Kísérleti
és terápiás
Gyógyszer

  • Journal Home
  • Jelenlegi probléma
  • Közelgő kérdés
  • Legolvasottabb
  • Legtöbbször idézett (dimenziók)
    • Az elmúlt két év
    • Teljes
  • Legtöbbször idézett (CrossRef)
    • Az elmúlt év 0
    • Teljes
  • Közösségi média
    • Múlt hónap
    • Múlt év
    • Teljes
  • Archívum
  • Információ
  • Online benyújtás
  • Információ a szerzőknek
  • Nyelv szerkesztése
  • Információ a bírálók számára
  • Szerkesztési irányelvek
  • Szerkesztőbizottság
  • Célok és hatály
  • Kivonatolás és indexelés
  • Bibliográfiai információk
  • Információ a könyvtárosoknak
  • Információ a hirdetők számára
  • Újranyomtatások és engedélyek
  • Lépjen kapcsolatba a szerkesztővel
  • Általános információ
  • A Spandidosról
  • Konferenciák
  • Munkalehetőségek
  • Kapcsolatba lépni
  • Felhasználási feltételek
  • Szerzői:
    • Yi Guo
    • Jun-Xiang Li
    • Tang-You Mao
    • Wei ‑ Han Zhao
    • Li ‑ Juan Liu
    • Yun-Liang Wang

  • Ezt a cikket a következők említik:

    Absztrakt

    Anyagok és metódusok

    GGQLD és resveratrol készítése (Resl)

    A GGQLD granulátumokat a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem (Peking, Kína) Dongfang Kórház Gyógyszerészeti Tanszéke biztosította. A granulátumok a Gegen Qinlian képlet következő összetevőiből álltak: Kudzu gyökér, Rhizoma coptidis, Scutellaria baicalensis Georgi és fő édesgyökér 24, 9, 9 és 6 g-on. A Resl-t a Zelangyiy Co., Ltd.-től (Nanjing, Kína) vásároltuk.

    megcélzása

    Állatok és kezelés

    Összesen 30 hím Sprague-Dawley patkányt (7 hetes; súlya 200 ± 20 g) szállított a Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Peking, Kína). Minden állatkísérleti eljárást a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem Állatetikai Bizottsága hagyott jóvá a Pekingi Laboratóriumi Állatkezelési Szabályzat (18) által kiadott iránymutatások alapján. A patkányokat 12 órás világos/sötét ciklusban tartottuk állandó hőmérsékleten (22 ± 2 ° C) és 50 ± 10% páratartalom mellett, ad libitum hozzáféréssel a standard chow étrendhez (kontrollcsoport) vagy a magas zsírtartalmú étrendhez ( HFD: 34% zsír, 19% fehérje és 47% szénhidrát energiaösszetétel szerint; n = 6 csoportonként) 8 héten át a NAFLD kiváltására. Ezenkívül a GGQLD granulátumokat és a Resl-t 100 ml desztillált vízben feloldjuk, és további felhasználásig 2–8 ° C-on tároljuk. Az öt állatcsoportot (n = 6) orálisan kezeltük 8 héten keresztül az alábbiak szerint: GGQLD alacsony és nagy dózisú (GGQLD-L és GGQLD-H) csoportokat 5,04, illetve 10,08 g/kg/nap GGQLD-vel kezeltünk; Resl csoport, 400 mg/kg/nap kezeléssel Resl; és a HFD modellt és a kontroll csoportokat a kezdetektől fogva 8 hétig 10 ml/kg/nap sóoldattal kezeltük. A GGQLD és a Resl csoportoknak a megfelelő kezeléseket a HFD etetés kezdetén adtuk, és a kontroll a standard chow étrendet kapta.

    A metabolikus paraméterek és a májenzimek meghatározása

    A kezelés végén az állatokat 4% -os klór-hidrát (Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd., Sanghaj, Kína) alkalmazásával altattuk 12 órás éjszakai böjt után, és vérmintákat vettünk patkányok hasi aortájából. Az éhomi szérum TG-k (Jing 20142401132), az összes koleszterin (TC, Jing 20162400910), a nagy sűrűségű lipoprotein-koleszterin (HDL-C, Jing 20152400950) és az alacsony sűrűségű lipoprotein-koleszterin (LDL-C, Jing 20142400518), valamint az éhomi szérum az alanin-aminotranszferázt (ALT, Jing 20142401158) és az aszpartát-aminotranszferázt (AST, Jing 20142401158) ELISA-készletek (BioSino Biotechnology and Science, Inc., Peking, Kína) segítségével elemeztük.

