Kísérleti
és terápiás
Gyógyszer

  • Journal Home
  • Jelenlegi probléma
  • Közelgő kérdés
  • Legolvasottabb
  • Legtöbbször idézett (dimenziók)
    • Az elmúlt két év
    • Teljes
  • Legtöbbször idézett (CrossRef)
    • Az elmúlt év 0
    • Teljes
  • Közösségi média
    • Múlt hónap
    • Múlt év
    • Teljes
  • Archívum
  • Információ
  • Online benyújtás
  • Információ a szerzőknek
  • Nyelv szerkesztése
  • Információ a bírálók számára
  • Szerkesztési irányelvek
  • Szerkesztőbizottság
  • Célok és hatály
  • Kivonatolás és indexelés
  • Bibliográfiai információk
  • Információ a könyvtárosoknak
  • Információ a hirdetők számára
  • Újranyomtatások és engedélyek
  • Lépjen kapcsolatba a szerkesztővel
  • Általános információ
  • A Spandidosról
  • Konferenciák
  • Munkalehetőségek
  • Kapcsolatba lépni
  • Felhasználási feltételek
  • Szerzői:
    • Hongxia Li
    • Hongying Wu
    • Yue Gao
    • Shaohua Cai

  • Ezt a cikket a következők említik:

    Absztrakt

    Bevezetés

    Az emlődaganatok kezelésére alkalmazott sugárkezelést követően az egyik leggyakoribb szövődmény a sugárzás okozta tüdőkárosodás. A sugárzás okozta tüdőbetegségben két különálló klinikai stádiumot ismernek fel: Korai, átmeneti stádium, amelyet sugárzási pneumonitis, majd később krónikus sugárfibrózis jellemez, amely hatással van a helyi daganatok kontrollarányára, prognózisára és a sugárterápiát követő életminőségre (1).

    főzet

    A hagyományos kínai orvoslás vagy a növényi gyógyszer fontos megközelítés a tüdősérülések kezelésében. Az orvosok egy hatékony kezelési sorozatot fejlesztettek ki, amelyet kínaiul Yangyinqingfei néven ismernek a tüdő gyulladásos mediátorainak csökkentésére. A Yangyinqingfei főzetről úgy gondolják, hogy elűzi a szelet, megszünteti a nedvességet és elősegíti a vérkeringést a fájdalom enyhítésére, a lép élénkítésére és a qi szabályozására (18). A Yangyinqingfei főzetet hagyományosan a diftéria kezelésére alkalmazták (19). Kevés jelentés készült erről a növényi gyógymódról, különös tekintettel a sugárzás okozta tüdősérülés kezelésének mechanizmusára. Ebben a tanulmányban a Yangyinqingfei főzet terápiás hatásait a sugárzás okozta tüdőkárosodás patkány modelljében értékelték, és a hatás hátterében álló potenciális mechanizmust vizsgálták.

    Anyagok és metódusok

    Yangyinqingfei főzet

    A Yangyinqingfei főzetet a Népi Felszabadító Hadsereg Általános Kórházának hagyományos kínai gyógyszergyógyszertárából (Peking, Kína) vásárolták. A Yangyinqingfei főzet recept a következő öt kínai gyógynövényből állt: Sheng Di Huang (15 g), Xuan Shen (15 g), Verbena (15 g), Forsythia (10 g) és Gan Cao (6 g). Az egyes gyógynövények mennyiségét a Yangyinqingfei főzetben a Kínai Népköztársaság Gyógyszerészeti Bizottságának információi alapján határozták meg (20). Röviden, mindegyik gyógynövényt vízzel 30 percig pároljuk, majd szűrőpapíron átszűrjük, majd 0,2, 0,6 és 1,8 g/ml főzetekre koncentráljuk. Az extraktumokat felhasználásig 4 ° C-on tároltuk.

    Állati körülmények és kezelések
    Szövettani vizsgálat

    A besugárzás után egy, két és négy héttel minden csoportból öt állatot leöltünk, és a tüdőszöveteket összegyűjtöttük. A jobb tüdőszöveteket paraffinba ágyazva 5 μm vastagságban metszettük, mielőtt hematoxilinnal és eozinnal (H&E) festettük volna, és fénymikroszkóp alatt megfigyeltük [Olympus (BH-2), Nagano, Japán].

