A magas sótartalmú étrend gyomorhám hiperpláziát és parietális sejtvesztést vált ki, és fokozza a Helicobacter pylori kolonizációt a C57BL/6 egerekben

Absztrakt

Kvantitatív ureázaktivitási vizsgálat.

A gyomormintákat (1-2 mm2) kivágtuk a korpusz és az antrum középső részéből. Kvantitatív ureázvizsgálatot végeztünk a másutt leírtak szerint. Röviden, a szöveteket 1 ml karbamidlében inkubáltuk 4 órán át, és centrifugáltuk, majd az egyes gyomorszövetekből kétszer (200 μl) karbamidlevet adtunk mikrotiterlemezekre. A színváltozás mértékét egy automatizált ELISA olvasóban rögzítettük 550 nm-en (30) .

Mennyiségi kultúra.

A szövet tömegét úgy határoztuk meg, hogy a tápközeget tartalmazó cső tömegét kivontuk a tömeg hozzáadása után a tömegből. A szövetet üvegszöveti őrlőkkel homogenizáltuk, és a homogenátumot FCS-t tartalmazó Brucella táptalajban 100- és 1000-szeresére hígítottuk. Minden hígításból száz μl-t szórtunk szelektív táptalajra: Blood Agar Base no. 2 (DIFCO Laboratories, Detroit, MI) kiegészítve 5% lóvérrel (Remel, Lenexa, KS), 50 μg/ml amfotericin B-vel, 100 μg/ml vankomicinnel, 3,3 μg/ml polimixin B-vel, 200 μg/ml bacitracinnal és 10,7 μg/ml nalidixinsav (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO). A lemezeket mikroaerob módon inkubáltuk 37 ° C-on 3-5 napig. Gram festéssel és ureázzal, kataláz és oxidáz reakcióval történő igazolást követően megszámláltuk a H. pylori telepeket, és kiszámítottuk a szövet grammjára eső CFU-t. A csoportok közötti összehasonlításokat a baktériumok log koncentrációin alapoztuk.

Szövettani értékelés.

BrdUrd immunocytokémia.

A BrdUrd Incorporation számszerűsítése.

A magas sótartalmú étrend hatása a gyomor ureáz aktivitására a H. pylori-fertőzött C57BL/6 egerekben

Mennyiségi H. pylori kultúra.

A H. pylori átlagos sűrűsége (CFU/g szövet) 8 és 16 WPI mellett szignifikánsan megnőtt (P ⇓ és 4. ábra) ⇓. A H. pylori-fertőzött egerek között jelentős növekedés (P

H. pylori CFU/gramm szöveti korpusz C57BL/6 egerekben, normál étrend; ▪, magas sótartalmú étrend.

H. pylori CFU/gramm szövet-antrum C57BL/6 egerekben., normál étrend; ▪, magas sótartalmú étrend.

Gasztritisz és nyálkahártya-változások a C57BL/6 egerek proximális korpuszában 16 WPI-nél magas sótartalmú étrendet és H. pylori fertőzést követően. Egy, nem fertőzött egér normál étrenden. A mirigy zóna a nyálkahártya vastagságának több mint 75% -át teszi ki. B, nem fertőzött egér magas sótartalmú étrenden. A gyomor gödrének multifokális megnyúlása párhuzamosan, a mirigyes zóna vastagságának jelentős csökkenésével a magas sótartalmú étrend hatására következett be. Egyes atrófiás gócokban a mirigy zónája 6 CFU/g gyomortestet tartalmaz. D, H. pylori-fertőzött egér magas sótartalmú étrenden. A mirigyes hámot nagymértékben kiüríti egy hiperplasztikus nyálkahám. A nyálkahártyát diffúzan beszivárog a gyulladásos sejtek. Az ábrázolt egér H. pylori kolonizációs sűrűsége 3,81 × 106 CFU/g gyomortest. H&E festés. Rúd, 200 μm.