    Szövettani elemzés

    A májszövetek paraffin metszeteit 10% -os formaldehid-oldattal 48 órán át szobahőmérsékleten rögzítettük, és a szövetszeleteket (4 um vastagságú) hematoxilin festésre 10 percig és eozinnal 2 percig szobahőmérsékleten készítettük. A hematoxilin és az eozin (H&E) beszerzése a Beijing Zeping Bioscience & Technologies Co., Ltd.-től (Peking, Kína) történt. Az olajvörös O (ORO; Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, Németország) festést frissen fagyasztott májszövetekkel (-196 ° C, folyékony nitrogén) végeztük 3 percig szobahőmérsékleten. A H & E- és ORO-festett tárgylemezeket fénymikroszkóppal szemléltettük a máj és a máj lipidcseppjeinek felépítésének vizsgálata céljából. Minden csoportból 3-5 patkány májszövetmintáját készítettük el, festettük, majd a képeket Olympus digitális fényképezőgéppel (BX40; Olympus Corporation, Japán) és a NIS Element SF 4.00.06 szoftverrel (Nikon Corporation, Tokió, Japán).

    A Sirt1, a PGC-1α és az aktivált B-sejtek κ-könnyűlánc-fokozója (NF-κB) p65 Western blot-vizsgálata
    Fordított transzkripciós kvantitatív polimeráz láncreakció (RT-qPCR) a Sirt1, PGC-1α és NF-KB mRNS expresszióhoz
    Statisztikai analízis

    1.ábra.

    2. ábra.

    3. ábra.

    Parafin metszet, valamint haematoxilin és eozin festés eredményei in vivo (nagyítás, × 100). Májszövetek képei (A) chow-táplált, (B) magas zsírtartalmú étrend-modellből, (C) GGQLD-alacsony dózis, (D) GGQLD-magas dózis és (E) resveratrollal kezelt patkányokból. GGQLD, Gegen Qinlian főzet.

    Ezenkívül kevés lipidcseppet detektáltak a chow csoport májszakaszaiban az ORO festési elemzés során (4A. Ábra). A HFD-vel táplált modellpatkányokhoz (4B. Ábra) képest a GGQLD és a Res1 markánsan visszafogta a lipidcseppek lerakódását a hepatocytákban (4C-E ábra).

    4. ábra.

    Olajvörös O-val festett fagyasztott májszakaszok eredményei in vivo (nagyítás, × 400). A vörös blotok a májsejtekben lévő lipidcseppeket mutatják be. Képek (A) chow-táplált, (B) magas zsírtartalmú étrend-modellről, (C) GGQLD-alacsony dózis, (D) GGQLD-magas dózis és (E) resveratrollal kezelt patkányokról. GGQLD, Gegen Qinlian főzet.

    A GGQLD szabályozza a Sirt1, PGC-1α és NF-κB (p65) expressziót HFD által kiváltott NAFLD patkányokban

    Vizsgálták annak lehetőségét, hogy a GGQLD szabályozó hatást gyakoroljon a Sirt1, PGC-1α és NF-κB (p65) expresszióra. Amint azt az 5. ábra mutatja, a Sirt1 fehérje szintje szignifikánsan csökkent a HFD csoportban (P 0,05 vs. HFD csoport).

    5. ábra.

    6. ábra.

    Western-blot a PGC-1α-ra a májszövetben. PGC-1α, peroxiszóma-proliferátor-aktivált receptor-y koaktivátor-la; HFD, magas zsírtartalmú étrend; GGQLD-H, Gegen Qinlian főzet nagy dózisban; GGQLD-L, Gegen Qinlian főzet alacsony dózis; Resl, resveratrol.

    7. ábra.

    Western-blot az NF-κB (p65) számára a májszövetben. NF-κB, az aktivált B-sejtek nukleáris faktor κ-könnyűlánc-fokozója; HFD, magas zsírtartalmú étrend; GGQLD-H, Gegen Qinlian főzet nagy dózisban; GGQLD-L, Gegen Qinlian főzet alacsony dózis; Resl, resveratrol.

