Az aktív frakció hipouricémiás és nephroprotektív hatásai Polyrhachis Vicina Roger A kálium-oxonát által kiváltott hiperurikémiáról patkányokban

Guining Wei és Naihong Chen

frakciójának

Farmakológiai Tanszék, Guangxi Kínai Orvostudományi és Gyógyszerésztudományi Intézet, 20-1 Dongge Rd,

Nanning; Materia Medica Intézet, a Kínai Orvostudományi Akadémia és a Pekingi Unió Orvosi Főiskolája,

1 Xiannongtan Rd, Peking (Kína);

Tel. +867715869102, E-mail [email protected], [email protected]

Kapcsolódó cikkek a következőhöz: "

  • Facebook
  • Polyrhachis Vicina Roger A kálium-oxonát által kiváltott hiperurikémiáról patkányokban - https://www.karger.com/Article/FullText/487675 @KargerPublisher "target =" _ blank "onclick =" javascript: window.open (this.href, '', 'menubar = nem, eszköztár = nem, átméretezhető = igen, gördítősávok = igen, magasság = 400, szélesség = 600 '); return false; "title =" Oldal elküldése "onclick =" ga (' send ',' event ',' FullText ',' Social Media ',' Fix Twitter '); "> Twitter
  • LinkedIn
  • Polyrhachis Vicina Roger A kálium-oxonát által kiváltott hiperurikémiáról patkányokban% 0A% 0A https://www.karger.com/Article/FullText/487675 "onclick =" ga ('send', 'event', 'FullText', 'Social Media', 'Fix Email'); "> Email

Absztrakt

Bevezetés

Anyagok és metódusok

Vegyszerek és reagensek

A kálium-oxonátot és az allopurinolt a Sigma-Aldrich Chemical Company-tól vásároltuk. A SUA, XOD, SCr, BUN, SOD és MDA értékelésére szolgáló kereskedelmi készleteket a Jiancheng Biotechnológiai Intézettől (Nanjing, Kína) szereztük be. Az IL-1β, IL-6 és TNF-a assay ELISA készleteket az R&D Systems-től (Minneapolis, USA) szereztük be. Az URAT1, GLUT9 és OAT1 primer antitesteket a SaiChi Biotech (Peking, Kína) biztosította. A gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenázt (GAPDH) és a nyúl elleni IgG antitesteket a Jingmei Biotech-től (Shanghai, Kína) szereztük be. Az összes többi reagens standard analitikai minőségű laboratóriumi reagens volt, és helyben vásárolták őket.

Állatok

Felnőtt hím Sprague-Dawley patkányokat (200–250 g) és KM egereket (18–22 g) a Guangdongi Gyógyszerészeti Egyetem Kísérleti Állatainak Központja szállított és standard körülmények között (12 órás fény/sötét ciklus; 22 ± 1 ° C környezeti hőmérséklet; és 55 ± 10% relatív páratartalom), szabad hozzáféréssel az élelmiszerekhez és a vízhez. Valamennyi kísérleti eljárás összhangban volt a Nemzeti Egészségügyi Intézettel a laboratóriumi állatok gondozásában és felhasználásában, és a Guangdongi Gyógyszerészeti Egyetem Állatgondozási Bizottságának jóváhagyását kapta.

Az AFPR elkészítése

Szárított Polyrhachis vicina Rogers a kínai materia medica helyi forgalmazója biztosította Nanning városában (Guangxi, Kína). Az utalványmintát (PR-201505) Xianbiao Zeng professzor azonosította a Guangxi Kínai Orvostudományi és Gyógyszerésztudományi Intézetből, és letétbe helyezték a Guangxi Kínai Orvostudományi és Gyógyszerésztudományi Intézet Herbáriumában. Szárított Polyrhachis vicina Rogers (1000 g) őröltünk és háromszor extraháltunk 10 liter etanol/víz (95: 5, v/v) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) reflux rendszerben (mindegyik extrakció 1 órán át). . Az extraktumokat egyesítettük, leszűrtük, majd 75 ± 5 ° C-os vízfürdővel nyers vizes etanol-kivonatot (CAE) kaptunk. A CAE-t háromszor extraháltuk petroléterrel (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA). Az extraktumokat egyesítettük és leszűrtük, majd 75 ± 5 ° C hőmérsékletű vízfürdővel követtük az aktív frakciót (AFPR), a szárított tömeg 3,96% -a volt. Polyrhachis vicina Rogers (tömeg/tömeg). A GC-MS elemzés azt mutatta, hogy a telítetlen zsírsavak a fő komponensek 71,14% -át, 60,77% oktadecénsavat, 9,31% heptadecénsavat és 1,06% leinolsavat tartalmaznak, a telített zsírsavak pedig az AFPR komponenseinek 25,04% -át [44].

Gyógyszerek és tesztoldatok készítése

Az allopurinol (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) oldatot, az AFPR oldatokat és a kálium-oxonát (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) szuszpenziót az egyes csoportok közepes tömegének megfelelően készítettük el. Az allopurinolt és az AFPR-et Tween-80: víz (2: 98) (hordozó) oldatban oldjuk (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA). Kálium-oxonátot készítettünk szuszpenzióban, 0,9% -os NaCl-oldattal.