    Western blot elemzés

    Az MMP-12 és a TIMP-1 fehérje szintjének értékelésére a tüdőszövetekben Western blot elemzést végeztünk. A tüdőszöveteket nem denaturáló lízispufferrel megfelelően homogenizáltuk, és 12 000 x g-vel 15 percig 4 ° C-on centrifugáltuk. A felülúszó fehérjekoncentrációját a fehérje denaturálását megelőzően, fehérjetöltő puffer segítségével határoztuk meg. Ezután összesen 30 μg fehérjét töltöttünk egy 12% -os SDS-poliakrilamid-gélre, egy polivinilidén-difluorid-membránra blottoltunk és 1 órán át blokkoltuk 5% sovány tejjel Tris-pufferolt sóoldatban, 0,05% Tween 20-mal. A membránokat primer antitestekkel inkubáltuk. MMP-12, TIMP-1 és β-aktin (1: 1 000; Takara Bio, Inc., Shiga, Japán) ellen egy éjszakán át 4 ° C-on, majd 2 órás inkubálás torma-peroxidáz-konjugált szekunder antitesttel (1: 3000; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, Kalifornia, USA). A membránokat háromszor mostuk TBS-T pufferral, majd fokozott kemilumineszcencia (ECL; Amersham, Piscataway, NJ, USA) detektálásával tettük láthatóvá.

    RNS extrakció és reverz transzkripció-polimeráz láncreakció (RT-PCR) elemzése

    A teljes RNS-t TRIzol reagenssel (Invitrogen Life Technologies, Karlsruhe, Németország) extraháltuk a tüdőszövetekből. A teljes RNS-t (1 μg) reverz transzkripcióval írtuk át a cDNS-re, amelyet azután az MMP-12 és a TIMP-1 mRNS szintjének meghatározására használtunk Taq DNS polimerázzal végzett PCR alkalmazásával (Fermentas, Pittsburgh, PA, USA). A PCR-t a következő körülmények között hajtottuk végre: Első denaturálás 94 ° C-on 30 mp-ig, hevítés 58 ° C-on 30 mp-ig és kiterjesztés 72 ° C-on 1 percig, majd 30 amplifikációs ciklus MMP-12 és TIMP-1 számára és 35 ciklus a β-aktinhoz. Az MMP-12, TIMP-1 és β-aktin primer szekvenciáit Primer Premier 5.0 szoftverrel (Premier Biosoft, Palo Alto, CA, USA) terveztük, és a következők voltak: MMP-12 előre 5'-AGGTCAAGATGGATGAAGCGG-3 ', fordított 5′-GAAGTAATGTTGGTGGCTGGACTC-3 ’; TIMP-1 előre 5′-ACAGCTTTCTGCAACTCG-3 ’, hátramenet 5′-CTATAGGTCTTTACGAAGGCC-3’; β-aktin előre 5'-TGGCCTCACTGTCCACCTTC-3 ', hátramenet 5'-CGAATGGCTGACCATTCAGA -3'. Az összes folyamatot a gyártó utasításai szerint hajtották végre. Ezután a mintákat gélelektroforézissel (2% agaróz) elemeztük, a DNS-sávokat megvizsgáltuk, és a DNS szintjét félkvantitatív módon mértük egy géldokumentációs rendszerrel (Bio-Rad Model Gel Doc 2000; Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

    Statisztikai analízis

    I. táblázat

    Patkányok testtömege a besugárzást követően Yangyinqingfei főzet alkalmazásával vagy anélkül.

    I. táblázat

    Patkányok testtömege a besugárzást követően Yangyinqingfei főzet alkalmazásával vagy anélkül.

