A Pollock olaj kiegészítése modulálja a hiperlipidémiát és enyhíti a máj steatosisát magas zsírtartalmú étrenddel etetett egerekben

Zhi-Hong Yang

1 Központi Kutatólaboratórium, Tokiói Innovációs Központ, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Tokió 192-0991, Japán

Hiroko Miyahara

1 Központi Kutatólaboratórium, Tokiói Innovációs Központ, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Tokió 192-0991, Japán

Jiro Takeo

1 Központi Kutatólaboratórium, Tokiói Innovációs Központ, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Tokió 192-0991, Japán

Akimasa Hatanaka

1 Központi Kutatólaboratórium, Tokiói Innovációs Központ, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Tokió 192-0991, Japán

Masashi Katayama

1 Központi Kutatólaboratórium, Tokiói Innovációs Központ, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Tokió 192-0991, Japán

Absztrakt

Háttér

Az elhízással járó hiperlipidémia szorosan összefügg az érelmeszesedés kialakulásával. Mind az n-3 többszörösen telítetlen zsírsavak (PUFA), mind a hosszú láncú egyszeresen telítetlen zsírsavak (MUFA-k; azaz C20: 1 és C22: 1 izomerek) kiegészítés több mechanizmus révén modulálja a metabolikus szindróma rizikófaktorait, ideértve a károsodott lipid anyagcsere helyreállítását is. Ezért megvizsgáltuk a pollockolaj, amely jelentős mennyiségű n-3 PUFA-t, valamint hosszú láncú MUFA-t tartalmaz, hatását a diéta okozta elhízott egerek plazma hiperlipidémiájára és máj steatosisára.

Mód

A hím C57BL/6J egereket (24-26 g) két csoportra osztottuk (n = 10/csoport), és magas zsírtartalmú étrendet etettek 32% zsírtartalommal (kontrollcsoport) vagy 17% sertészsírral és 15% pollockolajjal (kísérleti csoport) 6 hétig. Mindkét csoportban a zsír a teljes kalóriabevitel 60% -át tette ki.

Eredmények

Bár a test és a máj tömege a két csoportban nem különbözött szignifikánsan, a máj lipidkoncentrációi (trigliceridek és teljes koleszterin) alacsonyabbak voltak (P Kulcsszavak: Pollockolaj, n-3 PUFA, MUFA, hiperlipidémia, máj steatosis, adipokinek

Háttér

Az alaszkai pollock (Theragra chalcogramma) a csendes-óceáni északi faj a tőkehalfélék családjába, a Gadidae. A Pollock olaj jelentős mennyiségű n-3 PUFA-t és hosszú láncú MUFA-t tartalmaz [6]. Az alaszkai pollock halászati ipar az Egyesült Államokban a legnagyobb és a világon az egyik legnagyobb. Az elmúlt években a pollók halászata számolt be

Az amerikai tenger gyümölcseiből kirakodott mennyiség tömegének 30% -a [7]. Bár a pollockolajat mind az élelmiszeriparban, mind a takarmányiparban használják [8], keveset tudunk az étrendi pollockolaj és a hiperlipidémia kapcsolatáról. Figyelembe véve az n-3 PUFA-k és a hosszú láncú MUFA-k egészségre gyakorolt előnyeit, megvizsgáltuk az étrendi pollockolaj hiperlipidémiára gyakorolt hatását diétával indukált diszlipidémia esetén.

