Az étrendi hatások n-6: n-3 többszörösen telítetlen zsírsavarány a húsminőségre, a hasított test jellemzőire, a szöveti zsírsavprofilokra és a lipogén gének expressziójára növekvő kecskékben

Szerepek Konceptualizálás, forrásszerzés, módszertan, írás - áttekintés és szerkesztés

telítetlen

Állatorvosi Preklinikai Tudományok Tanszék, Állatorvostudományi Kar, Malajzia Universiti Putra, Serdang, Malajzia, Növénytudományi és Biotechnológiai Tanszék, Élettudományi és Biotechnológiai Kar, Shahid Beheshti Egyetem, Teherán, Irán

Állatorvosi Preklinikai Tudományok Tanszéke, Állatorvos-tudományi Kar, Universiti Putra Malaysia, Serdang, Malajzia

Szerepek írása - eredeti vázlat

Állatorvosi Preklinikai Tudományok Tanszék, Állatorvostudományi Kar, Universiti Putra Malaysia, Serdang, Malajzia, Baromfitudományi Tanszék, Mezőgazdasági Kar, Tarbiat Modares Egyetem, Teherán, Irán

Szerepek Formális elemzés

Trópusi Mezőgazdasági Tagsági Intézet, Malajzia Putra Egyetem, Serdang, Malajzia

Szerepek Adatmegőrzés, vizsgálat

Trópusi Mezőgazdasági Tagsági Intézet, Malajzia Putra Egyetem, Serdang, Malajzia

Szerepek Szoftver, validálás

Malajziai Putra Egyetem Agrártudományi Kar Állattudományi Tanszéke, Serdang, Malajzia

Szerepek Finanszírozás megszerzése, Felügyelet

Állatorvosi Preklinikai Tudományok Tanszék, Állatorvostudományi Kar, Universiti Putra Malaysia, Serdang, Malajzia, Baromfitudományi Tanszék, Mezőgazdasági Kar, Tarbiat Modares Egyetem, Teherán, Irán

Szerepek írása - áttekintés és szerkesztés

Jelenlegi cím: Állattudományi Élettani és Higiéniai Intézet, Bonni Egyetem Katzenburgweg 7–9, Bonn, Németország

Mezőgazdasági, élelmiszer- és táplálkozástudományi tagozat, Alberta Egyetem, Edmonton, Kanada

  • Mahdi Ebrahimi,
  • Mohamed Ali Rajion,
  • Saeid Jafari,
  • Mohammad Faseleh Jahromi,
  • Ehsan Oskoueian,
  • Awis Qurni Sazili,
  • Yong Meng Goh,
  • Morteza Hosseini Ghaffari

Javítás

2019. szeptember 12 .: Ebrahimi M, Rajion MA, Jafari S, Faseleh Jahromi M, Oskoueian E és mtsai. (2019) Javítás: Az étrendi hatások n-6: n-3 többszörösen telítetlen zsírsavarány a húsminőségre, a hasított test jellemzőire, a szöveti zsírsavprofilokra és a lipogén gének expressziójára növekvő kecskékben. PLOS ONE 14 (9): e0222678. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0222678 Javítás megtekintése

Ábrák

Absztrakt

Állati jólét

Ezt a tanulmányt a Malajziai Universiti Putra-n végezték az Universiti Putra Malaysia állatjóléti és etikai kutatási politikájának irányelvei alapján. A kísérleti protokollt az Universiti Putra Malaysia állat-egészségügyi és gondozási bizottság hagyta jóvá. A kísérleti kecskék gondozása a malajziai előírásoknak megfelelően történt.

