Határok az immunológiában

Sclerosis multiplex és neuroimmunológia

Szerkesztette
Jens Geginat

Milánói Egyetem, Olaszország

Felülvizsgálta
Maria Cecilia Giron

Padovai Egyetem, Olaszország

Markus Kleinewietfeld

VIB-UGent Gyulladáskutató Központ (IRC), Belgium

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

modulációjának

  • Cikk letöltése
    • PDF letöltése
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Kiegészítő
      Anyag
  • Exportálás
    • EndNote
    • Referencia menedzser
    • Egyszerű TEXT fájl
    • BibTex
OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

  • 1 Molekuláris orvostudományi és biotechnológiai laboratórium, Don Gnocchi Alapítvány, IRCCS, Milánó, Olaszország
  • 2 Neurológiai Tanszék, Don Gnocchi Alapítvány, IRCCS, Milánó, Olaszország
  • 3 Biotechnológiai Tanszék, Veronai Egyetem, Verona, Olaszország
  • 4 Fiziopatológiai és Transzplantációs Tanszék, Milánói Egyetem, Milánó, Olaszország

Bevezetés

Mivel az étrend alapvető szerepet játszik a bél mikrobiomjának kialakításában (30), és a magas rosttartalmú bevitelt összefüggésbe hozták az egészségügyi előnyökkel a rost hatásának következményeként a bél mikrobiotán (31), amely valószínűleg az immunválasz modulációját eredményezi, feltételeztük, hogy az SM betegség aktivitását befolyásolhatják az étrendi szokások. Ebben a kísérleti tanulmányban igazoltuk ezt a hipotézist az immunindexek, a klinikai paraméterek és a bél mikrobiota elemzésével az SM-betegek két csoportjában, akik a toborzás idején már két különböző étrend-rendszert követtek: egy „nyugati étrendet” (WD) és egy magas -zöldség/alacsony fehérjetartalmú étrend (HV/LP diéta).

Anyagok és metódusok

A vizsgálatba beiratkozott egyének

Azokat a betegeket, akiknél a relapszáló-remissziós (RR) SM diagnózisát a milánói Don Carlo Gnocchi Alapítvány Multiplex Sclerosis Rehabilitációs Egysége követi, 2016 májusa és októbere között önkéntes alapon bevonták e kísérleti vizsgálatba. Nevezetesen, ez az egység diétás tanácsokat kínál a betegek számára, amelyeket hivatásos táplálkozási szakemberek nyújtanak. A felvételi kritériumok az életkor> 18 év és a betegség stabilitása volt> 6 hónapig a beiratkozás előtt. A fő kizárási kritériumok a következők voltak: (1) a betegséget módosító kezelés (DMD) alkalmazása a beiratkozás előtt> 6 hónapig; (2) immunszuppresszánsok vagy teriflunomid alkalmazása a klinikai történelemben; (3) jelentős társbetegségek, például artériás hipertónia, agyi érrendszeri rendellenességek, szív- vagy tüdőbetegségek, cukorbetegség, endokrin, gyomor-bélrendszeri vagy pszichiátriai betegségek. A nem, a betegség időtartama és a fogyatékosság szintje a Kurtzke kibővített fogyatékosság státus skála (EDSS) alapján értékelve, a relapszus gyakoriságát és más neurológiai indexeket nem használták befogadási/kizárási kritériumként, hanem az első neurológiai vizsgálat során rögzítették.

A vizsgálati protokollt a Don Carlo Gnocchi Alapítvány etikai bizottsága jóváhagyta, és az összes beiratkozott beteg megalapozott beleegyezést írt alá.

Vérmintagyűjtés és sejtszeparálás

A beiratkozáskor a teljes vért (10 ml) etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) tartalmazó vakutainer csövekbe gyűjtöttük (Becton Dickinson & Co., Rutherford, NJ, USA). A perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC) elválasztottuk limfolit szeparációs táptalajon (Cedarlane, Hornby, Ontario, CA, USA), és kétszer mostuk PBS-ben 1500 fordulat/perc sebességgel 10 percig; az életképes leukocitákat Scepter 2.0 kézi automatizált sejtszámlálóval (Millipore, Billerica, MA, USA) határoztuk meg.

Intracelluláris citokin vagy transzkripciós faktor festése PBMC-ben

Áramlási-citometriás elemzés

A perifériás vér mononukleáris sejtjeit Beckman-Coulter GALLIOS áramlási citométer alkalmazásával 488 nm-en működő 22 mW kék szilárdtest dióda lézerrel és 638 nm hullámhosszon működő 25 mW vörös szilárd állapotú dióda lézerrel szereltük fel, és a Kaluza elemző szoftverrel összekötve. Kétszázezer sejtet nyertek és kaptak a limfocita és a monocita FSC és SSC tulajdonságai alapján. A színkompenzációhoz izotípus kontrollt vagy egyszeres fluorokrómmal festett készítményeket használtunk.

