Változások az étrendi zsírbevitel megváltoztatásában az oxidált kis sűrűségű lipoprotein és a lipoprotein plazmaszintjeiben (a)

Oulu Belgyógyászati és Biocenter Osztályától (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Oulu Egyetem, Oulu, Finnország; a Nemzeti Közegészségügyi Intézet (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finnország; és az Orvostudományi Tanszék (J.L.W.), Kaliforniai Egyetem, San Diego, La Jolla, Kalifornia.

Oulu Belgyógyászati és Biocenter Tanszékétől (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Oulu Egyetem, Oulu, Finnország; a Nemzeti Közegészségügyi Intézet (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finnország; és az Orvostudományi Tanszék (J.L.W.), Kaliforniai Egyetem, San Diego, La Jolla, Kalifornia.

Ön a cikk legfrissebb verzióját nézi. Előző verziók:

Absztrakt

Célkitűzés- Az étrendi módosítások hatásának értékelése az oxidált kis sűrűségű lipoproteinre (LDL).

Hatalmas érdeklődés mutatkozott olyan farmakológiai szerek és antioxidánsok iránt, amelyek in vivo 7–9 csökkentik az LDL oxidációt és csökkentik az érelmeszesedést. 10 Az embereken, elsősorban az E-vitaminnal kapcsolatos adatok azonban csalódást okoztak, bár ennek okait nemrégiben tárgyalták. 11 Az érdeklődés középpontjában a nem farmakológiai szerek és az antioxidánsok, például a természetes ételek, valamint azok képessége áll, hogy befolyásolják az LDL oxidációját. 12,13 A teljes gyümölcs- és zöldségfogyasztás étrendnek az LDL oxidációjára gyakorolt hatásaira vonatkozó adatok korlátozottak és ellentmondásosak. 14–16

Jelen tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy a zsír, zöldség, bogyó és gyümölcs étrendi bevitelének változásai hogyan befolyásolták az antioxidánsok és az OxLDL plazmaszintjét. Két étrendet hajtottunk végre, két étrenddel, mindkettő alacsony az összes étkezési zsírban, de az egyikben kevés volt a zöldség, a másikban pedig sok volt a zöldség, a bogyós gyümölcs és a gyümölcs, hogy kiderítsük, hogy a természetes antioxidánsok magas bevitele befolyásolja-e OxLDL.

Mód

Tárgyak

86 nőt kérdeztünk meg és vizsgáltunk meg, akik közül 37 egészséges önkéntest választottak ki és fejezték be a vizsgálatot. A felvételi kritériumok a következők voltak: (1) testtömeg-index (BMI) 20–29 kg/m 2; (2) 3,7-6,2 mmol/l vércukorszint; (3) plazma koleszterin

1.ábra. A tanulmány megtervezése.

Fogyókúrák

Plazma lipidek és lipoproteinek (a)

A teljes plazma triacil-glicerin- és koleszterin-koncentrációt enzimatikusan határoztuk meg Specifikus Klinikai Kémiai Elemzővel (Boehringer Mannheim, GmbH, Németország). A nagy sűrűségű lipoprotein (HDL) koleszterinszintjének mérésére a plazma heparin – mangán-kloridos kicsapását használtuk. 18 Az LDL-koleszterin-koncentrációt Friedewald-képlettel számoltuk. 19 A plazma Lp (a) koncentrációit kereskedelmi enzimmel kapcsolt immunszorbens módszerrel (Biopool Ltd) határoztuk meg a gyártás utasításai szerint.

