Határok a farmakológiában

Etnofarmakológia

Szerkesztette

Adolfo Andrade-Cetto

Mexikó Nemzeti Autonóm Egyetem, Mexikó

Felülvizsgálta

Marcia Hiriart

Sejtfiziológiai Intézet, Mexikó Nemzeti Autonóm Egyetem, Mexikó

Adriana De Siervi

CONICET Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME), Argentína

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

Cikk letöltése
- PDF letöltése
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Kiegészítő
  Anyag
Exportálás
- EndNote
- Referencia menedzser
- Egyszerű TEXT fájl
- BibTex

OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

1 A Puer Tea Science fő laboratóriuma, Oktatási Minisztérium, Yunnan Agrártudományi Egyetem, Kunming, Kína
2 Yunnan teafeldolgozásának kutatóközpontja, Yunnan Mezőgazdasági Egyetem, Kunming, Kína
3 A teaforrások és -feldolgozás tudományos megfigyelő és kísérleti állomása Yunnanban, Mezőgazdasági Minisztérium, Kunming, Kína
4 Tudományos Tanszék, Yunnan Mezőgazdasági Egyetem, Kunming, Kína

Bevezetés

A túlsúly és az elhízás az elmúlt években riasztó mértékben növekedett, és ma már elterjedt az egész világon. A túlsúlyt és az elhízást általában a kalóriabevitel és -fogyasztás közötti energia-egyensúlyhiány okozza, különösen a zsírok és cukrok magas étrendi bevitele (Bolton-Smith és Woodward, 1994; Gibson, 1996; Yeomans, 2017; Zambrano és Nathanielsz, 2017) . Egy 1975 és 2014 között végzett, több mint 19,2 millió felnőtt résztvevőből álló népességalapú vizsgálatból kiderült, hogy 2014-ben világszerte körülbelül 641 millió ember volt elhízott, szemben az 1975-ös 150 millióval. Az elmúlt négy évtizedben globális átmenet következett be, egy olyan világból, amelyben az alsúly prevalenciája több mint kétszerese volt az elhízásnak, és olyan világba, ahol több ember elhízott, mint alulsúlyos (NCD Risk Factor Collaboration [NCD-RisC] et al., 2016). Az elhízás és a különböző krónikus betegségek, köztük a 2-es típusú cukorbetegség, a magas vérnyomás, a szív- és érrendszeri betegségek, a stroke, sőt egyes rákos megbetegedések között is erős pozitív kapcsolat van (Rossner, 2002; Basen-Engquist és Chang, 2011; Sartorius et al., 2016; Smith és mtsai., 2017). Ezek károsak az egyén egészségére, valamint nagy gazdasági terhet jelentenek családjuk számára. Ezért a hatékony testsúly-szabályozási beavatkozások, beleértve az alacsony kalóriatartalmú étrendet és a testmozgást, fontos szerepet játszhatnak az elhízás és az anyagcsere-betegségek enyhítésében (Lyznicki et al., 2001).

A zöld teát világszerte fogyasztják, különösen Kelet-Ázsiában. A zöld tea fő összetevői a koffein és a katechineként ismert polifenol vegyületek. A katechinek közül a zöld teában a (-) - epigallocatechin-3-gallát (EGCG) található a legnagyobb mennyiségben. A jelentések szerint az EGCG felelős a zöld tea számos lehetséges egészségügyi előnyéért, beleértve a csökkent súlygyarapodást és az inzulinrezisztencia enyhítését (Richard et al., 2009; Sae-tan et al., 2011).