A BrdUrd immunhisztokémiai kimutatása a C57BL/6 egerek proximális korpuszában 16 WPI mellett magas sótartalmú étrendet és H. pylori fertőzést követően. Egy, nem fertőzött egér normál étrenden. Korlátozott számú immunopozitív sejt van egy keskeny sávban a mirigyes zóna és a fedő gyomor gödör (nyíl) találkozásánál. B, nem fertőzött egér magas sótartalmú étrenden. A magas sótartalmú étrendben az egerekben növekszik az immunopozitív sejtek mirigyenkénti sűrűsége. A gyomorgödrök megnyúlása és a mirigy zóna vastagságának csökkenése miatt a proliferatív zóna lefelé tolódik. C, H. pylori-fertőzött egér normál étrenden. A H. pylori fertőzés fokozta az epithelium proliferációját. A normál mirigy zóna kiürülése a hiperplasztikus nyálkahám révén immunpozitív sejtek terjedését eredményezi a mirigyek tövében (nyíl). D, H. pylori-fertőzött egér magas sótartalmú étrenden. Bár statisztikai különbség nem volt megfigyelhető a két fertőzött csoport között, a legmagasabb BrdUrd jelölés sűrűségét a magas sótartalmú étrendben fertőzött egereknél figyeltük meg. Streptavidin-torma peroxidáz, 3,3′-diaminobenzidiine hematoxilin ellenfestéssel. Rúd, 100 μm.

A magas sótartalmú és a H. pylori fertőzés hatása a gyomor gödör BrdUrd beépülésére a proximális korpuszban és antrumban

Gasztrin elemzés.

A szérum gasztrin koncentrációja szignifikánsan megemelkedett (P ⇓. Bár a magas sótartalmú diétás csoportban a H. pylori fertőzés a szérum gasztrin átlagos növekedésével társult az ugyanazon étrenden lévő, nem fertőzött egerekhez képest, statisztikai szignifikancia nem érhető el. -só-étrend nem fertőzött egerek között átlagosan megnőtt a fertőzött egerekhez képest, a normál étrenden, amely nem érte el a szignifikanciát. A H. pylori-fertőzött egerek étrendcsoportjai között nem voltak lényeges különbségek. A szérum gasztrin-koncentráció nem volt összefüggésben az epitheliummal proliferáció a BrdUrd beépítésével értékelve.

A magas sótartalmú és a H. pylori fertőzés hatása a szérum gasztrinra a

VITA

A H. pylori egérmodell elérhetősége ideális lehetőséget kínál az étrendi só és a H. pylori fertőzés közötti kölcsönhatás közvetlen vizsgálatára a gyomor sérülésének felgyorsításában és a premalignus gyomor elváltozások kialakulásának elősegítésében. Ennek a vizsgálatnak a hisztopatológiai megfigyelései 16 WPI-vel összhangban vannak és kiterjesztik a magas sóbevitel gyomornyálkahártyára gyakorolt hatásának korábbi megfigyeléseit (16, 17, 18, 19, 22). A H. pylori Sydney törzs tartós fertőzését mind a nagy, mind az alacsony dózisú sótartalmú étrenddel kezelt C57BL egerekben elértük a vizsgálat 16 hetes időtartama alatt. Az egérmodellben a magas étkezési só statisztikailag növelte a H. pylori kolonizáció szintjét a test nyálkahártyájában a vizsgálat során értékelt minden időpontban (azaz 4, 8 és 16 WPI), kvantitatív ureázvizsgálat vagy tenyésztés alapján. A magas sótartalmú étrendhez kapcsolódó H. pylori gyomor-kolonizáció növekedése egyedi és potenciálisan szinergikus mechanizmust von maga után. A magas sófogyasztás a kolonizáció megkönnyítésével fokozhatja a karcinogenezist, és ezáltal növelheti a krónikus H. pylori gastritis hatását.

