Sabin-Feldman festék teszt

Kapcsolódó kifejezések:

Ellenanyag
Festék
Immunglobulin M
Agglutinációs teszt
Enzimhez kapcsolt immunszorbens assay
Immunglobulin G antitest
Toxoplazmózis
Közvetett fluoreszcens antitest technika

Letöltés PDF formátumban

Erről az oldalról

Pszichomotoros retardáció és regresszió

Gerald M. Fenichel, MD, a klinikai gyermekneurológiában, 2005

Diagnózis.

A Sabin-Feldman festékpróba volt a diagnózis standardja, de az újszülöttek veleszületett toxoplazmózisának diagnosztizálására szolgáló másik hasznos szerológiai teszt egy enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat, amely IgM-specifikus antitestet mutat a Toxoplasma ellen a köldökzsinórvérben. Az IgM-specifikus antitest bemutatása elengedhetetlen az új fertőzés aktív fertőzésének bizonyításához. Az IgG-specifikus antitest az újszülött szérumában az anyától passzív átvitel útján jelenik meg, és nem utal aktív fertőzésre. Az IgG-specifikus antitest perzisztenciája korrelál az aktív fertőzéssel. Idősebb gyermekeknél a diagnózis nemcsak a korábbi fertőzés szerológiai bizonyítékát igényli, hanem kompatibilis klinikai jellemzőket is.

Toxoplazmózis

Sabin-Feldman festék teszt

A Sabin-Feldman festékteszt azon a megfigyelésen alapul, hogy amikor az élő szervezeteket (például az egerek peritoneális váladékából) normál szérummal inkubáljuk, duzzadnak és mélykékre festenek, ha metilénkéket adnak a szuszpenzióhoz [10]. Az antitestet tartalmazó szérumnak kitett paraziták ugyanolyan körülmények között vékonynak és torznak tűnnek, és a festék hozzáadásakor nem festődnek. Ennek oka az élőlények lízise [615]. A membrán megszakad a komplement rendszer aktiválása miatt [616]. A jelentett titer az a szérumhígítás, amelynél az élőlények fele nem pusztul el (festődik), a másik fele pedig elpusztul (nem festett). (A folt nem szükséges. A lizálatlan és a nem immunizált szervezetek megkülönböztetése könnyen elvégezhető fázismikroszkóppal.) Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) azt javasolta, hogy a legtöbb szerológiai vizsgálatban a titrokat NE/ml szérumban fejezzék ki, összehasonlítva egy nemzetközi standard referenciaszérum, amely a WHO kérésére rendelkezésre áll [617].

Paraziták és gombák

Steven R. Binder, Patrice D. Sarfati, The Immunoassay Handbook (negyedik kiadás), 2013

Diagnózis és vizsgálati technológia

A toxoplazmózis diagnosztizálásakor alkalmazott klasszikus szerológiai referencia-vizsgálat a Sabin-Feldman festékteszt. A megerősítéshez használt referencia teszt a differenciál agglutinációs teszt, amely összehasonlítja a formalinban rögzített és az acetonnal rögzített tachyzoitákkal kapott eredményeket; ezt a módszert HS/AC tesztnek is nevezik. Ez a két teszt életképes tachyzoiták forrását és magas szintű technikai szakértelmet igényel. Ma csak speciális laboratóriumok kínálják őket, de gyakran alkalmazzák őket az Egyesült Államokban az anyai fertőzések kivizsgálására.

A legtöbb laboratóriumban a szűrést érzékeny és specifikus ELISA tesztekkel végzik mind az IgM, mind az IgG antitestekre. Az anyai fertőzések vizsgálatakor elengedhetetlen a közelmúlt és a korábbi fertőzések megkülönböztetése. Önmagában a pozitív IgM nem használható az akut fertőzés bizonyítékaként, mivel az IgM clearance-e sok személynél lassú lehet (több hónapig vagy tovább).

Számos lehetőség áll rendelkezésre a fertőzés lefolyásának dátumozására. Az Egyesült Államokon kívül az aviditási index meghatározása az IgG jel mérésével denaturáló szer, például karbamid, SDS vagy etanol-amin jelenlétében és távollétében történik. Az aviditási index kiszámítása a következőképpen történik:

Az 50% -os vagy annál magasabb aviditási indexek magas aviditási indexeknek számítanak, és összhangban vannak a korábbi fertőzésekkel, míg a 35% -os vagy annál kevesebb indexek akut fertőzésre utalnak; A határértékek kismértékben különböznek több kereskedelmi beszállító között. Az IgG aviditás azonban különböző nőknél különböző ütemben alakulhat ki, és sok nő ad határértéket, ezért az aviditás tesztet csak arra kell használni, hogy zárja ki megelőző 3-4 hónapban. Egy 2009-es összehasonlító tanulmány csak mérsékelt egyetértést mutatott e módszerek között; ez tükrözheti azt a tényt, hogy a nők közül sokan nemrég fertőződtek meg. A második aviditási teszt vagy az immunblotolás további bizonyosságot nyújthat a korábbi fertőzéssel szemben. A PCR-t manapság leggyakrabban az aktív fertőzés megállapítására használják, amikor az aviditási teszt nem meggyőző.