Autoantitestek oxidált LDL-hez

A réz OxLDL-hez (CuOx-LDL) kötődő IgM és IgG autoantitestek szintjét plazmamintákban kemilumineszcencia-alapú ELISA-val határoztuk meg. 20 CuOx-LDL keletkezett a leírtak szerint. 3 antigént adtunk hozzá 10 μg/ml koncentrációban PBS-EDTA-ban (PBS 0,27 mmol/l EDTA-val, pH 7,5), és egy éjszakán át inkubáltuk 4 ° C-on. A plazmamintákat 1: 1000-ig hígítottuk IgM-hez és 1: 500-ig IgG-hez, és a megkötött immunglobulin mennyiségét alkalikus foszfatázzal jelölt kecske anti-humán IgM-mel (Sigma) vagy kecske anti-humán IgG-vel (Sigma) hígítottuk Lumi-Phos 530 alkalmazásával. (Lumigen) mint szubsztrát. A lumineszcenciát Victor 2 luminométerrel (Wallac, PerkinElmer) határoztuk meg.

Érzékeny CRP

Két különböző monoklonális egér anti-humán CRP antitestet (HyTest Ltd) és tisztított humán CRP-t (HyTest Ltd) alkalmaztunk az érzékeny CRP mérésére. Röviden: anti-humán CRP antitestet 2 μg/ml koncentrációval PBS pufferben éjszakán át 4 ° C-on bevonunk. A plazmamintákat 1: 2000 arányban hígítottuk, és a megkötött CRP mennyiségét biotinilezett anti-humán CRP antitesttel detektáltuk. Minden vizsgálathoz egy kereskedelmi kontroll CRP mintát (Roche) vontunk be.

Oxidált LDL

A plazmában oxidált LDL mérésére szendvics kemilumineszcens immunvizsgálatot használtunk, jól ismert egér monoklonális EO6 antitesttel, amely specifikusan kötődik az oxidált foszfolipidekhez. 20,21 Először monoklonális anti-apolipoprotein B-100 antitestet (MB47) szélesztettünk 5 μg/ml koncentrációval egy éjszakán át 4 ° C-on. A plazmamintákat 1:50 arányban hígítottuk, és az oxidált foszfolipid epitópok mennyiségét biotinilezett EO6 antitesttel mértük. A párhuzamos üregekben a megkötött LDL mennyiségét poliklonális biotinilezett anti-apoB antitesttel detektáltuk. Az eredményeket a megkötött EO6 mennyiségének és a lyukakba kötött anti-apoB mennyiségének a hányadosaként adjuk meg, így megkapjuk az EO6/apoB-100 (OxLDL-EO6) által detektált oxidált foszfolipid relatív mennyiségét. Ez a mérés normalizálja az apoB-100 részecskénkénti oxidált foszfolipidtartalmat.

Plazma tokoferolok, karotinoidok és C-vitamin elemzése

A 22 tokoferolok és 23 karotinoidok plazmakoncentrációit HPLC-vel elemeztük. Az összes aszkorbinsavat automatizált fluorometriai módszerrel határoztuk meg ortofenilén-diamin alkalmazásával. Ehhez a méréshez 4,5 ml 5% -os metafoszforsavat adtunk 0,5 ml plazmához a vénaszúrás után 1 órán belül, és -70 ° C-on tároltuk.

Diétás elemzések

A kiindulási étrend-bevitelt a finn tápanyag-adatbázis alapján a Nutrica szoftverrel (Társadalombiztosítási Intézet, Helsinki, Finnország) használt 4 napos táplálékrekordok alapján számoltuk. Az intervenciós étrendek tápanyagtartalmát a Finn Agrárkutatási Központban elemeztük. Mindkét étrend táplálékrészeit a beavatkozás során naponta összegyűjtöttük egy energia szinten (7,5 MJ), és elemzésig -20 ° C-on tároltuk. Az elemzés előtt a mintákat felolvasztották és egyesítették az egyes diétás időszakokhoz. Az elemzés teljes energiát, összes zsírt, szénhidrátot, rostot, zsírsavakat, 25 étkezési koleszterint, káliumot, nátriumot, kalciumot, vasat, α-karotint, 26 β-karotint, 26 aszkorbinsavat (C-vitamin), 27 és α-tokoferolt tartalmazott. . 28.

