként metabolikus ketrecekben helyeztük el a kísérlet teljes időtartama alatt. Minden patkány vizeletét a 7. és a 14. napon gyűjtöttük össze, 6 órás nátrium-oxlalát injekció után, timol tartósítószerként. A megelőző és a terápiás csoportokat feláldoztuk a 7., illetve a 14. napon. A jobb vesét szövettani technikákkal vizsgáltuk kalcium-oxalát kristályok és kőképződés szempontjából. Három állat bal veséjét Tris pufferrel (0,605 g Tris 30 ml vízben + 0,33 ml tömény sósavoldat 100 ml vízzel hígítva) homogenizáltuk, és a 4000 fordulat/perc sebességű centrifugálás után a homogenizátumot használtuk a kalcium koncentrációjának meghatározására oxalát a vesében. A fennmaradó három állat bal veséjét és az adott csoport mind a hat állatának májját KCl-val perfundáltuk és KCl (0,15 M) oldattal homogenizáltuk. A 7000 fordulat/perc sebességű centrifugálás után kapott homogenizátumot használtuk a lipid-peroxid-hatás tanulmányozására.

A minőségi kristálylerakódást 0 fokozatúnak minősítettük, a kristályok nem képződtek; 1. fokozat, a kristályok enyhe lerakódása; 2. fokozat, a kristályok mérsékelt lerakódása; és 3. fokozat, nagyobb mennyiségű kalcium-oxalát kristály a vesében.

Paraméterek

A szérum és a vizelet elektrolitjait (nátrium, kálium, klorid) elektrolit analizátorral (Biolyte 2000, Tajvan), a szérum/vizelet kreatinint és húgysavat autoanalizátor (Secomam) segítségével határoztuk meg. A vizelet és a vese oxalát koncentrációját Hodgkins és Williams (1972) módszerével határoztuk meg. A máj és a vese lipidperoxid szintjét Sreejayan és mtsai módszerével határoztuk meg. (1994) és Ohkawa (1979). A vizelet pH-ját pH-mérővel határoztuk meg (EQ-614 modell).

Statisztikai analízis

Az értékek átlag ± SEM formában vannak feltüntetve. Az átlagok közötti statisztikai szignifikanciát egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, amelyet Tukey-teszt követett. p A petróleum-éter kivonat törzs kérgének urolithiatikus hatása Crataeva adansonii. patkányokban

Online közzététel:

Asztal 1 A petroléter éter kivonatának hatása Crataeva adansonii. nátrium-oxaláttal itatott patkányok vizeletparaméterein.

Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, ip, naponta egyszer, 7 napig) injekciója patkányokban szignifikánsan növelte az oxalát vizeletszintjét a sóoldattal (1 ml/kg, ip) kezelt csoporthoz képest, ami nátrium-oxalát által kiváltott képződésre utal. lithiasis. A hordozóval kezelt csoport vizeletében a vizelet oxalátszintje nem változott szignifikánsan a nátrium-oxaláttal (7 mg/100 g, i.p.) kezelt csoporthoz képest. A petróleum-éter kivonat (50 és 100 mg/kg) és a ciszton (500 mg/kg) szignifikáns (p Crataeva adansonii. patkányokban

Online közzététel:

2. táblázat A petroléter éter kivonatának hatása Crataeva adansonii. nátrium-oxaláttal kezelt patkányok májának és veséjének lipid-peroxid-szintjéről.

A lipid-peroxid szint dózisfüggő gátlását figyelték meg in vitro. vizsgálat, amely 500 µg petróleum-éter kivonatnál volt maximum Crataeva adansonii. a májban és a vesében egyaránt (publikálatlan adatok).

Kalcium-oxalát becslés

Nátrium-oxalát (7 mg/100 g, i.p.) beadása után a kalcium-oxalát szint szignifikánsan megnőtt (p A petroléter-kivonat szárának kérge anti-urolitiatikus hatása Crataeva adansonii. patkányokban

Online közzététel:

3. táblázat A petroléter kivonat hatása a kalcium-oxalát-tartalomra és a patkány vese lerakódására.

A szérum klinikai kémiai paraméterei

Nem figyeltek meg szignifikáns változást a szérum nátrium-, klorid- és húgysavszintben. A petroléter-kivonat (50 és 100 mg/kg) és a ciszton (500 mg/kg) szignifikánsnak bizonyult (p. 1995). Különböző kísérleti eljárások alapvetően kétféle hiperoxaluriát eredményeznek: (1) akut, amikor a patkányt egyetlen, nagy dózisú litogén, (2) krónikus fertőzés váltja ki, amikor a patkányt egy ideig általában kis dózisú litogénnel fertőzik. idő. A hiperoxaluriát a vizelet oxalátjának meghatározásával mérjük, a kristály lerakódását a vesében a vese paraffin szakaszainak vizsgálata igazolja (Khan et al., 1991).