Orvosi retina

Douglas A. Jabs, Quan Dong Nguyen, Retina (negyedik kiadás), 2006

Szerológiai vizsgálatok a Toxoplasma elleni antitestek kimutatására

Számos szerológiai teszt bizonyíthatja a Toxoplasma elleni antitestek jelenlétét, beleértve a Sabin – Feldman festéktesztet, az indirekt fluoreszcens antitest tesztet, az indirekt hemagglutinációs tesztet, a komplement rögzítési tesztet és az enzimmel kapcsolt immunszorbens assay (ELISA) tesztet. Közvetett fluoreszcens antitesteket és ELISA teszteket használnak most leggyakrabban. Mivel azonban a Toxoplasma elleni antitestek gyakorisága bizonyos közösségekben magas, és mivel a magas titerű antitestek évekig fennmaradhatnak egyébként egészséges emberekben, e tesztek értelmezése gyakran nehézségekkel jár. 83 Emberekben a Toxoplasma elleni antitestek elleni szeropozitivitás gyakorisága az életkor előrehaladtával növekszik. Az olyan országokban, mint Franciaország, az anti-Toxoplasma antitestek előfordulása az élet negyedik évtizedére meghaladja a 90% -ot, és az Egyesült Államokban a becslések szerint az egészséges felnőttek 20-70% -a korábban fertőzött volt toxoplazmózisban.

A szem toxoplazmózisában a toxoplazmózis elleni IgG antitest alacsony titerje szokásos. Ha a klinikai elváltozás a toxoplazmózisra jellemző, és a szerológiai titer pozitív, a Toxoplasma chorioretinitis diagnózisa általában magabiztosan végezhető. Ha a retina elváltozása atipikus és a szerológia pozitív, a Toxoplasma chorioretinitis diagnózisa csak feltételezhető, az antitestek általános előfordulása miatt magas. 7

Toxoplazmózis vad- és háziállatoknál

David S. Lindsay, Jitender P. Dubey, Toxoplasma Gondii (második kiadás), 2014

6.2.10 Rovarevők

A toxoplazmózisról rovarevőknél keveset tudnak. A Sabin – Feldman festékteszt alkalmazásával a T. gondii elterjedtsége kevesebb mint 1% volt 578 cseh rovarevőnél (Hejlicek et al., 1997). Végzetes toxoplazmózist diagnosztizáltak egy fiatal fiatalkorú hím anyajegyben (Talpa europaea), Németországból (Geisel et al., 1995). A hollandiai ökológiai sertéstelepek 22 fehérfogú szarvasmarhájának (Crocidura russula) három agya és/vagy szíve pozitív volt T. gondii szempontjából PCR-rel (Kijlstra et al., 2008). A hollandiai ökológiai sertéstenyésztők egy másik tanulmányában kilenc közönséges (Sorex araneus) és 102 fehérfogú (Crocidura russula) két (2%) agya egyik sem volt pozitív PCR-vizsgálattal T. gondii (Meerburg) esetében. és mtsai., 2012). Két németországi mediterrán vízilabda (Neomys anomalus) egyike sem volt pozitív szerológiai vagy PCR-vizsgálattal (Herrmann et al., 2012).

Vírusos, protozoon és kapcsolódó koponyaűri fertőzések

Szerológiai vizsgálatok.

A Toxoplasma gondii okozta szembetegség

5.3 Epidemiológia

A huszadik század közepe előtt a T. gondii-t széles körben nem ismerik el általában a szembetegség vagy a chorioretinalis elváltozások okozójaként. A Sabin – Feldman festékvizsgálat (Sabin, 1948) bevezetésével nyilvánvalóvá vált, hogy a Toxoplasma fertőzés nemcsak széles körben elterjedt, hanem jórészt tünetmentes. A szeroprevalencia a különböző országokban, földrajzi területeken és etnikai hátterek között igen eltérő: az USA-ban a felnőttek 22,5% -a (Jones et al., 2001a) és Panama 90% -a (Sousa et al., 1988) szeropozitív antitestek a Toxoplasma ellen. Alabama (Maetz et al., 1987) és Maryland (Smith és Ganley, 1972) lakosainak legalább 0,6% -ának van korioretinalis hege, amely összhangban áll a korábbi Toxoplasma chorioretinitis-vel. Az elváltozások csoportosulása nélkül nem ismert, hogy egy adott pigmentáris elváltozás normális variáns-e vagy másodlagos-e a Toxoplasma fertőzés miatt. A legújabb tanulmányok azt sugallják, hogy míg a hátsó uveitis fő oka továbbra is a T. gondii, a szerzett betegség gyakrabban fordul elő, mint veleszületett fertőzés (Gilbert és Stanford, 2000).

