Antioxidáns és endoteliotrop tulajdonságok 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav a kísérleti agyi iszkémia körülményei között

Megjelent: Fiatal Gyógyszerészek Lapja

Cikk azonosító (megjelenítői azonosító): JYP-10-2-193

Szerzői

Pjatigorszki Orvosi és Gyógyszerészeti Intézet, a Volgográdi Állami Orvostudományi Egyetem egyik ága, Pjatigorszk, OROSZORSZÁG.

Levelezés: Levelezés D.I. Pozdnyakov, Pjatigorszki Orvosi és Gyógyszerészeti Intézet, a Volgográdi Állami Orvostudományi Egyetem egyik ága, Pjatigorszk, OROSZORSZÁG. Telefon: + 7-918-756-08-89 E-mail: [email protected]

Idézd ezt a cikket: Pozdnyakov D, Voronkov AV, Zolotych DS, Arlt AV. Antioxidáns és endoteliotrop tulajdonságok 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav a kísérleti agyi iszkémia körülményei között. J Young Pharm. 2018; 10 (2): 193-6.

Absztrakt

Célkitűzés

A 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav hatásának felmérése az endotheliális működés állapotára kísérleti agyi iszkémia körülményei között.

Anyagok és metódusok

Kiértékeltük a 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav antioxidáns tulajdonságait, valamint ennek a vegyületnek az NO-szintáz rendszer aktivitására és az ADMA koncentrációra gyakorolt hatását.

Eredmények

Ennek eredményeként azt találták, hogy a 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav alkalmazása elősegíti a kataláz, glutation-peroxidáz, szuperoxid-diszmutáz redukciós aktivitását, valamint az MDA és DC koncentrációjának csökkenését. Ezen túlmenően megállapították, hogy az NO szintáz rendszer aktivitása modulálható: az eNOS aktivitás 114,2% -kal nőtt (o

BEVEZETÉS

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

A kísérletben 80 hím Wistar patkányt használtak, amelyek súlya 200-220 gramm volt. Minden állatmanipuláció megfelelt a nemzetközi kísérleti etika normáinak (kísérleti és egyéb tudományos célokra használt gerincesek védelméről szóló európai egyezmény (Strasbourg, 1998. június 22.)). A kísérleti csoportokat az állatok életkor és súly szerinti randomizálásával hoztuk létre. Minden csoportban 20 egyén volt. Az állatok első csoportja - álműtött patkányok (PO), második - negatív kontroll (NC). Sulodexid (Wessel Doué F, Alfa Wasserman, Olaszország) 30 UIL, 8 etil-metil-hidroxi-piridinoszukcinát («Mexidol», PHARMASOFT) 30 mg/kg 9 dózisban és tioktinsav («Octolipen», Pharmstandard) 50 adagban. mg/kg 10-et alkalmaztunk referenciakészítményként: A 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsavat (ATACL) a tesztvegyületet 100 mg/kg dózisban adtuk be. Összehasonlító gyógyszereket és vizsgálati vegyületet adtunk be per os, a fokális agyi ischaemia reprodukciója után és naponta 3 napig.

A fokális agyi ischaemia kísérleti modellje

A fokális iszkémiát koagulációs módszerrel reprodukáltuk klórhidrát (350 mg/kg) altatásban. Az állatokat altattuk, szőrtelenítettünk egy bőrfoltot a jobb szem alatt és bal oldalon, bemetszést hajtottunk végre. Meghúzta a lágy szöveteket, eltávolította a maláris csont menetét, és feltárta a koponyát a jobb középső agyi artéria és a szaglócsatorna metszéspontjában. Fúrtunk egy ~ 2 cm 2 átmérőjű trepanációs lyukat, eltávolítottuk a dura mater-t és koaguláltuk a középső agyartériát, míg a nagyító alatt megfigyeltük az artériás ágyban a véráramlás megszűnését. Ezután a csonttöredékeket újrapozícionálják, a sebet rétegenként és antiszeptikummal kezelik. 11.

A dién konjugátumok koncentrációjának meghatározása

A zsírsavak acil-hidroperoxidjainak dién konjugátumainak (DC) tartalmának meghatározását az agy homogenizátumában spektrofotometriásan, 233 nm-en végeztük. A DC-t heptán: izopropanol 1: 1 arányú elegyével extraháljuk. A DC-k számát a konjugált diének moláris extinkciós együtthatójából számítottuk, 233 nm-nél 2,2x105M-1 cm-1, és nmol/mg fehérjében fejeztük ki. 12.

A malonsav-dialdehid koncentrációjának meghatározása

A malon-dialdehid (MDA) tartalmát az agy homogenátumában spektrofotometriás módszerrel határoztuk meg. Ez a módszer az MDA 2-tiobarbitursavval képzett színes reakciótermékének kialakításán alapul, amelynek abszorpciós maximuma 532 nm-nél van. Az oldat színe arányos a malon-dialdehid koncentrációjával. Az MDA mennyiségét a moláris extinkciós együttható (1,56 * 10 5 L/mol -1/cm -1) értékéből számítottuk, az eredményeket nmol/mg fehérjében fejeztük ki.