Állatok, étrend és kezelés

Vágási eljárások és a hasított test jellemzőinek mérése

A 100 napos vizsgálat végén az összes állatot torkvágással vágták le, az MS 1500: 2004 (Malajziai Minisztérium Tanszéke) által felvázolt standard vágási eljárásoknak megfelelően a Hústudományi Laboratóriumban, a Kar Állattudományi Tanszékén. Mezőgazdaság, Universiti Putra Malajzia. Körülbelül 150 g LD-izmot távolítottunk el a hasított testből a 12. és 15. borda között. Valamennyi mintát -80 ° C-on tároltuk, amíg elemeztük a hosszú láncú FA-t, a hús minőségét és az antioxidáns aktivitást. 24 óra elteltével a hűtött tetem tömegét feljegyeztük, majd a tetemeket a hasított fűrésszel egyenlő felekre osztottuk a középvonal mentén. A jobb felét azonnal feldaraboltuk az izommintavételhez. A jobb féltestet a 12. és a 13. borda közé bordázták. Ebből a vágásból alumínium vonalzóval határoztuk meg a megfelelő hátsó zsírvastagságot. A borda szem területét Image J szoftvercsomag segítségével határoztuk meg (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA).

Az izom, a csont és a zsír összetételének mérésére alkalmazott boncolási technikát Colomer-Rocher és munkatársai írták le [18]. Minden hasított test megfelelő részét lemértük, majd öt elsődleges darabra osztottuk, nevezetesen a nyakra, a vállra, a mellre, az ágyékra és a lábra, majd a darabokat lemértük és a hasított test teljes tömegének százalékában fejeztük ki. Mindegyik darabot hús, csont, szubkután zsír és izmok közötti részekre boncoltuk. Először az izmot külön-külön eltávolították a rögzítésükről, majd eltávolították a külső zsírt. Az izmokat, a zsírokat és a csontokat elválasztották és egyenként lemérték.

A hús minőségének meghatározása

A húsminták pH-ját a mortem után 1, 3 és 6 napon mértük egy pH-elektróda behelyezésével egy hordozható pH-mérőhöz (Hanna Instruments, Woonsocket, RI, USA), 5 ° C-ra rögzítve.

Az instrumentális színt ColorFlex rendszerrel (Hunter Associates Laboratory, Reston, USA) mértük. A mintákat a könnyűség (L *), a vörösség (a *), a sárgaság (b *), az árnyalat szöge (arctan, b */a *) szempontjából értékeltük, amely leírja a hús színárnyalatát vagy színét, valamint a telítettségi indexet vagy a kromát mint √ (a 2 + b 2), amely leírja a szín fényességét vagy élénkségét [19]. Valamennyi értéket az egyes izmok hét mérésének átlagából határoztuk meg 28 ± 2 ° C-on a 10˚ standard megfigyelővel. A spektrokolorimétert fehér (L * = 100) és fekete (L * = 0) standard burkolólapokkal standardizálták, mielőtt felhasználták volna. Az elemzés előtt a mintákat egy éjszakán át hagytuk 4 ° C-on megolvadni. A mintákat közvetlenül a színmérőbe helyeztük és megmértük. Az L *, a * és b * értékek és a spektrális reflexió (400–700 nm) három leolvasását összegyűjtöttük az egyes minták különböző helyeiről, és átlagoltuk.

A csepegésveszteség meghatározása céljából a vágás után 24 órával, 3 nappal és 6 nappal vett, körülbelül 30 g-os mintákat levágtuk és lemértük. Ezután mindegyik mintát négyzet alakú hálóba (25 cm2) helyeztük, és felfújt műanyag zacskóban szuszpendáltuk 48 órán át 4 ° C-on, anélkül, hogy bármilyen érintkezésbe került volna a zacskóval, majd újra lemértük [19]. A cseppcsökkenést a tömeg százalékos változásának számításával számoltuk [19]. Hol; W1 a kezdeti tömeg, W2 a nyers minta tömege.

A főzési veszteség meghatározásához a húsmintákat polietilén zacskókba tettük, és forró vízfürdőbe (80 ° C) helyeztük, amíg a belső hőmérséklet (kézi szondával ellátott hőmérővel mérve; Hanna Instruments, Woonsocket, RI, USA) elérte a belső hőmérsékletet. 78 ° C. A zsákokban lévő kecskehúsmintákat ezután csapvíz alatt hűtöttük 15 percig. A lehűtött mintákat a polietilén tasakból vettük, papírtörlővel szárazra foltoztuk és lemértük. A főzési veszteséget úgy becsültük meg, hogy lemértük őket főzés előtt és után [19]. Hol; W2 a nyers minta tömege és W3 a végső tömeg.