Úgy tűnik, hogy a veleszületett toxoplazmózis jelenti a szisztémás fertőzés legnagyobb kockázatát a szemelváltozások kialakulásában. Az intrauterin fertőzés okozta retinochoroiditis kockázata a korai gyermekkorban 20%, serdülőkorban pedig akár 80% -ra is emelkedhet. Becslések szerint az okuláris toxoplazmózis veleszületett fertőzése évente 3000, az Egyesült Államokban született csecsemőt érint, amelynek éves költsége évente 400 és 8,8 milliárd dollár között mozog (Roberts és Frenkel, 1990; Roberts et al., 1994; Wilson és Remington, 1980). A Toxoplasma chorioretinitis a veleszületett Toxoplasma fertőzésben szenvedő betegek 70-90% -ában fordul elő, és ez a betegség leggyakoribb megnyilvánulása (Alford et al., 1974). Noha a veleszületetten fertőzött csecsemők 85% -a normálisnak tűnik a születéskor, a vizsgálatok azt mutatják, hogy ha ezeket a betegeket nem kezelik, akkor körülbelül 85% -uk korioretinalis elváltozásokat fog kifejleszteni, amelyek egy része látásvesztést eredményez felnőtt korára (Koppe, 1974; Wilson et al., 1980).

Míg a klasszikus tanítás szerint az intrauterin expozíció csaknem az összes szem toxoplazmózis másodlagos, nyilvánvaló, hogy a szerzett betegség gyakoribb, mint azt korábban gondolták (Holland, 1999) - és valóban a posztnatális fertőzés okozhatja a Toxoplasma retinochoroiditis (Gilbert) többségét és Stanford, 2000). Az a klasszikus tanítás eredete, hogy a szem toxoplazmózis veleszületett fertőzésből származik, azokból a vizsgálatokból származott, amelyek azt mutatják, hogy a csendes-óceáni déli szigeteken a terhesség előtt a szeres gyakoriságú expozíció a toxoplazmózisnak, és alacsony a szembetegségek aránya is (Darrell et al., 1964). Ezen túlmenően a klasszikus tanítás támogatása a korábbi vizsgálatokban ritka, hogy több testvér testvére szembesülne toxoplazmózisban. Ezenkívül nem nőtt az okuláris toxoplazmózis prevalenciája az életkor előrehaladtával, ami nem párhuzamos a toxoplazmózis szeroprevalenciájának egyidejű növekedésével az életkorral - mindkettő a megszerzett betegség, mint okuláris toxoplazmózis forrása ellen.

A legutóbbi vizsgálatok beszámoltak nem toxikus testvéreknél a szem toxoplazmózisáról (Glasner et al., 1992) és a szerzett betegségben okozott szemfertőzésről. A Palo Alto Medical Foundation szerológiai vizsgálata azt sugallja, hogy sok olyan beteg, akinek csak a toxoplazmózis szembetegségei vannak, nemrégiben fertőzést szerezhetett, szemben a visszatérő veleszületett fertőzéssel. Valószínű, hogy ezeknél a betegeknél a korábbi elváltozások a szerzett fertőzés korábbi, észrevétlen epizódjainak lehetnek köszönhetők, mivel a gyermekkorban vagy a szem perifériáján szerzett chorioretinalis elváltozások nem jelennek meg, és helytelenül diagnosztizálhatók veleszületettként.