    Testtömeg (g) N A B C D E idő
    1 hét 5. 312,8 ± 1,8 261,2 ± 2,7a 273,1 ± 9,3a 284,6 ± 9,6a, c 253,1 ± 16,8a
    2 hét 5. 347,9 ± 6,6 287,5 ± 5,8a 302,7 ± 6,4a, b 311,3 ± 4,8a, b 292,8 ± 12,3a
    4 hét 5. 377,2 ± 7,4 315,0 ± 8,5a 333,5 ± 12,3a, c 344,9 ± 12,3a, b 324,0 ± 14,3a

    1.ábra

    A tüdő hisztopatológiai változásai a besugárzást követően Yangyinqingfei főzet kezeléssel vagy anélkül. (A) kontrollcsoport; (B) modellcsoport (besugárzott patkányok gyógyszer beadása nélkül); (C) alacsony dózisú kezelési csoport (2 g/kg/nap); (D) közbenső dózisú kezelési csoport (6 g/kg/nap); (E) nagy dózisú kezelési csoport (18 g/kg/nap). Az A csoportba tartozó patkányok ál-besugárzást kaptak; másokat egyetlen 25 Gy-os dózissal besugároztunk a jobb hemi-thoraxukba 60Co γ-sugárral. A patkányokat egy, két vagy négy héttel a besugárzás után feláldoztuk, és a tüdőszekciók különböző mértékű torlódást és összeesett alveolusokat mutattak a 60Co γ-sugár besugárzását követően Yangyinqingfei főzet beadásával vagy anélkül. Hematoxilin és eozin festés; nagyítás, × 200. p.i., poszt-besugárzás.

    A Yangyinqingfei főzet hatása az MMP-12 és TIMP-1 expressziójára

    A Yangyinqingfei főzetnek az MMP-12 és TIMP-1 mRNS és fehérje expressziójára gyakorolt ​​hatásainak vizsgálatához sugárzás okozta tüdőkárosodásban szenvedő patkányokban RT-PCR és Western blot elemzést végeztünk. Amint a 2A. Ábra mutatja, az MMP-12 mRNS szintje a tüdőszövetekben a besugárzást követően megemelkedett, és a besugárzás után két héttel tetőzött; azonban a besugárzást követő négy héten az mRNS szintje jelentősen csökkent. Ezzel szemben a TIMP-1 mRNS szintje a tüdőszövetekben a besugárzást követően emelkedett, és a legmagasabb volt a besugárzást követő négy héten belül. A B csoporthoz képest a C-E csoportokban az MMP-12 és a TIMP-1 mRNS szintje csökkent. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a Yangyinqingfei főzet gátló hatást fejtett ki az MMP-12 és a TIMP-1 mRNS expressziójára, különösen nagyobb dózisnál.

    2. ábra

    A Yangyinqingfei főzet hatása az MMP-12 és TIMP-1 expresszióra. A besugárzást követő különböző időpontokban a teljes RNS-t kivontuk a tüdőszövetekből, és elvégeztük a reverz transzkripció-polimeráz láncreakciót és a Western blot elemzést. (A) az MMP-12 és a TIMP-1 mRNS-expressziója egy, két és négy héttel a besugárzás után; (B) az MMP-12 és a TIMP-1 fehérje expressziója egy, két és négy héttel a besugárzás után. Belső kontrollként β-aktint használtunk. a, kontrollcsoport; b, modellcsoport (besugárzott patkányok gyógyszer beadása nélkül); c, alacsony dózisú kezelési csoport (2 g/kg/nap); d, közepes dózisú kezelési csoport (6 g/kg/nap); e, nagy dózisú kezelési csoport (18 g/kg/nap); MMP-12, mátrix metalloproteináz-12; TIMP-1, a mátrix metalloproteináz-1 szöveti inhibitorai; p.i., poszt-besugárzás.

    Az MMP-12 és a TIMP-1 fehérje szintjét Western-blot alkalmazásával figyelték meg a tüdőszövetben. Amint a 2B. Ábra mutatja, az MMP-12 és a TIMP-1 fehérjék pozitívan expresszálódtak mindegyik csoportban. Az MMP-12 és a TIMP-1 fehérje expressziós szintje a besugárzást követően szignifikánsan megemelkedett a besugárzás után az A csoportéval összehasonlítva. A B csoporthoz képest az MMP-12 és a TIMP-1 fehérje expresszióját a CE csoportokban hatékonyan szabályozták, különösen a D csoportban; az expressziós szintek azonban továbbra is magasabbak maradtak, mint az A. csoportban. Ez az eredmény tovább bizonyítja a Yangyinqingfei főzet gátló hatását az MMP-12 és TIMP-1 expressziójára.