A Warner – Bratzler nyíróerő (WBS) mérését az LD húsból eltávolított három magon (1,27 cm átmérőjű) végeztük, párhuzamosan az izomrostok hosszanti orientációjával. A WBS-t A. HD plusz textúra-analizátorral (Stable Micro System, Surrey, Egyesült Királyság) határoztuk meg, amely Warner Bratzler penge-eszközzel volt felszerelve. Mindegyik magot a textúra-analizátor alaplemezére helyeztük, és egyszer megnyírtuk a szálak középpontjában és merőlegesen a szálak hosszirányára. A Warner-Bratzler nyíróerőértékeket az egyes minták összes alapértékének átlagaként adtuk meg. Az alacsonyabb nyíróerő-érték (Newton, N) finomabb húst jelez, míg a nagyobb nyíróerő keményebb húst jelez.

A húsminták lipidoxidációját tiobarbitursav-reaktív anyagokkal (TBARS) mértük Lynch és Frei [20], Mercier és mtsai [21] módosított módszerével. A húsmintákat (1 g) 4 ml 0,15 M KCl + 0,1 mM BHT-ben homogenizáltuk Ultraturrax-szal (1 perc, közepes sebességgel). Homogenizálás után a mintából 200 μl-t összekevertünk TBRAS-oldattal, majd vízfürdőben 95 ° C-on 60 percig melegítettük, amíg rózsaszín nem vált ki. Lehűlés után 1 ml desztillált vizet és 3 ml n-butil-alkoholt adunk az extraktumokhoz, és vortexeljük. A keverékeket 5000 (rpm) sebességgel 10 percig centrifugáltuk. A felülúszó abszorbanciáját 532 nm-en egy megfelelő vakpróbával szemben spektrofotométerrel (Secomam, Domont, Franciaország) leolvastuk. A TBARS-t 1, 1, 3, 3-tetraetoxipropán standard görbéből számítottuk, és mg malondialdehid (MDA)/kg mintában fejeztük ki.

Kísérleti étrendek és longissimus dorsi szövetek zsírsav-analízise

A szöveti PPAR-ok és az SCD-génexpressziók mennyiségi meghatározása valós idejű polimeráz láncreakcióval (PCR)

Közvetlenül a levágás után az LD izomot gyorsan kivágták és folyékony nitrogénben gyorsfagyasztották, és -80 ° C-on tárolták az RNS extrakciójáig. A teljes RNS-t 100 mg fagyasztott szövetből extraháltuk az RNeasy®lipid szöveti mini készlet segítségével (Cat. No. 74804, Qiagen, Hilden, Németország), és az DNR-emésztést az RNS-tisztítás során RNáz-mentes DNáz-készlettel (Qiagen, Hilden) végeztük., Németország) a gyártó utasításai szerint. A teljes RNS-tisztaságot az abszorbancia leolvasások 260/280 nm arányával határoztuk meg NanoDrop ND-1000 UV-Vis spektrofotométerrel (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA). A tisztított teljes RNS-t (1 μg) reverz átírással Quantitect ® reverz transzkripciós készlet (Qiagen, Hilden, Németország) segítségével, a gyártó ajánlott eljárása szerint.

A valós idejű PCR-t a Bio-Rad CFX96 Touch készülékkel (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) végeztük optikai minőségű lemezek alkalmazásával, Quantifast ® SYBR zöld PCR készlet használatával (katalógusszám: 204054, Qiagen, Hilden, Németország). A primerek szekvenciáját a 3. táblázat mutatja be. Ebben a vizsgálatban β-aktint [23], PPARα, PPARγ és SCD [24] alkalmaztunk.