Statisztikai elemzések

Az eloszlások ferdeségének tesztelésére Saphiro-Wilk tesztet alkalmaztunk. A plazma karotinoidok, trigliceridek, OxLDL-EO6, érzékeny CRP és Lp (a) nem voltak normálisan eloszlva; ezért nem paraméteres teszteket alkalmaztunk. A különbségeket először Friedman-teszttel tesztelték ismételt mérésekhez, majd Wilcoxon aláírt rangtesztjével. A változókat a mediánban fejezzük ki, a legalacsonyabb és legmagasabb kvartilisekkel. A normál eloszlású összes koleszterint, LDL-koleszterint, HDL-koleszterint, C-vitamint és E-vitamint Student tesztelte t tesztben, és átlag ± SD-ként fejezzük ki. A korrelációkat Spearman és Pearson korrelációs együtthatókkal határoztuk meg. Az összes különbséget szignifikánsnak tekintették 5% -os szinten. A statisztikai elemzések során az SPSS számítógépes programot (9.0; SPSS Inc) használtuk.

Eredmények

A diéták tápanyagtartalma

A kiindulási étrend és a vizsgált étrend közötti fő különbségek az étkezési zsír mennyiségében és minőségében, valamint az elfogyasztott zöldségek, bogyók és gyümölcs mennyiségében mutatkoztak. Mindkét vizsgálati étrend teljes zsírtartalma alacsonyabb volt, mint az alap diéta (táblázat). Ezenkívül az étrendi zsír minőségében enyhe változások történtek az étrendi időszakok között. A telített zsírsavak (SAFA) és az egyszeresen telítetlen zsírsavak mennyisége mindkét vizsgálati étrendben alacsonyabb volt, mint az alanyok étrendjében. A többszörösen telítetlen zsírsavak (PUFA) mennyisége nőtt, különösen az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrendre reagálva (táblázat).

A nők átlagos napi tápanyag-bevitele (n = 37) a kiindulási időszakban és a vizsgálati étrend átlagos tápanyagtartalma

Testtömeg-index

Az alanyok átlagos BMI-értéke a kiinduláskor 23,7 ± 2,2 kg/m 2 volt. Az alacsony zsírtartalmú, alacsony zöldségtartalmú étrend és az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrend végén az alanyok átlagos BMI-je 23,3 ± 3,2 kg/m 2, illetve 23,3 ± 3,3 kg/m 2 volt.

Plazma lipidek

A plazma teljes koleszterin- és trigliceridszint, valamint a HDL-koleszterinszint kissé csökkent az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrend hatására (2. ábra). Érdekes módon az alacsony zsírtartalmú, alacsony zöldségtartalmú étrend nem befolyásolta a teljes koleszterinszintet, de csökkentette a plazma teljes triglicerid- és HDL-koleszterinszintjét.

2. ábra. Az összes, HDL és LDL koleszterin és triglicerid plazmakoncentrációi az összes vizsgált alanynál (n = 37) a vizsgálati diéták alatt. A Tot-Chol az összes koleszterinszintet jelzi; TG, trigliceridek; HDL-Chol, HDL-koleszterin; LDL-Chol, LDL-koleszterin. *P

Plazma antioxidáns szintek

Számos antioxidáns plazmaszintje emelkedett az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrendre adott válaszként (3. ábra). Az α-karotin, β-karotin, β-kriptoxantin és a lutein-zeaxantin plazmaszintje> 2-szeresére nőtt az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrend során az alap diétához képest (3. ábra). Az alacsony zsírtartalmú, alacsony zöldségtartalmú étrend ugyanakkora mennyiségű antioxidánst tartalmazott, mint az alanyok mindennapi étrendjében; ezért kevesebb változás történt a plazma antioxidáns szintjében az alapszint és az alacsony zsírtartalmú, alacsony zöldségtartalmú étrend között.