    Vita

    Jelen tanulmány kimutatta, hogy a Yangyinqingfei főzet védő hatást gyakorolt ​​a sugárzás okozta tüdőkárosodásban szenvedő patkányokra. A védőhatás hátterében álló mechanizmus magában foglalhatja az MMP-12 és a TIMP-1 expresszió csökkentését.

    A sugárzás okozta tüdőkárosodás kóros változásai közé tartozik az intersticiális tüdőtorlódás és az ödéma, a gyulladásos sejtek beszűrődése, az interstitialis tüdőszál hiperpláziája és az alveoláris atrófia (21). Jelenleg a sugárzás okozta tüdőkárosodás patkányokban jól bevált modell, amelyet számos tanulmányban alkalmaztak (22, 23). Jelen tanulmányban a Wistar patkányokat besugározták, hogy tüdőkárosodást idézzenek elő. A besugárzás után egy héttel alveoláris fal ödémát és kapilláris torlódást figyeltek meg. Két héttel a besugárzás után makrofág infiltrációt figyeltek meg. Az alveoláris septum megvastagodása és az alveolus szerkezete a besugárzás után négy héttel eltűnt. Az elváltozásokat a krónikus gyulladás jelei, a látható fibroblasztok hiperpláziája és az alveoláris septa megvastagodása, valamint az alveoláris tér zsugorodása vagy kompenzációs tágulása dominálta. Így a sugárzás okozta tüdőkárosodás patkány modelljét sikeresen sikerült megállapítani.

    Ebben a tanulmányban az eredmények arra utaltak, hogy a Yangyinqingfei főzettel történő korai beavatkozás enyhítette a tüdőödémát, a torlódást, a gyulladást és az alveoláris septum megvastagodását a modellcsoporttal (B csoport) összehasonlítva. Ez azt jelzi, hogy a Yangyinqingfei főzet korai alkalmazása hatékony lehet a sugárzás okozta tüdőkárosodás ellenőrzésében és enyhítésében. A tüdő hisztopatológiai elváltozásainak elemzése azt mutatta, hogy a nagy Yangyinqingfei főzetet tartalmazó patkányok kisebb intersticiális tüdődugulást, enyhe ödémát és kevésbé alveoláris szerkezeti károsodást mutattak az alacsonyabb dózisokkal kezelt csoportokhoz képest. A nagy dózisú Yangyinqingfei főzettel kezelt patkányok azonban mellékhatásokat mutattak, beleértve a hasmenést is. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a Yangyinqingfei főzet adagolása hatással van a kezelés hatékonyságára. A mellékhatások ellenére azonban a nagy dózisú Yangyinqingfei főzet nagyobb védőhatást mutatott a sugárzás okozta tüdőkárosodás ellen, mint a többi csoportban alkalmazott dózisok.

    Összefoglalva, ez a tanulmány kimutatta, hogy a Yangyinqingfei főzet megelőző és terápiás hatást gyakorol a sugárzás okozta tüdőkárosodás korai szakaszára, amelynek mechanizmusa magában foglalhatja az MMP-12 és a TIMP-1 szuppresszióját. A megfigyelt hatások hátterében álló mechanizmusok további értékeléséhez azonban részletesebb vizsgálatokra van szükség.

    Hivatkozások

    Inoue A, Kunitoh H, Sekine I, Sumi M, Tokuuye K és Saijo N: Sugárzási tüdőgyulladás tüdőrákos betegeknél: a kockázati tényezők és a hosszú távú prognózis retrospektív vizsgálata. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 49: 649–655. 2001. Cikk megtekintése: Google Scholar: PubMed/NCBI

    Todd NW, Luzina IG és Atamas SP: A pulmonalis fibrózis molekuláris és sejtes mechanizmusai. Fibrogenezis szövetjavítás. 5: 112012. Cikk megtekintése: Google Scholar