A vizsgált gének normalizálásához referencia génként a β-aktint használtuk. Az összes láncindítót az 1. BASE oligonukleotid szintézissel (1. bázis, Szingapúr) vásároltuk. Mindegyik reakció (20 μl) 8,5 μL SYBR zöld PCR keveréket, 1 μl cDNS-t, 1 μL előre és hátra indítót és 8,5 μL RNáz-mentes vizet tartalmazott. A célgéneket a következő hőciklusos programmal amplifikáltuk: 95 ° C 10 ', 40 PCR ciklus 95 ° C hőmérsékleten 30 ", 60 ° C 20" és 72 ° C 20 ". Az olvadási görbe elkészítéséhez minden 15˝-nél fluoreszcenciát mértünk.

Statisztikai analízis

Húsminőség

Az LD izom érlelt (1, 3 és 6 napos) húsának színét az 5. táblázat mutatja be. Az étrendi n-6: n-3 PUFA arány különböző szintjei a post mortem időszakban hatással voltak az L * -ra (könnyedség) ), a * érték (vörösség), b * értékek (sárgaság), az LD izom Chroma és Hue szöge. Az LD izom színe világosabb volt (magasabb L * érték; P 0,05) az a * és b * érték a post mortem periódus ugyanazon napjain. Az LR csoport szignifikánsan csökkentette az LD izom L * értékét 1 nap elteltével és a post mortem periódus növekedésével a HR csoporthoz képest. A kromatográfia vagy a telítettség értéke szignifikánsan (P 0,05) a post mortem vagy az étrendi kezeléssel minden kezelési csoport esetében.

A húsminták pH-értéke (6. táblázat) a mortem utáni 1., 3. és 6. napon minden csoportban hasonló volt (P> 0,05). Az LD-izom cseppvesztésének százalékos aránya a különböző post-mortem periódusokban szignifikánsan (P 0,05) alacsonyabb volt, mint a különböző post-mortem periódusban alkalmazott egyéb kezelések. Az öregedési periódus szignifikánsan (P 1. ábra. Az étrendi n-6: n-3 PUFA arányok hatása a kecskék longissimus dorsi lipid oxidációjára.

LR: alacsony n-6: n-3 PUFA arány (2,27: 1); MR: közepes n-6: n-3 PUFA arány (5,01: 1); HR: magas n-6: n-3 PUFA arány (10,38: 1). A függőleges sávok szokásos hiba. x és y szignifikáns különbséget jelöl a post mortem után; az a, b és c szignifikáns különbséget jelölnek a post mortem napok között.

Az étrendi n-6: n-3 PUFA arányának hatása a kísérleti étrend és a longissimus dorsi szövet FA tartalmára

A PPARα, PPARγ és SCD gének expressziója a longissimus dorsi izomban

A 2., 3. és 4. ábra mutatja a relatív génexpressziót a változó étrendi n-6: n-3 PUFA arányban táplált kecskék LD izomában. A PPARα gén magasabb szintű expressziót mutatott az LR csoportban a HR csoporthoz képest (P 2. ábra. A PPARα expressziója a kezelt csoportok LD izomában a HR csoporthoz képest.

Az értékeket háztartási génnel, β-aktinnal normalizáltuk. Ezután a kezelt mintákat expresszáltuk a HR csoport gén expressziójához viszonyítva. Az értékek átlag ± 1 standard hibasávot jelentenek. A * -gal jelölt értékek szignifikáns különbséget mutatnak a HR csoporthoz képest (P 3. ábra. A PPARγ expressziója a kezelt csoportok LD izomában a HR csoporthoz képest.

Az értékeket háztartási génnel, β-aktinnal normalizáltuk. Ezután a kezelt mintákat expresszáltuk a HR csoport gén expressziójához viszonyítva. Az értékek átlag ± 1 standard hibasávot jelentenek. A * -gal jelölt értékek szignifikáns különbséget mutatnak a HR csoporthoz képest (P 4. ábra. SCD expressziója a kezelt csoportok LD izomában a HR csoporthoz képest.