Mugwort pollenhez kapcsolódó ételallergia: lipidtranszfer fehérje szenzibilizáció és összefüggés az allergiás reakciók súlyosságával egy kínai populációban

Shan Deng

1 Allergia Tanszék, Peking Union Medical College Hospital, Kínai Orvostudományi Akadémia és Peking Union Medical College, Peking, Kína.

2 Pekingi allergiás betegségek diagnosztizálásának és kezelésének precíziós orvostudományi laboratóriuma, Peking, Kína.

Jia Yin

1 Allergia Tanszék, Peking Union Medical College Hospital, Kínai Orvostudományi Akadémia és Peking Union Medical College, Peking, Kína.

2 Pekingi allergiás betegségek diagnosztizálásának és kezelésének precíziós orvostudományi laboratóriuma, Peking, Kína.

Társított adatok

Absztrakt

Célja

Kevéssé ismert a lipid transzfer fehérje (LTP) szenzibilizálásának fontossága Kínában. Ebben a tanulmányban az LTP szenzibilizáció és a klinikai tünetek súlyossága közötti összefüggést vizsgáltuk a mugwort pollenhez kapcsolódó ételallergiában szenvedő betegek populációjában.

Mód

Az étel okozta tüneteket 148, mugwort pollenallergiában szenvedő betegnél értékelték standardizált kérdőívvel. Az Art v 1, Art v 3, Pru p 3, Ara h 9 és Cor a 8 specifikus immunglobulin E-t (IgE) az ImmunoCAP alkalmazásával számszerűsítettük. Az őszibarack-kivonatok immunblottozását őszibarack-allergiás betegek szérumaival végeztük.

Eredmények

Összességében a vizsgált populáció 72% -a (107/148) tapasztalt ételallergiát. A mugwort pollen okozta ételallergiában szenvedő betegek 48 százaléka (51/107) legalább 1 epizódot tapasztalt élelmiszer okozta anafilaxiában. Az ételallergia korrelált az IgE reaktivitásával az Art v 3-hoz, az Art v 1-hez azonban nem. Az ételallergiás személyeknél a Pru p 3, Ara h 9 vagy Cor a 8 szenzibilizáció volt elterjedt (80%, 69, illetve 63%). A szisztémás reakcióban szenvedő ételallergiás betegeknél (SR) a Pru p 3, az Ara h 9 és a Cor a 8 értékei magasabbak voltak, mint az orális allergiás szindrómában (OAS) szenvedő betegeknél. Ezenkívül az őszibarack-kivonatok immunblottjaiban kimutatott erős IgE reaktivitás azt mutatta, hogy a Pru p 3 volt a fő allergén, és gyakoribb volt SR-ben szenvedő betegeknél, mint OAS-ban szenvedő betegeknél (100% vs. 55%).

Következtetések

Az LTP-k fő élelmiszer-allergének Kínában a kukorica pollenhez kapcsolódó élelmiszerallergiában, és hozzájárulhatnak az SR-hez.

BEVEZETÉS

A bögre virágpora az egyik leggyakoribb oka az allergiás rhinoconjunctivitisnek és az asztmának a nyár végén és ősszel Kínában. 1 A szezonális légúti tünetek mellett a mugwort pollenallergiában szenvedő betegeknél azonnali allergiás reakciók alakulhatnak ki a gyümölcsökre és zöldségekre, beleértve az orális allergiás szindrómát (OAS), csalánkiütést, angioödémát és anafilaxiát. 2, 3 A klinikai gyakorlatban gyakran észreveszik a mugwort pollenhez kapcsolódó ételallergiát. Mugwort-zeller-fűszer-szindrómáról, mugwort-mustár szindrómáról és mugwort-barack asszociációról számoltak be. 4, 5, 6 Az ételallergia ezen formájának prevalenciája, szenzibilizációs profilja és klinikai tünetei földrajzilag eltérőek lehetnek. Kínában a szisztémás reakciók (SR) jelentik a búzavirág pollenhez kapcsolódó ételallergia legfőbb megnyilvánulását, és a barack a leggyakoribb kiváltó tényező. 7

