A foszforkorlátozás és a D-vitamin-helyettesítés hatása a másodlagos hiperparatireoidizmusra egy proteinurikus egérmodellben

Ferruh Artunc, MD

Belgyógyászati ​​Klinika, Endokrinológiai Osztály, Diabetológia, Angiológia

és Nephrology, Tübingeni Egyetemi Kórház, Otfried-Mueller-Str. 10, 72076

Tübingen (Németország), Tel. + 49-7071-2982711, Fax + 49-7071-293174

Kapcsolódó cikkek a következőhöz: "

  • Facebook
  • Twitter
  • LinkedIn
  • Email

Absztrakt

Bevezetés

Ebben a tanulmányban az SHPT kialakulását vizsgáltuk a veseelégtelenség progressziója során egy proteinurikus egérmodellben, amely összefoglalja a krónikus vesebetegség minden szakaszát [15], és a vizeletvesztés következtében D-vitamin-hiányhoz kapcsolódik [16]. Ezután teszteltük, hogy a natív vagy az aktív D-vitamin helyettesítése vagy az étrendi foszfor-korlátozás képes-e megakadályozni az SHPT-t ebben a modellben.

Anyagok és metódusok

Állatok

A kísérleteket vad típusú 129 S1/SvImJ egereken végeztük, amelyeket a Charles River-től (Németország) vásároltunk. Az egereket 12: 12 órás világos-sötét ciklusban tartottuk, és standard libert (C1000, foszfortartalom 7,5 g/kg, Altromin, Lage, Németország) ad libitum csapvízzel tápláltunk. Minden állatkísérletet a német törvények szerint hajtottak végre az állatok jóléte érdekében, és a helyi hatóságok jóváhagyták.

A proteinurikus egérmodell előidézése érdekében a 8 hónapos egereket egyetlen intravénás doxorubicin injekcióval (2 µg/µl, Cell Pharm, Bad Vilbel, Németország) injektáltuk a bal retrobulbaris vénás plexusba könnyű izoflurán altatásban. A doxorubicin dózisa 12,6 µg/ttkg volt a CKD 1-3 indukálásához, 14 µg/g bw a 4-5 CKD indukálásához és 15,4 µg/g testtömeg az AKI indukálásához. A spontán ürített vizelet mintáit reggel 2 nappal (kiindulási érték) és a doxorubicin injekció beadását követő 30 napon belül gyűjtöttük össze. Vérmintákat vettünk a doxorubicin injekció előtt és után a 10. és 30. napon.

Az SHPT elnyomására szolgáló kezelések alacsony foszfortartalmú étrendből (C1048, foszfortartalom 0,13 g/kg, Altromin, Lage, Németország) vagy kolekalciferollal (C1000 + 25 000 IE/kg, Altromin, Lage, Németország) dúsított étrendből álltak. 4-5 CKD egérben a kolekalciferolt (D3-Vicotrat, 100 000 IE/ml, Heyl, Berlin, Németország) hetente háromszor 15 IE/ttkg dózisban kellett beadni, i.p. a proteinurikus veszteségek leküzdésére és a 25-OH D-vitamin koncentrációjának normalizálására. Az 1,25-OH-kezelés három i.p. heti injekciók 100 pg/ttkg dózisban CKD 1-3 és 300 pg/ttkg 4-5 CKD egerekben. Az 1. táblázat az adott sorozatba beadott állatok számát mutatja.

Asztal 1

A nefrotikus (CKD 1-3) egerekkel a megfelelő sorozatba beinjektált állatok száma és az egerek elpusztultak a végpont elérése előtt

Laboratóriumi vizsgálatok

A karbamidot, a foszfort, a kalciumot és a fehérjét kolorimetriás vizsgálatokkal mértük (Labor + Technik, Berlin, Németország). A szabad kalciumot IL GEM® Premier 3000 vérgázelemző készülékkel (Instrumentation laboratórium GmbH, Kirchheim, Németország) mértük. A PTH, az FGF23, a 25-OH D-vitamin és az 1,25-OH D-vitamin koncentrációt ELISA készletekkel mértük (Immutopics, CA, USA és IDS Immunodiagnostic Systems, Frankfurt am Main, Németország).

Kvantitatív RT-PCR mérések

Kezeletlen vagy kezelt egerek veséiben a klotho, az 1a- és a 24-hidroxiláz transzkriptumszintjét a korábban leírtak szerint mértük LightCycler System (Roche Diagnostics, Mannheim, Németország) alkalmazásával [17]. A primereket és a körülményeket a 2. táblázat mutatja. Az amplifikált termékeket olvadásgörbe-analízissel és szekvenálással igazoltuk. Az eredményeket a cél és a háztartási gén GAPDH transzkriptumainak arányában fejeztük ki.

2. táblázat

Használt primerek és amplifikációs protokollok

Szövettani elemzés

Az egér veséit 4% paraformaldehid/0,1 M nátrium-foszfát pufferben (pH = 7,4) rögzítettük, dehidratáltuk és paraffinba ágyazottuk. A veséket 2 um vastag szeletekre vágtuk és periódusos Schiff-reagenssel festettük. A metszeteket vak módszerrel értékeltük a glomeruláris és tubuláris károsodás jeleire, a glomeruláris szklerózis index (GSI) [18] és a tubuláris sérülés pontszám (TSI) [19] alapján végzett kvantitatív elemzéssel. Von-Kossa festést végeztek a vesékből, valamint a mellkasi aorta meghatározott részéből (keresztirányú metszetek) a meszesedések vizsgálatára.

Statisztikai analízis

Az adatokat aritmetikai átlagként ± SE adjuk meg, n értéke a független kísérletek számát jelenti. Valamennyi adat szignifikanciáját teszteltük paraméteres vagy nem paraméteres ANOVA-val, párosított vagy nem párosított Student-féle t-teszttel vagy adott esetben Mann-Whitney U-teszttel, a GraphPad InStat és a Prism 6, GraphPad Software alkalmazásával (San Diego, Kalifornia, www.graphpad). com). A p érték

Kapcsolódó cikkek:

Hivatkozások

  1. Yamashita T, Yoshioka M, Itoh N: Egy új fibroblaszt növekedési faktor, az FGF-23 azonosítása, amelyet előnyösen az agy ventrolaterális thalamus magjában expresszálnak. Biochem Biophys Res Commun 2000, 277: 494-498.

Szerző Kapcsolatok

Ferruh Artunc, MD

Belgyógyászati ​​Klinika, Endokrinológiai Osztály, Diabetológia, Angiológia

és Nephrology, Tübingeni Egyetemi Kórház, Otfried-Mueller-Str. 10, 72076

Tübingen (Németország), Tel. + 49-7071-2982711, Fax + 49-7071-293174

Cikk/Publikáció részletei

másodlagos

Elfogadva: 2015. február 23
Online közzététel: 2015. március 29
A kiadás dátuma: 2015. április

A nyomtatott oldalak száma: 13
Az ábrák száma: 8
Asztalok száma: 2

Nyílt hozzáférési licenc/Gyógyszeradagolás/Jogi nyilatkozat

Hivatkozások

  1. Yamashita T, Yoshioka M, Itoh N: Egy új fibroblaszt növekedési faktor, az FGF-23 azonosítása, amelyet előnyösen az agy ventrolaterális thalamus magjában expresszálnak. Biochem Biophys Res Commun 2000; 277: 494-498.

Ábrák és táblázatok letöltése (.pptx)