Különleges populációk számos szerológiai vizsgálata azt sugallja, hogy a szem toxoplazmózisa többnyire megszerezhető. A T. gondii iránti szeropozitivitás viszonylag magas a dél-brazíliai Erechim régióban. Feltételezhető, hogy ennek oka a nyers sertéshús elfogyasztásának kulturális gyakorlata. Egy tanulmány megállapította, hogy Brazíliában a szembetegségek gyakorisága az életkor előrehaladtával növekszik (Glasner et al., 1992). A veleszületett toxoplazmózis ritka, mivel a nők többsége az első terhesség előtt fertőzésnek van kitéve. A nem ikertestvérek esetei, mindkettőnél szembetegségben toxoplazmózis (Silveira és mtsai, 1988), valamint az ott előforduló szembetegségek magas aránya (17,7%) (Glasner és mtsai, 1992) arra utalnak, hogy a betegség epidemiológiájával kapcsolatos korábbi elképzelések érdemes átgondolni. A szerzett fertőzés miatt Brazíliában magasabb a betegségszám számos tényezőhöz kapcsolódhat. Feltételezzük, hogy a gazda, a parazita és a környezet különböző tényezői befolyásolják a betegség lefolyását: különbségek vannak a gazda genetikájában vagy életkorában az expozíció, az intenzitás, az expozíció gyakorisága és időtartama, az átvitel módja és a klón típusa, az élet között stádium és a parazita virulenciája.

A szerzett szem toxoplazmózisról Franciaországban (Couvreur és Thulliez, 1996), Kanadában (Burnett et al., 1998), Brazíliában (Glasner et al., 1992; Silveira et al., 2001) és az USA-ban (McCannel et al. (1996; Montoya és Remington, 1996). Egy lenyűgöző populációalapú epidemiológiai tanulmány Brazília vidékén azt mutatta, hogy a háztartások összefüggésben vannak a fertőzés súlyosságával (Portela et al., 2004). A 10 évesnél fiatalabb betegeknél nem találtak szembetegséget, annak ellenére, hogy a szerológiai fertőzés 47% -ban bizonyult. Az összes korcsoport közül a szeropozitív betegek 12,9% -ánál voltak léziós elváltozások, az 55 évesnél idősebb betegeknél pedig a legnagyobb volt a léziós elváltozás. Hasonló háztartásoknál kissé megnőtt a szem toxoplazmózisának kockázati tényezője; azonban az életkor volt a legnagyobb a szemkárosodás kockázata. A GIPL-specifikus IgA magas értéke nagyobb szemelváltozásokkal társult. Úgy tűnt, hogy az IgA a tachyzoitákból származó GIPL ellen irányul. Míg az Egyesült Államokban úgy tűnik, hogy a Toxoplasma 2-es típusú törzsek a leggyakoribb emberi fertőzéssel járó törzsek, Brazília délkeleti részén 1-es, 3-as vagy 1/3 típusú hibridekről számoltak be, amelyekben a 2-es típusú viszonylag hiányzott (Dubey et al., 2002; Dubey és mtsai, 2003; Fux és mtsai, 2003).

A Toxoplasma emberre történő továbbításának számos módja létezik, és az átvitel fontosságának pontos hierarchiája nem ismert, és valószínűleg régiónként változik. Általában nehéz meghatározni a T. gondii expozíció forrását egy adott betegnél. Feltételezzük, hogy a legtöbb fertőzés lenyeléssel történik, akár szennyezett vízből, alul főtt húsból vagy szennyezett termékekből származik. Egy azonosított táplálékforrás (szarvas) példája, amely a jelek szerint a vadhús kezeléséből vagy evéséből származó szerzett toxoplazmózis öt esetéhez kapcsolódik, meggyőző (Ross et al., 2001). A különböző kultúrákban és régiókban valószínűleg több, még nem azonosított táplálékforrás létezik, amelyek a toxoplazmózis átterjedésének közös forrásai. A szűretlen ivóvizet Brazília északi vidéki régiójában meghatározták a fertőzések magas gyakoriságának fő forrásaként (Bahia-Oliveira et al., 2003). Egy jelentés arról szólt, hogy egy lóistállóban átterjedési forrásként aeroszolosodtak (Teutsch et al., 1979).

A vizsgálattól függően a fertőzött egyének 2-20% -ánál alakul ki a szem toxoplazmózisa (McCannel et al., 1996; Couvreur és Thulliez, 1996; Burnett et al., 1998; Glasner et al., 1992; Silveira et al., 2001; Montoya és Remington, 1996; Holland, 1999).

Jones és Holland becslései szerint az USA-ban a lakosság 14% -a fertőzött T. gondii-val 40 éves korig, és ezen betegek nagyjából 2% -ának van okuláris érintettsége (Jones és Holland, 2010). Az Egyesült Államok 2009-es népszámlálási becslése alapján 21 000 embernél alakul ki toxoplazmatikus szemelváltozás, 4800 pedig tüneti. A világ más régióiban, például Brazília déli részén, sokkal magasabb a betegségterhelés mind a magasabb betegségprevalencia (56%), mind a szem megnyilvánulási aránya miatt (Dubey et al., 2012). A betegségterhelés további vizsgálata indokolt a betegségek megelőzésére és az érintett emberek kezelésére vonatkozó megfelelő közegészségügyi programok meghatározásához.