A bugavirág pollenhez kapcsolódó ételallergiát a mugwort pollenallergének és a szerkezetileg rokon ételfehérjék közötti immunológiai keresztreakció következményének tekintik. A mugwort pollenben a keresztreaktív allergént még nem sikerült azonosítani. Az Art v 1 a mugwort pollen domináns allergénje, és a mugwort pollen allergiás betegek több mint 95% -a érzékeny rá. Nemrégiben az Art v 3-at, a mugwort lipid transzfer fehérjét (LTP) azonosították szenzibilizáló allergénként egy kínai barack allergiás populációban. Az Art v 3 szekvenciája 43-50% -ban azonos az alma, a szilva és az őszibarack LTP-jével. Ennek a szekvenciahomológiának eredményeként számos LTP-nek magas a keresztreaktivitása. Kevéssé ismert azonban az LTP-szenzibilizálás fontossága a bögre pollenhez kapcsolódó ételallergiában. Spekuláltunk, hogy az Art v 3 lehet a szenzorizáló a bögre virágporral kapcsolatos ételallergiának, és hogy az LTP-k lesznek a fő élelmiszer-allergének az ilyen típusú ételallergiában.

Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk az immunglobulin E (IgE) reakcióképességének jelentőségét az Art v 1 és az Art v 3 iránt az élelmiszerallergia szempontjából, valamint az összefüggést az LTP szenzibilizáció és az ételekkel szembeni allergiás reakciók között.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Vizsgálati populáció

Összesen 148 mugwort pollinosisban szenvedő beteget vontak be a Peking Union Medical College Hospital (PUMCH) allergiás központjába 2011 júliusa és 2012 májusa között. Az ilyen betegeket az őszi pollinosis klinikai kórelőzménye alapján választották ki, ami pozitív bőrteszt a bögre kivonatára és az IgE jelenléte a bögre virágporára. A kizárási kritériumok a nyírfavirág iránti szenzibilizáció és az allergén-specifikus immunterápiás kezelés története volt. Valamennyi alanyon intradermális bőrteszteket végeztek a 8 leggyakoribb pollen kivonatával és szérum IgE-vizsgálattal bögre, nyír és bűnös ételek esetében. Alapos klinikai értékelést hajtott végre egy tapasztalt allergológus, amelynek célja az ételallergia minden epizódjának megállapítása volt, Fernández-Rivas és munkatársai által elfogadott standardizált kérdőív segítségével. 10 tartalmaz 16 ételt, nevezetesen gyümölcsöt/zöldséget (őszibarack, alma, mangó, szőlő, longan, licsi, zeller és káposzta), hüvelyeseket/földimogyorót (földimogyoró és zöldbab), diót/magot (mogyoró, dió, gesztenye, és napraforgómag) és fűszerek (fokhagyma és hagyma).

A növényi-ételallergia diagnózisa az allergiás reakciók meggyőző kórtörténetén alapult, közvetlenül az élelmiszerfogyasztás, az emelkedett élelmiszer-specifikus IgE és/vagy a pozitív bőrszúrási teszt után. Az allergiás ételek fogyasztását követő klinikai tünetek szerint a betegeket 2 csoportba sorolták az alábbiak szerint: 1. csoport, a szájnyálkahártyán (OAS) lokalizált tünetek; 2. csoport, SR, beleértve az általános csalánkiütést, angioödémát, gége angioödémát, légzési nehézségeket, gyomor-bélrendszeri rendellenességeket vagy az anafilaxia keringési tüneteit. Az anafilaxia diagnózisa az Országos Allergia- és Fertőző Betegségek Intézete (NIAID) 2006. évi kritériumain 11 alapult, kis módosítással: a betegeknél legalább 2 szervrendszer (a bőr-nyálkahártya szövet, gyomor-bélrendszer, légzőszervi kompromisszum és hipotenzió), amelyek az étel elfogyasztása után gyorsan jelentkeztek.

Írásbeli tájékozott beleegyezést kaptunk, és a Pekingi Unió Orvosi Főiskolai Kórházának Etikai Bizottsága jóváhagyta a vizsgálatot (PUMCH1103 sz.).