Akut toxikológiai teszt

Patkányokon akut toxikológiai tesztet hajtottak végre Zheng és mtsai [45] módszerével. módosításokkal. A patkányokat (n = 6 hím/csoport) egyszeri AFPR-adagoknak (285 vagy 2000 mg/testtömeg-kg) vagy hordozóanyagnak (Tween-80: víz (2: 98)) vetettük alá szondával. A toxicitás kimutatására a viselkedési karakterek szuggesztív jelei (beleértve az éberséget, nyugtalanságot, ingerlékenységet, fekvést, hányást és félelmet), a neurológiai profilok (beleértve a spontán aktivitást, görcsöket, járást, vérző nyílásokat és az érintés/fájdalom reakcióit) és az autonóm válaszokat ( beleértve a székletürítést és a vizeletürítést) és/vagy a mortalitást. Gondos megfigyelést hajtottak végre időközönként: 0, 15, 30 és 60 percenként, az első 2 napban 4 óránként, a többi 12 napban pedig 12 óránként. Az ételt és a vizet ad libitum szolgáltatták. Becsülték a kísérleti állatok 50% -ának pusztulásáért felelős dózist (LD50).

Hiperurikémiás patkánymodell létrehozása és gyógyszeradagolás

Jelen tanulmányban a kálium-oxonát által kiváltott hiperurikémia kísérleti modelljét alkalmaztuk Lemos Lima Rde C és munkatársai [46] szerint. módosításokkal. Ötven hím patkányt véletlenszerűen 5 kísérleti csoportba osztottunk (n = 10), amelyeket 1 órán át éheztünk a gyógyszer beadása előtt. Kálium-oxonátot adtak a 2–5. Csoportba tartozó patkányoknak (650 mg/kg, ig) reggel 8: 00-kor, és a gyógyszeres kezeléseket 4 órán keresztül szondával végezték, miután a kálium-oxonátot naponta beadták, egymást követő 12 héten át. Az 1. (normál kontrollcsoport) és a 2. (hiperurikémia modellcsoport) csoportok önmagukban vivőanyagot kaptak. A 3. csoportot allopurinollal (20 mg/kg) kezeltük. A 4. és az 5. csoportot AFPR-rel kezeltük, 15,60, illetve 3,65 mg/testtömeg-kg dózisban.

Vér-, máj- és veseszövetminta gyűjtése

A 28. napon (a 4. hét utolsó napján), az 56. napon (a 8. hét utolsó napján) és a 84. napján (a 12. hét utolsó napján), 1 órával a gyógyszer beadása után vérmintákat vettünk a farokér. Ezeket a mintákat szobahőmérsékleten tartottuk a véralvadásig, majd 5 percig 1500 x g-vel centrifugáltuk. A felülúszókat összegyűjtöttük és 3000 x g-vel 10 percig centrifugáltuk a szérum előállításához. Valamennyi állatnak pentobarbitál-nátriumot adtunk (50 mg/kg, intraperitoneális injekció), majd a 84. napon felöltük. A májmintákat gyorsan jégen boncoltuk, és 9x térfogatú 80 mM nátrium-pirofoszfát-pufferben (pH 7,4) homogenizáltuk. A homogenizátumot 3000 x g sebességgel 10 percig centrifugáltuk, és a felülúszót használtuk az XOD vizsgálathoz. Ezenkívül a vesekérget gyorsan és pontosan elválasztották egy jégtányéron, és -80 ° C-on tartották a fehérje elemzéséhez.

Az SUA meghatározása

A gyógyszer beadását követő 4., 8. és 12. héten mértük a SUA szintet, hogy meghatározzuk az AFPR hiperurikémia modelljének és terápiás hatásainak sikeres megállapítását foszfotungsztinsav módszerrel [47], a gyártó utasításainak megfelelően (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, Kína).

A szérum és a máj XOD aktivitásának mérése

A máj- és végső szérumminták XOD-aktivitását XOD assay kit (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, Kína) segítségével mértük a gyártó utasításainak betartásával.

Az urát transzporterrel kapcsolatos fehérje expresszió elemzése a veseszövetekben

A vese URAT1, GLUT9 és OAT1 vese- és Western blot-analíziseinek kivonását egy korábbi tanulmány szerint [48] módosítottuk. Az alkalmazott primer antitestek (SaiChi Biotech, Peking, Kína) a következők voltak: anti-URAT1 (1: 1000), anti-GLUT9 (1: 1000), anti-OAT1 (1: 1000), anti-GAPDH (1: 1000), ill. Az immunreaktív sávokat Bio-Rad VersaDoc képalkotó rendszerrel 5000-ben Bio-Rad Quantity One szoftverrel (Bio-Rad, Hercules, CA) számszerűsítettük. A Western blot analízishez viszonyított kvantitatív meghatározást a GAPDH mennyiségének normalizálása után számítottuk ki.

A gyulladásgátló citokinek mérése

A szérum IL-1β, IL-6 és TNF-α szinteket ELISA készletekkel (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) mértük, a gyártó utasításainak megfelelően.

Az antioxidáns enzim és a lipidperoxidáció becslése

És a szuperoxid-diszmutáz (SOD) és a malondialdehid (MDA) szintjét a szérumban kolorimetriás módszerrel határoztuk meg a kereskedelemben kapható készletekkel (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, Kína) a gyártók utasításai szerint.

A vesefunkció becslése és a vesetisztológiai elemzés

Az SCr és a BUN szintjét a szérummintákban kolorimetriás módszerrel határoztuk meg a kereskedelemben kapható készletekkel (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, Kína), a gyártók utasításainak megfelelően a hiperurikémia patkányok vesefunkciójának értékelésére. A veseszövet egy részét azonnal rögzítettük 10% -os foszfáttal pufferelt formalinban (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA), rutinszerű szövettani eljárásokkal feldolgoztuk, paraffinba ágyazottuk, 5 μm-es darabokra osztottuk és tárgylemezre helyeztük. A mintákat hematoxilinnal és eozinnal (H&E) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) festettük kórszövettani vizsgálat céljából.