A Clostridium perfringens-brojlereknél kiváltott nekrotikus enteritist célzottan felszabaduló vajsav, zsírsavak és illóolajok

Eredeti cikkek

Teljes cikk
Ábrák és adatok
Hivatkozások
Idézetek
Metrikák
Újranyomtatások és engedélyek
PDF

Absztrakt

Bevezetés

A nekrotikus enteritis kialakulása a hajlamosító tényezők jelenlététől függ, amelyek közül a két legfontosabb a kokcidiális kórokozók és a magas fehérjetartalmú takarmány által okozott nyálkahártya károsodás (Kaldhusdal & Skjerve, 1996; Williams, 2005; Dahiya et al., 2006). Úgy gondolják, hogy a proteolitikus enzimek szerepet játszanak az elváltozás kialakulásának korai szakaszában (Olkowski et al., 2008). Nemrégiben egy új pórusképző toxint, a netB-t azonosítottak a C. perfringens kitörési törzs (Keyburn et al., 2008; Van Immerseel et al., 2009). Kimutatták, hogy ez a toxin elengedhetetlen a nekrotikus enteritis kiváltásához. Szinte egyik sem C. perfringens egészséges baromfitól izolált törzsek és a beteg csirkék szinte minden izolátuma hordozza ezt a toxint kódoló gént (Van Immerseel et al., 2009). Így feltételezik, hogy csak a törzsek egy alcsoportja okozhat betegséget, és az ilyen törzsek jelenléte egy baromfiházban egy másik lényeges tényező a nekrotikus enteritis kiváltásában. További bizonyítékokat szolgáltattunk e hipotézis alátámasztására (Timbermont et al., 2008), bemutatva, hogy a járványos izolátumok, de nem normális mikrobiota izolátumok, betegségeket okozhatnak kísérletileg fertőzött csirkékben.

Az Európai Unióban a madarak takarmányában a növekedést elősegítő antibiotikumok kiegészítésének tilalma óta az necroticus enteritis okozta C. perfringens brojlercsirkékben újból megjelenik (Grave et al., 2004; Van Immerseel et al., 2004; Williams, 2005). Főként a betegség szubklinikai formája a fő probléma, amely súlyos termelési veszteségekhez vezet (Van Der Sluis, 2000; Hermans & Morgan, 2007). Hagyományos terápiás antimikrobiális szerek alkalmazhatók a nekrotikus enteritis szabályozására. Ez a megközelítés azonban ellentétes azzal a céllal, hogy csökkentsék és minimalizálják az antibiotikumok használatát a madártermesztésben. Ezért a baromfiiparnak jelenleg alternatív kezelési vagy táplálkozási stratégiákra van szüksége a betegség előfordulásának és súlyosságának megelőzésére és ellenőrzésére.

A nekrotikus enteritis megelőzésére alkalmas takarmány-adalékanyagok a rövid és közepes láncú zsírsavak és illóolajok. A zsírsavak antibakteriális hatása régóta ismert (Nieman, 1954). Ezek közül a laurinsav magas antimikrobiális aktivitással rendelkezik C. perfringens (Skrivanová et al., 2005). Ezzel szemben a butirát nem gátolja C. perfringens de a villusok növekedésének serkentőjeként tartják számon (Kien et al., 2007), ezért fontos lehet a hámelváltozások megelőzésében vagy regenerálásában. Az illóolajok egyes keverékei kimutatták, hogy javítják a brojler teljesítményét, ha étrend-kiegészítőként adják őket (Suk et al., 2003; Hernández et al., 2004; Kereszt et al., 2007). Ismert, hogy a timol, a cinnamaldehid és az eukaliptol antimikrobiális hatást fejt ki C. perfringens (Candan et al., 2003; Mitsch et al., 2004; Jujena és Friedman, 2007). Kimutatták azt is, hogy egyes illóolaj-keverékek csökkentik C. perfringens gyarmatosítás és szaporodás (Mitsch et al., 2004). Ezenkívül az illóolajok speciális keverékei úgy tűnik, hogy ellenőrzik a kokcidiás fertőzéseket, és ezáltal csökkenthetik a nekrotikus enteritist (Giannenas et al., 2003).

Jelen tanulmányban a vajsav, a közepes láncú zsírsavak (C6 – C12, de főként laurinsav) és az illóolajok (timol, fahéjamaldehid és eukaliptusz illóolaj) vagy ezek kombinációjának hatékonysága a nekrotikus enteritis szabályozásában vizsgálták.

Anyagok és metódusok

Törzsek és oltások

C. perfringens az 56. törzset egy brojlercsirke beléből izolálták, súlyos nekrotikus bélelváltozásokkal. Ez egy A típusú törzs (nincsenek béta-2 vagy enterotoxin gének), és mérsékelt mennyiségű alfa toxint termel in vitro (Gholamiandehkordi et al., 2006). A törzs netB-pozitív és korábban nekrotikus enteritis indukálására alkalmazták in vivo modell (Gholamiandehkordi et al., 2007; Timbermont et al., 2008). A csirkék beoltása előtt a baktériumokat anaerob módon tenyésztették agyszív infúziós táptalajban (Oxoid, Basingstoke, Egyesült Királyság) 24 órán át 42 ° C-on.