A kataláz aktivitás meghatározása

A kataláz aktivitását a hidrogén-peroxid bomlási sebességének spektrofotometriás módszerével ultracentrifugált agyban határoztuk meg. A hidrogén-peroxid mennyiségét a reakcióban 4% -os ammónium-molibdát-oldattal határoztuk meg. A reakciótermék színintenzitását 410 nm-en mértük. A kataláz aktivitást a kísérleti és az üresjárati minták extinkciói közötti különbségből számítottuk ki, a hidrogén-peroxid moláris extinkciós együtthatójának felhasználásával, amely 22,2 * 10 3 mM -1 cm-1 volt és nmol/perc/mg fehérjében volt kifejezve. 13.

A szuperoxid-diszmutáz aktivitás meghatározása

A SOD aktivitását az agy ultracentrifugált állapotában határoztuk meg az n-nitrotetrazolium-klorid (HTC) formazánképződésének gátlásával. HTC-t használtunk az O 2 * indikátoraként - amelynek redukált formáját (formazan) acetonban oldottuk. O2 * - 2,8 * 10-5 M riboflavin-oldatot tartalmazó fotokémiai rendszer előállításához 20 cm-es fluoreszcens lámpával történő besugárzáshoz 1 * 10 -2 M tetrametil-etilén-diamin 0,05 M K-foszfátpufferben (pH 7,8) készített oldatát használtuk. 5 percig szobahőmérsékleten. A SOD felszabadításához a sejtorganellákból 0,5% -os deoxikolát oldatot használtunk. A reakciót leállítottuk 20% -os TCA és aceton oldat hozzáadásával. Az optikai sűrűséget CPC-3-on rögzítettük 440 nm-en. A SOD aktivitása az aktus/mg fehérje egységben. 14

A glutation-peroxidáz aktivitásának meghatározása

A glutation-peroxidáz (GP) aktivitását az agy ultracenterátumában a konjugált glutation-reduktáz reakcióban határoztuk meg a NADPH elvesztésével. Az aktivitást 50 mM K, Na-foszfát-puffert (pH 7,4) tartalmazó táptalajban rögzítettük; 1,0 * 10-3 M EDTA, 0,2 * 10-3 M NADPH, 1,0 * 10-3 M GSH, 1 egység. act/ml glutation-reduktáz, 30-60 μg fehérje/ml táptalaj CPC-3-on 340 nm-en. A glutation-peroxidáz teljes aktivitásának meghatározásakor szubsztrátként 1,5 * 10-3 M koncentrációjú kumén-hidroperoxidot adtunk a táptalajhoz. A reakciót szubsztrát hozzáadásával indítottuk el, és 25 ° C hőmérsékleten hajtottuk végre. C 14 A fehérje koncentrációt a Folin reagenssel végzett reakcióban határoztuk meg.

Módszerek a NOS izoenzimek és az aszimmetrikus dimetilarginin (ADMA) koncentrációjának változásainak értékelésére

A nitrogén-oxid-szintáz (eNOS, nNOS, iNOS) izozimjeinek koncentrációját patkányagy-homogenizátumban határoztuk meg enzim immunvizsgálat módszerével, standard Cloud Clone Corp. Reagensek alkalmazásával. A minta előkészítése és az elemzés előrehaladása szorosan megfelelt az egyes utasításkészletekhez mellékelt utasításoknak. Az eredményeket egy Infinite F50 mikrolemez-olvasón (Tecan, Ausztria) olvastuk.

statisztikai módszerek

A kísérletek eredményeit a STATISTICA 6.0 szoftverrel (StatSoft, Inc., USA) dolgoztuk fel. Kiszámítottuk az átlagértéket és az átlagérték standard hibáját, az adatokat M ± σ-ban fejeztük ki. A kapott eredményeket Shapiro-Wilk teszttel ellenőriztük az eloszlás normalitása szempontjából. A normális eloszlás törvényeinek alárendeltsége esetén a hallgató t-Bonferroni tesztet több összehasonlításra használtam az átlagok összehasonlítására. Egyébként a kísérleti eredmények további statisztikai feldolgozását a nem paraméteres Mann-Whitney U-teszt alkalmazásával hajtottuk végre.

EREDMÉNYEK

A 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav antioxidáns tulajdonságainak értékelése.

KÖVETKEZTETÉS

A 4-hidroxi-3,5-di-tret-butil-fahéjsav endotelioprotektív hatása ezen vegyület antioxidáns tulajdonságain alapulhat (52,6% -kal csökkenti az MDA és DC képződését).o [7] Összeférhetetlenség ÉRDEKLŐDÉSEK A szerzők szerint nincs összeférhetetlenség a benyújtott kézirattal.