A patogenezissel kapcsolatos 10. osztályú panallergének tisztítása és jellemzése

(A) A kiválasztott patogenezissel összefüggő protein-10 (PR-10) fehérje aminosav-szekvenciák illesztése és (B) filogenetikai fája. Az ebben a vizsgálatban bemutatott hét PR-10 fehérje aminosavszekvenciáját bevezettük a MegAlign Pro-ba (DNASTAR Lasergene), és összehangoltuk a Clustal Omega algoritmus segítségével.

tisztítása

(A) A nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézis (SDS-PAGE) gél, amely az rCor a 1.02 expressziós és tisztítási lépéseket mutatja be. (B) Az SDS-PAGE gél, amely az egyes PR-10 fehérjék összesített n-butil-frakcióit mutatja.

A tisztított PR-10 fehérjék immunglobulin E (IgE) kötő tulajdonságai enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatokkal (ELISA) meghatározva. Az átlagos abszorbancia 450 nm-nél a háttér kivonása után az y-tengelyre kerül ábrázolásra minden páciens szérumához, amely az x-tengelyen feltüntetett 500 ng PR-10 fehérjéhez kötődik. A háttér az átlagos abszorpciós mélyedések a megfelelő PR-10 fehérjével, nem allergiás egyed szérumait használva. * Minden pozitív reakciót feltüntetett.

Fluoreszcencia vizsgálatokban tesztelt ligandumok. A ligandumok neve és kémiai szerkezete ebben a vizsgálatban kiderült, hogy megköti a PR-10 fehérjéket.

A PR-10 fehérjék ligandumkötése. A ligandumkötés közvetett mérése PR-10 fehérjékkel a 8-anilino-1-naftalinszulfonsav (ANS) kiszorítási vizsgálattal. A kötődést az ANS-fehérje komplex (40 uM ANS-40 uM fehérje) fluoreszcens jelének százalékos növekedésével vagy csökkenésével mérjük, versenytárs nélkül, és az y tengelyen az alapjel százalékában rögzítjük. Az x tengely mutatja a versenytárs ligandum koncentrációját uM-ben.

A t-resveratrol PR-10 fehérjékhez való kötődésének közvetlen mérése. Az egyes fehérjék (20 uM) fluoreszcencia profilját 40 uM t-resveratrol jelenlétében ábrázoljuk összehasonlítás céljából, amelyet az y tengelyen fluoreszcencia intenzitásként rögzítünk az x tengely hullámhosszával (nm) szemben.

A PR-10 fehérjék körkörös dikroizmus (CD) spektrumai. A PR-10 fehérjék CD-spektrumának átfedése átlagos maradék ellipticitásként az y tengelyen, a hullámhossz függvényében (nm) az x tengelyen.