    A GGQLD Sirt1, PGC-1α és NF-κB génexpresszióra gyakorolt ​​hatásainak validálása RT-qPCR segítségével

    8. ábra.

    9. ábra.

    10. ábra.

    Fordított transzkripció-kvantitatív polimeráz láncreakció az NF-κB expresszióhoz a májszövetben. ▲ P + -függő enzimek, amelyeket Resl könnyen aktivál (34). Kimutatták, hogy a Sirt1 növeli a genomi stabilitást és a sejtek stresszel szembeni ellenállását, és a célfehérjék dezacetilezésével szabályozza az energia-anyagcserét és a sejtek öregedését, beleértve a p53-at, a villásfej transzkripciós faktorokat és a PGC-1α-t (35–38). Fenntartja a zsírsavak oxidációját alacsony glükózkoncentráció mellett, és a PGC-1α szabályozója, amely aktiválja a PPARy-t és metabolikusan releváns gének transzkripcióját indukálja a mitokondriális zsírsav oxidációjához (8). Az elmúlt években számos tanulmány (39,40) arra a következtetésre jutott, hogy a Sirt1 aktiváció negatív szabályozó hatást gyakorol a gyulladásos folyamatokra. Ezekben a folyamatokban az egyik kulcsfontosságú fehérje az NF-KB, amely kritikusan modulálja a DNS-transzkripciót gyulladásos, fertőző és apoptotikus folyamatokban (41). Az NF-κB diszregulációja gyulladásos és autoimmun betegségekhez vezethet. Egyre több bizonyíték tárta fel, hogy az NF-κB aktiváció hozzájárul a NAFLD/NASH patogeneziséhez és a hepatocelluláris carcinoma kialakulásához (23). A Sirt1 aktiválása dezacetilálja a RelA/p65 alegységet, és ezáltal gátolja az NF-KB jelátvitelt (42,43).

    A HFD által kiváltott NAFLD állatmodelljét széles körben alkalmazták a patogenezis azonosítására és a NAFLD új kezelésének értékelésére (44,45). Ebben a tanulmányban a HFD által kiváltott zsírmájbetegség 8 hete Sprague-Dawley patkányokban, amelyben a legfontosabb biokémiai jellemzőket és szövettani rendellenességeket fedezték fel H & E- és ORO-festett májmintákkal, összhangban voltak a meglévő jelentésekkel (44,46 ). Bár a tanulmányok (47) a NAFLD terápiáira összpontosítottak, ennek kezelésére nem engedélyezettek farmakológiai szereket. Ezért a klinikai erőfeszítések többsége jelenleg a metabolikus szindrómákkal, nevezetesen az elhízással, a cukorbetegséggel, a diszlipidémiával és a magas vérnyomással kapcsolatos stratégiákra helyezte a hangsúlyt (48). Más beavatkozások olyan specifikus utakra irányulnak, amelyek potenciálisan részt vesznek a NAFLD patogenezisében, beleértve az oxidatív stresszt, az inzulinrezisztenciát és a gyulladáscsökkentő citokineket (49).

    Számos tanulmány használta adipocitákat annak igazolására, hogy a Resl elhízás elleni potenciállal rendelkezik azáltal, hogy csökkenti az adipocita proliferációt, kiváltja az adipocita apoptózist, gátolja a preadipocita differenciálódást, csökkenti a lipogenezist, és elősegíti a lipolízist és a zsírsavak β-oxidációját (50–54). Ezeket a hatásokat közvetíthetik az adipogenezis, a lipogenezis és a zsírsav-β-oxidáció központi szabályozói, beleértve a fent említett AMPK-t, a Sirt1-et és a PGC-1α-t (55). A Resl, egy deacetiláz, a Sirt1 közvetett aktivátora, amely növeli az intracelluláris ciklikus AMP (cAMP) koncentrációt azáltal, hogy gátolja a cAMP-t csökkentő foszfodiészterázokat (56). Ezenkívül a megnövekedett cAMP-koncentrációk aktiválják az AMPK-t, amely végül a PGC-1α promoteréhez kötődik, bemutatva annak fontos enzimatikus szerepét a sejtenergia homeosztázisának szabályozásában (57).