A Nobilis Gumboro D78 (Intervet - Schering-Plough Animal Health, Brüsszel, Belgium) és a Paracox-5 ™ anticokcidiális vakcina (Schering-Plough Animal Health, Brüsszel, Belgium), élő, legyengített oocisztákat tartalmazó vakcina Eimeria acervulina, Eimeria maxima (két sor), Eimeria mitis és Eimeria tenella, ebben a vizsgálatban használták.

Az adalékanyagok minimális gátló koncentrációi

Minimális gátló koncentrációt (MIC) határoztunk meg az adalékokhoz pH 6-on. Vajsavat, laurinsavat, timolt, cinnamaldehidet és az eukaliptusz illóolaját (Sigma, St Louis, Missouri, USA összes termékét) kétszeres hígításként teszteltük 96 lyukú mikrolemezekben az agy szív infúziós levében. A vajsav koncentrációja 220 és 0,86 mg/ml között, a laurinsav esetében 0,5 és 0,0078 mg/ml között, a timol esetében 3,76 és 0,029 mg/ml között, fahéjamaldehid esetében 1 és 0,008 mg/ml között, a fahéjaldehid esetében pedig 10,67 és 0,67 mg között van./ml az eukaliptusz illóolajhoz. A baktériumszuszpenziókat foszfáttal pufferolt sóoldattal hígítottuk McFarland 0,5 sűrűségig. Ennek a szuszpenziónak az 5 µl-es oltóanyagát 195 µl táptalajhoz adtuk mikrohullámú lemezen. Ezeket a szuszpenziókat anaerob módon inkubáltuk 20 órán át 42 ° C-on, majd a baktériumok szaporodását vizuálisan értékeltük. A kísérleteket három példányban hajtottuk végre.

Madarak és szállás

In vivo nekrotikus enteritis vizsgálatokat kísérleti oltásokkal végeztünk Ross 308 brojlercsirkékkel, amelyeket egynapos fiókákként kaptak egy kereskedelmi keltetőből. A madarakat elkülönítve tartották. Az összes kezelési csoportot ugyanabban a helyiségben helyezték el, 1 m 2 -es ketrecekben, a padlón pedig alom. Az összes ketrecet szilárd falak választották el egymástól, hogy megakadályozzák a különböző kezelési csoportokba tartozó madarak érintkezését. Minden kísérlet előtt a helyiségeket perecetsavval és hidrogén-peroxiddal (Hygiasept® vaporizer climasept; SARL Hygiasept, Sevrey, Franciaország) és egy kereskedelmi forgalomban kapható anti-kokcidiális fertőtlenítőszerrel (OO-CIDE; DuPont Animal Health Solutions, Wilmington, Delaware, USA) fertőtlenítették. Az első vizsgálatban 175 csirkét osztottak hét 25 csoportos csoportba; és a második vizsgálatban 200 csirkét osztottak két csoportba, 22-ből (negatív kontrollcsoport és csak kokcídiumot kapott csoport) és hatból 26-os csoportba. Ivóvizet és takarmányt kaptak ad libitum. 23/1 órás fény/sötétség programot alkalmaztunk. A madárkísérleteket a Genti Egyetem Állatorvostudományi Kar Etikai Bizottságának ajánlásai és jóváhagyása alapján hajtották végre.

In vivo nekrotikus enteritis modell

A próbákat a korábban leírtak szerint hajtottuk végre (Gholamiandehkordi et al., 2007). Röviden: a brojlereket búza/rozs alapú (43%/7,5%) táplálékkal etették, fehérjeforrásként szójalisztet. A takarmány összetételét a Gholamiandehkordi et al. (2007). A 18. napon Gumboro vakcinát adtak az ivóvízbe, minden csoportban. A 19. naptól kezdve ugyanazt az étrendet alkalmazták, azzal a különbséggel, hogy fehérjeforrásként hallisztet (30%) használtak. Az összes csoportot orálisan fertőztük műanyag csővel (naponta háromszor), körülbelül 4,10 8 telepképző egységgel C. perfringens baktériumok a 19., 20., 21. és 22. napon. A 20. napon az összes madarat, kivéve a kontrollcsoportba tartozó állatokat, orálisan oltottuk be a Paracox-5 ™ tízszeres adagjával. A 23., 24. és 25. napon minden csoportból nyolc madarat eutanizáltunk T61 intravénás injekcióval (Intervet, Mechelen, Belgium). Nekrotikus enteritis elváltozás pontozását és mintagyűjtést végeztük, az alábbiakban leírtak szerint.

Az első kísérletben négy csirkefunkciót vajsavval kiegészített étrenddel (But csoport), vajsavval közepes láncú zsírsavakkal (C6 – C12, de főként laurinsav; But/zsír csoport) kiegészítve vajsavval tápláltak. sav közepes láncú zsírsavakkal és illóolajokkal (timol, cinnamaldehid és eukaliptusz illóolaj; But/Fat/Eo csoport) és önmagában illóolajokkal (Eo csoport) kombinálva. Az adalékanyagok koncentrációit az 1. táblázat tartalmazza.