A H. pylori megnövekedett kolonizációs sűrűségét számos mechanizmus segítségével fel lehet erősíteni. Érdekes módon egy előzetes jelentés azt mutatta, hogy a gasztrin in vitro H. pylori-specifikus növekedési faktornak tűnik. Az emberi gasztrin specifikus, dózisfüggő módon stimulálta nyolc különböző H. pylori izolátum növekedését (42). Ebben a vizsgálatban a végső szérum gasztrin-koncentráció statisztikailag megemelkedett a H. pylori-fertőzött egerekben, és magas volt a magas sótartalmú étrendet fogyasztó egerekben. Jelenleg a szérum gasztrin-koncentráció nem teljesen párhuzamos a kolonizációs adatokkal; a szérumból származó egyetlen mintaértékek azonban csak a szövetkoncentrációk közvetett értékelését kínálják. Az eredmények azt is jelezhetik, hogy a megfigyelt sóval társult hatások a gasztrinstimulációtól lefelé eső eseményen vagy egy gasztrintól független folyamaton keresztül jelentkeznek.

Bár a magas sótartalmú étrenden a H. pylori-fertőzött egerek proximális korpuszában is meghosszabbodott gyomorgödröket és parietális sejtvesztést figyeltek meg, a H. pylori fertőzés által C57BL/6 egerekben kiváltott markáns atrófiás gastritis elhomályosította a magas sótartalmú étrend. Ezzel szemben a H. pylori-asszociált gyulladásos elváltozások relatív hiánya az antrumban lehetővé tette a fertőzött egerek antrális nyálkahártyáján hasonló, magas sóval társult hatás mérését az epithelialis proliferációra. Mivel a helyi gyulladás megzavarhatja vagy súlyosbíthatja a magas sótartalmú elváltozások hosszú távú előrehaladását, a jövőbeli vizsgálatok során hasznos lenne megvizsgálni más egér törzseket (pl. BALB/c), amelyeknél kevésbé súlyos H. pylori-asszociált gyomorhurut alakul ki párhuzamosan a C57BL/6 egerekkel.

Összefoglalva, tanulmányunk azt sugallja, hogy a magas sótartalmú étrend a foveoláris hiperplázia és a H. pylori kolonizáció kiterjesztése révén hozzájárul a gyomor atrófiájához és szinergizál a Helicobacter fertőzésekkel. Jelenleg nem ismert, hogy a gyomor differenciálódására és a fokozott H. pylori kolonizációra gyakorolt hatás a gyomorrák gyorsabb előrehaladásához vezet-e, de a jövőbeni tanulmányokkal foglalkozni kell.

Köszönetnyilvánítás

A Gastrin RIA-kat Andrea Varro és Graham J. Dockray előadta.

Lábjegyzetek

A cikk megjelenésének költségeit részben az oldaldíjak megfizetése fedezte. Ezért ezt a cikket a 18 U.S.C. Az 1734. § kizárólag ennek a ténynek a feltüntetésére.

↵ 1 Ezt a munkát az NIH R01 AI/RR 37750 (J. G. F. részére) és R01 CA67463 (T. C. W. és J. G. F.) támogatásával támogatta.

↵ 2 Kiknek kell címezni az utánnyomás iránti kérelmeket, a Massachusettsi Műszaki Intézet összehasonlító orvoslásának részlegében, Massachusetts Avenue 77. épület, 16. épület, 825C terem, Cambridge, MA 02139. Telefon: (617) 253-1757; Fax: (617) 258-5708; E-mail: jgfoxmit.edu

↵ 3 Az alkalmazott rövidítések: MNNG, N-metil-N′-nitro-N-nitrozo-guanidin; CFU, kolóniaképző egység (ek); WPI, hetekkel a fertőzés után; BrdUrd, 5-bróm-2'deoxiuridin; TBS, Tris-pufferolt sóoldat.