    Kimutatták, hogy a CHM rendkívül jó hatással van számos betegségre (58–60), és az alkalmazott készítmények viszonylag széles biztonsággal rendelkeznek. Korábbi tanulmányunk (14) kimutatta, hogy a GGQLD terápiásán kezelte a NAFLD-t a PPARγ diszreguláció javításával, ezáltal a lipidek szabályozásával és a gyulladás elnyomásával. Ebben a tanulmányban a GGQLD-vel végzett 8 héten át tartó kezelés jelentősen csökkentette a máj májaminotranszferázait (ALT és AST) olyan szintre, amely összehasonlítható volt a normál chow-táplált kontrollcsoportéval. Ezenkívül hatékonyan akadályozta a zsír beszivárgását, amit a csökkent máj TC, LDL és lipid cseppek bizonyítottak. Noha a NAFLD kórokozó mechanizmusait még vizsgálják, a zsír felhalmozódását, különösen a TG hepatocitákba történő szűrését, a NAFLD fejlesztésének első lépésének tekintik (1). Ezért a lipidfelhalmozódás megerősített létfontosságú szerepet tölt be a NAFLD-ben. A biokémiai és szövettani vizsgálatok eredményei azt mutatták, hogy a GGQLD-L és a Resl csökkentette a szérum LDL-C és TC értékeket. Ezenkívül a HDL-C szintet megemelték a GGQLD-H csoportban, míg a szövettani festésből kiderült, hogy a GGQLD-L, GGQLD-H és Resl csökkentette a hepatociták lipidcseppjeit és normalizálta a steatosisot HFD patkányokban.

    A Sirt1, a PGC-1α szabályozója, amely aktiválja a PPARy-t, metabolikusan releváns gének transzkripcióját indukálja a mitokondriális zsírsavak oxidációjához (8). Ez a kaszkád negatív szabályozó hatást gyakorol a gyulladásos folyamatokra. Jelen tanulmány kimutatta, hogy a GGQLD és a Resl nyilvánvalóan javította a Sirt1 fehérje és gén expresszió szintjét. Bár a GGQLD és a Resl jelentősen és jelentősen csökkentette az NF-κB génexpressziót, a fehérje expresszió csökkenő tendenciát mutatott. A PGC-1α gén és fehérje expresszió a HFD csoportban kissé csökkent a chow csoportéhoz képest, de nem szignifikánsan. A PGC-1α génexpresszió nyilvánvaló növekedését figyelték meg a GGQLD-H csoportban a chow és HFD csoportokhoz képest. Nevezetesen, a GGQLD növelte a Sirt1 fehérje és gén expressziót, amelynek hatása hasonló volt a Resl.

    Így a jelen vizsgálat adatai alapján a GGQLD pozitív hatással volt a NAFLD-re azáltal, hogy javította a Sirt1 szabályozását, amelynek kritikus szerepe van a lipid- és gyulladásszabályozásban, ezáltal további kísérleti bizonyítékokkal szolgáltak klinikai alkalmazásának alátámasztására. Mivel a GGQLD növényi tartalmát évezredek óta használják a hagyományos orvoslásban, viszonylag biztonságosnak, megbízhatónak és tolerálhatónak tekintik. Összefoglalva, a jelen tanulmány a GGQLD-t mint lehetséges opcionális megközelítést vizsgálta a NAFLD kezelésére a lipidanyagcsere, a gyulladás és a szövettani rendellenességek kezelésével a Sirt1 útvonalon keresztül. További kísérletek a bél immunválaszára összpontosítanak a NAFLD-ben, a bél máj tengelyének bevonása alapján, rendszerbiológia és omika módszerekkel.

    Köszönetnyilvánítás

    Jelen tanulmányt a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány Ifjúsági Alapja támogatta (81503407. sz. Támogatás) és a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem ösztöndíjainak saját maga által kiválasztott tantárgya (2015-ös JYB-JSMS125 és 2013-JYBZZ- támogatás XS-153).

    Hivatkozások

    Dowman JK, Tomlinson JW és Newsome PN: Az alkoholmentes zsírmájbetegség patogenezise. QJM. 103: 71–83. 2010. Cikk megtekintése: Google Scholar: PubMed/NCBI