Jelen vizsgálatunk során NaOx (7 mg/kg, i.p. 7 napig) indukált hiperoxaluria modellt használtunk a gyors szűréshez. A hiperoxaluria kísérleti indukálása a kalcium-oxalát kristályok gyors képződését eredményezi a kísérleti állatok vese tubulusaiban. A nátrium-oxalát-fertőzés utáni pillanatnyi kristályképződés fő oka az oxalát vizelettel történő kiválasztásának gyors növekedése. A kristályok megjelenési sebessége a vesetubulusokban jelzi ennek a hozzáadott oxalátnak a vesékbe történő transzportjának hatékonyságát és végül a vizelettel történő kiválasztását. NaOx beadása után a kristályos lerakódás először a kéregben, majd a medulla, majd a vese tubulusokban ér el (Khan és mtsai., 1982). Az oxalát beadásának eredményei ebben a vizsgálatban megerősítik a kalcium-oxalát lerakódás mennyisége közötti kapcsolat szövettani eredményeit.

A kristálylerakódások szemikvantitatív vizsgálatát (mikroszkopikus pontozási rendszer) és kvantitatív vizsgálatot (kémiai vizsgálat a kalcium-oxalát meghatározására a vesében) alkalmaztuk ebben a vizsgálatban a vese kalcium-oxalát kristályok lerakódásának súlyosságának összehasonlítására a különböző vizsgálati csoportok között. Patkányokban a NaOx beadása csökkenti a vizelet térfogatát és pH-ját, a vizelet túltelítettségét és a vesékben jelentős kalcium-oxalát kristálylerakódást mutat. A mikroszkopikus vesekristályok lerakódásának súlyossága jól korrelált a vesében található calculi oxalate koncentrációval (Fan és mtsai, 1999).

Petroléter-kivonattal (50 mg/kg és 100 mg/kg) és cisztonnal (500 mg/kg) történő kezelés után a vizelet térfogatának növekedése, a nátrium, a klorid kiválasztása és a pH bizonyította jótékony hatását a kalciumképződés megakadályozásában a ezek a litogén anyagok.

A petroléter-kivonat Crataeva adansonii. és a ciszton a kalcium-oxalát koncentrációjának jelentős csökkenését mutatta a vesében. Az oxalát meghatározása a vesék metszeteiben (szövettan) megerősítette a kalcium-oxalát kristálylerakódás mennyisége és a nátrium-oxalát adagolás közötti kapcsolatot.

A kalcium-oxalát kristály megjelenése a vesetubulusokban a NaOx injekció után a tubuláris sejtek nekrózisával társul, amelynek eredményeként a tubuláris alaplemez expozíciót és luminalis sejttörmelék keletkezik. A kalcium-oxalát kristályok a fagocitózis után a polimorfonukleáris leukociták citolízisét okozzák. A kristály aggregátumok károsak lehetnek a vese epitheliumára, mivel nagyok és szabálytalanok, és mechanikusan megbontják a hámot (Khan et al., 1982).

Az extraktumkezelés szignifikánsan (1995; Malini és mtsai, 1999). A petróleum-éter kivonat antilitiatikus aktivitásának mechanizmusa magában foglalhatja az oxalát által kiváltott toxikus megnyilvánulások és a szabad gyökök termelésének gátlását, valamint a test védelmi rendszerének fokozását. Gyógyszerekkel kezelt csoport, amely citovédelmet mutat a tubulusokban lévő kalcium-oxalát lerakódásának vagy aggregációjának megakadályozására gyakorolt hatása miatt, így az epithelium mechanikai megbomlása kisebb, vagy védelmet nyújt a szabad gyökök átrendeződésével szemben (Malini et al., 1999).

A jelenlegi vizsgálatban a hisztopatológiai értékelés megmutatta a kristályok lerakódásának maximális megelőzését 50 mg/kg dózisban, szemben a 100 mg/kg dózissal, ami annak köszönhető, hogy a petróleum-éter kivonatban jelen lévő hatóanyag alacsonyabb dózisú aktivitást mutat. A nagyobb dózisú hatóanyagok inaktívvá válhatnak, vagy kevésbé aktív metabolit képződik, ami csökkentette aktivitását.

Köszönetnyilvánítás

A szerzők köszönetet mondanak Dr. Avinash Pradhan-nak (Pradhan Laboratories, Pune, India) a veseminták hisztopatológiai megbecsüléséért. A szerzők köszönetet mondanak Dr. S. S. Kadamnak, a Punea Punea Gyógyszerészeti Főiskola igazgatójának, a kutatási munkához szükséges összes eszköz biztosításáért.

Asztal 1 A petroléter éter kivonatának hatása Crataeva adansonii. nátrium-oxaláttal itatott patkányok vizeletparaméterein.