Az allergén-specifikus IgE meghatározása

Az összes felvett beteget az ImmunoCAP (ThermoFisher Scientific, Uppsala, Svédország) szűrővizsgálatával megállapítottuk, hogy van-e virágpor, nyírfa pollen, ételallergének és allergén összetevők Art v 1, Art v 3, Pru p 3 (barack LTP), Pru p 1 (Bet v 1 homológ), Pru p 4 (profilin), Ara h 9 (földimogyoró LTP) és Cor a 8 (mogyoró LTP). A specifikus IgE-szinteket> 0,35 kUA/L pozitívnak tekintették.

Bőrteszt

Valamennyi beteg intradermális bőrvizsgálaton esett át Kínában a 8 leggyakoribb pollen kivonatával (bögre, nyír, parlagfű, londoni repülőgép, japán komló, ciprus, kőris és kóchia; Allergen Gyártó és Kutatóközpont, PUMCH, Peking, Kína). A pollen allergéneket 1:20 (tömeg/térfogat) arányban extraháltuk. Ezután az extraktumokat 1: 100 arányú hígításnak vetették alá (térfogat/térfogat; kivéve 1: 1 000 bögre és japán komló esetében) felhasználásra szolgáló allergén oldószerrel; hisztamin-foszfátot (0,01, illetve 0,1 mg/ml) használtunk pozitív kontrollként, az allergén hígítószer pedig negatív kontroll volt. A reakciókat akkor tekintettük pozitívnak, ha az átlagos hüvelyátmérő meghaladta az 5 mm-t.

Néhány ételallergiás gyanúban szenvedő betegeknél bőrszúró teszteket végeztek nyers zöldségekre, gyümölcsökre és/vagy fűszerekre. A hisztamin-foszfát (10 mg/ml) és az allergén hígítószer pozitív, illetve negatív kontrollként szolgált. A teszt akkor tekinthető pozitívnak, ha a hüvely átlagos átmérője meghaladja a 3 mm-t. 12.

Az őszibarack allergének azonosítása

Őszibarack kivonat

A friss barackot egy helyi piacról szerezték be. Az őszibarack kivonatok elkészítéséhez követtük Pastorello et al. 13 friss barackhéjat 4: 1 (tömeg/térfogat) arányban 10 mmol/l foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS; pH 7) hígítottunk 2% polivinil-polipirrolidonnal, 2 mmol/l etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) dinátrium-sóval és 10 mmol/l-rel. nátrium-dietil-ditiokarbamát. Miután homogenizáltuk és 15 000 g-nál 4 ° C-on 30 percig centrifugáltuk, a felülúszót 24 órán át 4 ° C-on PBS-sel szemben dializáltuk. Az extraktumokat 10 percig centrifugáltuk, és -80 ° C-on fagyasztottuk.

Elektroforézis és immunblotolás

Az immunblottozáshoz az őszibarack kivonatokat nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS-PAGE) választottuk el, és polivinilidén-difluorid membránokba helyeztük. A fehérje-kötő csíkokat barackra allergiás betegek szérumaival inkubáltuk, és torma-peroxidázzal (HRPO) jelölt anti-humán IgE antitesttel detektáltuk. Tíz ételallergia nélküli, mugwort pollenallergiában szenvedő beteg negatív kontrollként szolgált.

Immunblot gátlási vizsgálatot végeztek 6, barackra allergiás beteg összesített szérumával. Röviden, 500 μl egyesített szérumot inkubáltunk 1 órán át 500 μl oldattal, amely 400 μg mugwort, barackfehérjét és 4 μg tisztított őszibarack LTP-t tartalmazott (Alpco Diagnostics, Windham, NH, USA). A gátlás után őszibarack és bögre immunblottolást hajtottunk végre a fent leírtak szerint.

Tömegspektrometria

A tömegspektrometriás elemzéshez gélszeleteket alkalmaztunk a Coomassie-festett SDS-PAGE gélek megfelelő régiójából (12 kD), és triptikus emésztésnek vetettük alá. A fehérje-azonosítást egy MicrOTOF-QII-n (Bruker Daltonics Inc., Manning Park Billerica, MA, USA) végeztük. Az eredményt összehasonlítottuk a Mass Spectrometry Protein Sequence Database-szel (MSDB) a fehérje azonosításához Mascot szoftver segítségével (Matrix Science, London, Egyesült Királyság).