Mikrobiom elemzések

A beiratkozáskor a résztvevőket arra kérték, hogy az első reggeli székletüket otthon gyűjtsék össze megfelelő székletgyűjtő edény használatával (Biosigma, VE, OLASZORSZÁG). A mintákat 1 órán belül jégcsomagokon szállították a milánói Don Carlo Gnocchi Alapítvány laboratóriumába, ahol azonnal -80 ° C-on tárolták őket. Végül a tárolt összes székletmintát szárazjégre juttatta a FedEx a feldolgozó létesítménybe (Second Genome Inc., San Francisco, CA, USA).

Ami az alfa-diverzitást illeti (a mintadiverzitáson belül), a megfigyelt diverzitás (az egyedi OTU száma) és a Shannon-index (amely a minta gazdagságát és a jelenlegi OTU-k relatív bőségét használja fel a diverzitás index kiszámításához) voltak az alkalmazott mérőszámok.

Meghatároztuk a minták közötti különbségeket (béta változatosság) is. Valamennyi profilt páronként hasonlítjuk össze, hogy meghatározzuk az eltérés pontszámát és a távolság különbség mátrixában tároljuk. A távolságfüggvények alacsony különbségeket eredményeznek a hasonló minták összehasonlításakor. A bőséggel súlyozott mintapár-különbségeket a Bray – Curtis-féle különbségek (a számlált összesített abszolút különbségek és a két minta bőségének összegének aránya) alkalmazásával számoltuk (33). A bináris eltérés értékeit a Jaccard-indexgel számoltuk (metrika összehasonlítja az eltérések, azaz az egyikben jelen lévő, de a másikban hiányzó OTU-k számát két mintában, a legalább az egyik mintában jelenlévő OTU-k számával) (34 ).

A teljes mikrobiom szignifikancia tesztet a permutációs varianciaanalízissel (PERMANOVA) végeztük, amelyet a diszkrét kategorikus vagy folytonos változók közötti szignifikáns különbségek megállapítására használtunk. A differenciálisan bőséges taxonok azonosításához Wilcoxon Rank Sum tesztet alkalmaztunk. o Az értékeket Benjamini – Hochberg eljárással állítottuk be, hogy a többszörös tesztelés során ellenőrizzük a hamis felfedezési arányokat. A laboratóriumi módszerekkel és a bioinformatikai elemzésekkel kapcsolatos további információkért lásd a Kiegészítő anyag S1 adatlapját.

Statisztikai analízis

A kvantitatív adatokat nem osztották el normálisan (Shapiro – Wilk teszt), ezért medián és interkvartilis tartományként (IQR; 25 ° és 75 ° percentilis) foglalják össze. Két MS csoport összehasonlítását kétfarkú Mann – Whitney segítségével végeztük U független mintákon végzett vizsgálat. Az immunológiai paraméterek és a mikrobiota adatok közötti statisztikai összefüggéseket Spearman-korrelációs együttható és 95% -os konfidenciahatárok segítségével vizsgáltuk Fisher's Z átalakítás. A top 8 leggyakoribb taxonómiai családot Kruskal – Wallis (KW) rangösszeg teszt segítségével hasonlítottuk össze. x 2 tesztet alkalmaztunk a betegek relapszusának összehasonlításához. A statisztikai szignifikanciát a o-érték Kulcsszavak: sclerosis multiplex, diéta, mikrobiom, citokin, gyulladás, dysbiosis, immunológia

Idézet: Saresella M, Mendozzi L, Rossi V, Mazzali F, Piancone F, LaRosa F, Marventano I, Caputo D, Felis GE és Clerici M (2017) A bélmikrobiom diéta modulációjának immunológiai és klinikai hatása sclerosis multiplexben szenvedő betegeknél: Kísérleti tanulmány. Elülső. Immunol. 8: 1391. doi: 10.3389/fimmu.2017.01391

Beérkezett: 2017. június 22 .; Elfogadva: 2017. október 09 .;
Publikálva: 2017. október 25

Jens Geginat, Istituto Nazionale Genetica Molecolare (INGM), Olaszország

Markus Kleinewietfeld, VIB-UGent Gyulladáskutató Központ, Belgium
Maria Cecilia Giron, Università degli Studi di Padova, Olaszország

† Ezek a szerzők egyformán járultak hozzá ehhez a munkához.