Mód

Diétás olajok zsírsavösszetételének mérése

A kamériazsírt a Romi Smilfood B. V.-től (Heerenveen, Hollandia) szerezték be. Pollock olajat a Nippon Suisan Kaisha, Ltd.-től (Tokió, Japán) szereztünk be, és szilikagéllel és aktivált agyagokkal finomítottuk, majd gőz desztillációval szagtalanítottuk. Az összes standard és extrahált lipidet felhasználásig -20 ° C-on tároltuk. Az étkezési zsírok zsírsavösszetételét (1. táblázat: 1. táblázat) a minták 14% (w/v) bór-trifluorid/metanol (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) 80 ° C-on történő metilezése után határoztuk meg. 30 percig. A kapott zsírsav-metil-észtereket gázkromatográfiával számszerűsítettük egy Agilent 6890N hálózati gázkromatográf rendszer (Agilent Technologies Japan, Ltd., Tokió, Japán) alkalmazásával, osztott injektorral, FID detektorral és egyesített szilícium-dioxid-kapilláris oszloppal (DB-WAX, 30 m × 0,25 mm ID × 0,25 μm filmvastagság, J & W Scientific, Agilent Technologies). A metil-észtereket a retenciós idők és a zsírsav-metil-észter standardok összehasonlításával azonosítottuk (Nu-Chek Prep, Inc., Elysian, MN, USA). A Pollock olaj jelentős mennyiségű hosszú láncú MUFA-t és n-3 PUFA-t tartalmaz (C20: 1, valamint C22: 1 izomerek és n-3 PUFA együttesen:

Asztal 1

Az étkezési zsírok zsírsavösszetétele (%)

Zsírsav	Disznózsír	Pollock olaj
C14: 0	1.5	4.9
C16: 0	25.4	9.8
C16: 1	2.4	6.1
C18: 0	5.9	1.7
C18: 1	40.6	14.3
C18: 2 n-6	10.8	1.3
C18: 3 n-3	1.0	1.1
C20: 1 n-9	0.8	9.1
C20: 1 n-7	ND	3.3
C22: 1 n-11	ND	12.3
C22: 1 n-9	ND	1.6
C20: 5 n-3	0,02	10.3
C22: 5 n-3	0.1	1.2
C22: 6 n-3	0,03	7.9

Az értékek három egymástól függetlenül feldolgozott minta átlagának felelnek meg.

ND: Nem észlelhető.

Állatok és diéták

A Nihon Bioresearch Inc. (Gifu, Japán) intézményi állatgondozási és felhasználási bizottsága jóváhagyta ezt a tanulmányt. A hím C57BL/6J egereket (5 hetesek) a Charles River Laboratories Japan Inc.-től (Yokohama, Japán) szereztük be, és a Nihon Bioresearch-n tartottuk 23 ± 1 ° C-on, 12/12 órás világos-sötét ciklus alatt. Az állatoknak ingyenes hozzáférést biztosítottak a vízhez és a standard egér-chow CRF-1-hez (Oriental Yeast Co. Ltd., Tokió, Japán) egy hét akklimatizációs időtartamig.

Az akklimatizáció után az egereket véletlenszerűen két csoport egyikébe soroltuk a 6 hetes etetési kísérlethez. A kontrollcsoportot (n = 10) magas zsírtartalmú étrendet etették 32% zsírtartalommal (D12492 rágcsáló diéta 60 kcal% zsírral; Research Diets, Inc., NJ, USA), a kísérleti csoportot pedig pollock-tal kiegészített étrenddel etették. olaj (17% zsír és 15% pollock olaj). A teljes zsírbevitel ellenőrzéséhez mindkét étrend teljes zsírtartalma a kalóriabevitel 60% -ának felelt meg. A diéták összetételeit a 2. táblázat tartalmazza. 2. A testtömeget és az ételbevitelt az egész vizsgálat során figyelték. A beavatkozási periódus végén az egereket 4% -os nátrium-pentobarbitállal altattuk (Dainippon Sumitomo Pharma, Osaka, Japán), és a vért hasi vénaszúrással vettük fel. A plazmát 1000 g-vel 15 percig végzett centrifugálással nyertük, és az elemzésekig -80 ° C-on tároltuk. A létfontosságú szerveket eltávolítottuk, majd rövid, hideg foszfáttal pufferolt sóoldattal (pH = 7,4) mossuk. A mesentericus fehér zsírszövetet (WAT) és a májat -80 ° C-on tartottuk a további lipid-extrakció és a kvantitatív polimeráz láncreakció (QPCR) elemzéséhez.

2. táblázat

Hozzávaló	Sertészsír diéta (g/100 g étrend)	PO diéta (g/100 g étrend)
Kazein	25.8	25.8
l -Cisztein	0.4	0.4
10. maltodextrin	16.2	16.2
Szacharóz	8.9	8.9
Cellulóz	6.5	6.5
Ásványi keverék	1.3	1.3
Vitamin keverék	1.3	1.3
Kolin bitartarát	0,3	0,3
Szójabab olaj	3.2	3.2
Disznózsír	32	17.
Pollock olaj	--	15

PO diéta: Pollock olajjal kiegészített étrend.