Statisztikai analízis

Az értékeket átlag ± standard deviáció (tartomány) vagy szám (%) formájában mutatjuk be.

* Növényi ételallergiában szenvedő egyének; † Növényi ételallergia nélküli személyek.

A mugwort pollenhez kapcsolódó ételallergia fő tünetei és kiváltói

Összefoglalva: 148 betegből (72%) 107 számolt be allergiás reakcióról a kérdőívben szereplő 16 élelmiszer közül legalább egyre. Az étel okozta tünetek gyakoriságát a táblázat tartalmazza. A 107 beteg közül 51-en (48%) tapasztaltak legalább 1 epizódot az élelmiszer okozta anafilaxiában, 15-en (14%) pedig az étel okozta tünetek súlyosbodásáról számoltak be a mugwort pollen szezonban.

Az őszibarack jelentette a legtöbb jelentett reakciót (n = 68, 64%), majd alma (n = 26, 24%), mangó (n = 21, 20%), földimogyoró (n = 17, 16%), és mogyoró (n = 15, 14%, 1. ábra).

A bögre virágporával kapcsolatos ételallergia összefügg az LTP szenzibilizációjával

IgE, immunglobulin E; LTP, lipid transzfer fehérje.

Az ImmunoCAP adatai azt mutatták, hogy a Pru p 3, Ara h 9 és Cor a 8 specifikus IgE szintje szignifikánsan magasabb volt a szisztémás reakcióban szenvedő betegeknél, mint az OAS betegeknél. Barackallergiás személyeknél jó egyezést figyeltek meg az ImmunoCAP és az immunoblotting eredmények között. Számos korábbi tanulmány azt is kimutatta, hogy a növényi táplálék LTP-szenzibilizációja a szisztémás allergiás reakciók kockázatával jár. 23., 30., 31. Az LTP-k stabil és kompakt másodlagos szerkezete ellenáll a hőkezelésnek és a gyomor-bél traktus proteolízisének, amelyek a súlyos tünetek kiváltásával járó jellemzők. 32 Ezért az LTP-szenzibilizálás magas értékei jelentik a súlyos allergiás reakciók kockázati tényezőjét a bögre pollenhez kapcsolódó ételallergiában.

Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy a bögre virágporának érzékenyítésében több összetevő is szerepet játszik. Az Art v 3 mellett más keresztreaktív allergénekről is beszámoltak, mint például az Art v 4 (profilin) 33 és az Art v 60 kDa. A keresztreaktív allergének iránti szenzibilizációs minták a földrajzi elhelyezkedéstől és az étkezési szokásoktól függően változhatnak. Az LTP-szenzibilizáció azonban elterjedt egy kínai korsópor virágporral kapcsolatos élelmiszer-allergiás betegek csoportjában.

Jelenleg tanulmányunk az LTP-szenzibilizálás első keresztmetszeti értékelése egy bögre pollenhez kapcsolódó élelmiszer-allergiás populációban. Ezt a tanulmányt korlátozhatja az egyetlen központ elemzése és a potenciális torzítás. Ezenkívül az ételallergia diagnózisa a klinikai kórelőzményen és a bőrszúrás teszten és/vagy specifikus IgE-n alapult, nem pedig kettős-vak, placebo-kontrollos élelmiszer-kihívás miatt a kínai kihívásokkal teli orvosi környezet miatt.

Összegzésképpen elmondható, hogy Kínában elterjedt a mugwort pollenhez kapcsolódó ételallergia, amely gyakran súlyos. Az LTP-k a fő táplálékallergének a szarvasmarha-pollen-étel szindrómában, és szisztémás allergiás reakciókkal társulnak. Ezért az LTP-szenzibilizáció meghatározása hasznos az élelmiszerallergia kockázatértékelésében. Ezenkívül a specifikus LTP-vel, az összes allergén ételben megtalálható keresztreaktív allergénnel végzett immunterápia hatékony lehet az ilyen betegek ételallergiájának kezelésében.

KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS

Köszönjük a vizsgálatban részt vevő kutatókat és betegeket. Ezt a kutatást a Kínai Orvostudományi Akadémia Orvostudományi Innovációs Alapja támogatta (támogatás száma 2016-I2M-1-003).