3. ábra. A karotinoidok, a C-vitamin és az alfa-tokoferol plazmakoncentrációi az összes vizsgált alanynál (n = 37) a vizsgálati diéták alatt. Az értékek átlag ± SD. *P

A kiinduláskor a plazma lutein – zeaxantin koncentrációja korrelált a plazma OxLDL-rel (r= 0,44, P 20,21 Monoklonális EO6 detektáló oxidált foszfolipid epitópokat használtunk annak felmérésére, hogy a vizsgálati étrendek befolyásolják-e az alanyok apoB-100 részecskéiben az oxidált epitópok mennyiségét. A kiindulási szinthez képest a plazma medián plazma OxLDL-EO6 27% -kal nőtt (Q1, Q4: −14, 67) (P

4. ábra. Az oxidált LDL (balra) és a lipoprotein (a) (jobbra) plazmakoncentrációinak relatív medián változása az összes vizsgálati alanynál (n = 37) a kiindulási értéktől az alacsony zsírtartalmú, alacsony zöldségtartalmú étrendig és az alapvonaltól az alacsony zsírtartalmú étrendig, magas zöldségtartalmú étrend.

Az LDL oxidatív érzékenységét befolyásoló tényezőket kereső tanulmányok másik sora azok voltak, akik az étrendi zsírokat vizsgálják. A magas SAFA-tartalmú étrendekről ismert, hogy növelik a plazma teljes koleszterinszintjét, míg a magas PUFA-tartalmú étrendeknek leginkább kedvező hatásuk van a plazma lipidprofiljaira: az össz- és az LDL-koleszterinszint csökkenése, valamint a HDL-koleszterinszint csökkenése is. Például, amikor a linolsav az étrendben felváltja a SAFA-t, az csökkenti a szérum koleszterinszintjét. 35 A telítetlen zsír lipidprofilokra gyakorolt kedvező hatása ellenére aggodalomra ad okot, hogy az ilyen étrendek növelhetik az LDL oxidatív hajlamát az oxidációra, és ezáltal néhány kardioprotektív hatásukat semlegesítik. Korábbi tanulmányok azt mutatják, hogy a magas linolsavtartalmú étrendek linolsavval dúsított LDL-részecskékhez vezetnek, amelyekről azt gondolják, hogy hajlamosabbak a lipidperoxidációra és egyben aterogénebbek is. Vizsgálatunk során, amikor az alanyok a vizsgálati étrendet fogyasztották, az összes zsír bevitele csökkent és az SAFA-t részben a PUFA-val helyettesítették az alap diétához képest. A PUFA mennyisége különösen nőtt az alacsony zsírtartalmú, magas zöldségtartalmú étrendre adott válaszként.

Továbbra is fennáll a kérdés, hogy az Lp (a) szint miért emelkedett az étrendi változásokra reagálva. Az Lp (a) alapszintjeit elsősorban genetikailag határozzák meg, de egyes adatok arra utalnak, hogy az Lp (a) bizonyos helyzetekben akut fázisú reagensként működhet. Egy korábbi tanulmányban azt találták, hogy a magas SAFA-tartalmú étrend körülbelül 10% -kal alacsonyabb plazma Lp (a) -koncentrációt produkál, mint a magas olajsav- vagy transz-zsírsavtartalmú étrend. 41 Ez a megfigyelés összhangban áll tanulmányunkkal abban, hogy mindkét étrend alacsonyabb SAFA-értékhez és következésképpen megnövekedett Lp (a) -hoz vezetett.

Összegzésként megállapítottuk, hogy a hagyományosan antiaterogénnek tekintett étrend (alacsony a telített zsírtartalom, a magas a többszörösen telítetlen zsír és a természetben előforduló antioxidánsok szintje) növelte a keringő oxidált LDL és Lp (a) plazmaszintjét. Meg kell még oldani azt a kérdést, hogy a jelen tanulmányban megfigyelt változások valóban pro-atherogén vagy antiaterogén-e?.