Lipidek extrakciója és zsírsav elemzés

A plazma, a máj és a WAT zsírsav-összetételét a C57BL/6J egerekben az előzőekben leírtak szerint határoztuk meg [5]. A lipideket úgy extraháltuk, hogy a szövetmintákat metanol/hexán oldatban (4: 1 v/v) homogenizáltuk, butilezett hidroxi-toluollal (BHT, 50 μg/ml) antioxidánsként adva. A mintákat acetil-kloriddal metileztük, a zsírsav-metil-észtereket elválasztottuk és gázkromatográfiával számszerűsítettük. A metil-észterek azonosítását a standard zsírsavak retenciós idejének összehasonlításával végeztük.

A plazma lipidszintjének meghatározása

Vérmintákat vettünk minden egér retro-orbitális vénás plexusából a 0., 2., 4. és 6. hét végén. A triglicerid (TG), az összes koleszterin (TC) és a nagy sűrűségű lipoprotein (HDL) plazmakoncentrációi A koleszterinszintet triglicerol E-teszt, koleszterin E-teszt és HDL-koleszterin E-teszt készletekkel (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japán) mértük. Az LDL-koleszterin koncentrációját [LDL-koleszterin] = [TC] - [HDL-koleszterin] - [TG] × 0,2 értékkel számoltuk.

A plazma adipokin szintjének meghatározása

Az adiponektin, rezisztin és leptin plazmakoncentrációit a 6 hetes periódus végén határoztuk meg az egér Adiponectin ELISA készlet (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Tokió, Japán), Mouse Resistin ELISA készlet (Shibayagi Co. Ltd.) alkalmazásával., Gunma, Japán), illetve Mouse Leptin ELISA kit (Morinaga Institute of Biological Science, Inc., Yokohama, Japán), ill.

A máj lipidszintjének meghatározása

A májmintákból az összes májlipidet kivontuk a leírtak szerint [9]. Az extrahált lipideket vákuumban szárítottuk (Concentrator Plus 5305, Eppendorf Inc., NY, USA), majd feloldottuk 10 tömeg% Triton X-100-at tartalmazó 2-propanolban. A triglicerid- és az összkoleszterin-koncentrációt a fent említett kereskedelmi enzimkészletek (Wako) segítségével határoztuk meg.

Az mRNS expressziójának meghatározása QPCR segítségével

Statisztikai analízis

Az eredményeket az átlag ± az átlag standard hibájaként fejezzük ki. A két csoport közötti statisztikai különbségeket Student t-tesztjével elemeztük, és a P-ben szignifikánsnak tekintettük. A 3. táblázat 3 felsorolja a test és a létfontosságú szervek tömegét az étrend által kiváltott elhízott C57BL/6J egerek számára a kontroll (zsírsav) és a kísérleti (pollock olaj) csoportokban. A 6 hetes táplálkozási időszak után a két csoport között nem volt szignifikáns különbség a test, a máj, a fehér, valamint a barna zsírszövet és a csontváz izomtömegében.

3. táblázat

Élelmiszerbevitel, testtömeg és létfontosságú szervtömegek

Sertészsír diéta	PO diéta
Ételbevitel (g/nap)	2,5 ± 0,03	2,3 ± 0,04
Kezdeti testtömeg (g)	25,5 ± 0,4	25,5 ± 0,5
Végső testtömeg (g)	32,7 ± 1,6	31,6 ± 2,4
Szervtömegek (mg/g testtömeg)
Máj	33,1 ± 0,7	33,6 ± 0,7
Tüdő WAT	50,9 ± 3,0	45,2 ± 3,9
Mesenterikus WAT	15,4 ± 0,9	13,7 ± 1,1
Barna zsírszövet	3,3 ± 0,5	3,6 ± 0,3
Vázizom	5,9 ± 0,4	5,9 ± 0,3

Mindegyik érték az átlag ± SE (n = 10) értéket képviseli. PO diéta: Pollock olajjal kiegészített étrend; WAT: fehér zsírszövet.