Yang és mtsai. (2016) áttekintette a testtömeg csökkentésének és a metabolikus szindróma zöld tea általi enyhítésének mechanizmusait. Két fő mechanizmust javasoltak az EGCG-vel kapcsolatban: (1) csökkent a lipidek és fehérjék felszívódása a bélben, ezáltal csökkentve a kalóriabevitelt, és (2) aktiválva az AMPK-t a májban, a vázizomban és a fehér zsírszövetben. „AMPK hipotézisük” szerint az AMPK fontos szerepet játszik az EGCG zsírsavszintézisre és zsírsavkatabolizmusra gyakorolt hatásainak közvetítésében. Azonban csak egy tanulmány számolt be az AMPK aktivációjáról az EGCG által tenyésztett sejtekben és egerek májszöveteiben, ami arra utal, hogy a katekinek hatásait, beleértve azok elhízás- és rákellenes hatásait, legalább részben közvetítik az AMPK aktiválása ( Murase és mtsai., 2009). Így még mindig nem ismert, hogy az AMPK aktivációjának központi szerepe van-e a zsírszövet EGCG általi redukciójában, és az AMPK-nak hasonló szerepe van-e a különböző depókban.

Ebben a tanulmányban különböző adagokban adtunk EGCG-t C57BL/6J egereknek annak elhízás- és hipolipidémiás hatásainak meghatározására. Azt is célul tűztük ki, hogy (1) vajon az EGCG által aktivált AMPK foszforiláció központi szerepet játszott-e a zsírszövetekben a zsírok felhalmozódásának csökkentésében, és (2) hogy az EGCG hasonló hatással van-e a különböző zsírraktárak lipidfelhalmozódásának szabályozására?.

Anyagok és metódusok

Állatok

A 6 hét körüli hím C57BL/6J egereket a Changzhou Card Vince Experimental Animal Co., Ltd. cégtől szereztük be. A C57BL/6J egereket egyedileg, egy környezetileg ellenőrzött helyiségben helyeztük el (szellőzés, 22 ± 2 ° C, 55 ± 5% relatív páratartalom). ) val vel ad libitum a vízhez és az élelemhez való hozzáférés, és 12 órás világos – sötét ciklusban fenntartva. Az EGCG-t (tisztaság> 98%, Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.) desztillált vízzel 10 mg/ml-es tárolóoldatként állítottuk elő, és sötétben -20 ° C-on tároltuk a szoptatásig.

Az egereket 10 kca% zsírtartalmú kontroll diétával (D12450J, Research Diets) etettük 2 héttel a kísérlet megkezdése előtt. Az egereket körülbelül 8 hetes korukban négy csoportra osztottuk; mindegyik csoportba nyolc hím egér került. A kontroll csoportba tartozó egereket kontroll étrenddel etették (D12450J, Research Diets). A HFD csoportba tartozó egereket magas zsírtartalmú étrenddel etették 60 kca% zsírtartalommal (D12492, Research Diets). A HFD + EGCG csoportba tartozó egereknek etettük a HFD-t, és külön-külön 50 mg/kg EGCG-t és 100 mg/kg EGCG-t adtunk intragasztrikusan naponta. 20 hetes etetés után a testtömeg, az étkezés, a vízbevitel és a vércukorszint változását rögzítették. Ezután az egereket leöltük és a szöveteket összegyűjtöttük, folyékony nitrogénnel azonnal lefagyasztottuk és -80 ° C-on tároltuk. Az egerek elhízásának becsléséhez ebben a tanulmányban a Lee-indexet [testtömeg (g) ∗ 0,33 ∗ 1000/testhossz (cm)] használtuk, amely széles körben alkalmazott módszer a testtömeg és az elhízás megítélésére kis méretű kísérleti állatokban ( Lee, 1929; Bernardis és Patterson, 1968). Az ebben a vizsgálatban végzett állatkísérleteket a Yunnan Agráregyetem állatetikai bizottsága hagyta jóvá (20160318002, 2016. március 18.).

Valós idejű kvantitatív polimeráz láncreakció (PCR) elemzés

A zsírszövetekből származó teljes RNS-t TRIzol (TransGen Biotech, Peking, Kína) alkalmazásával extraháltuk. A kiegészítő DNS-t a PrimeScript RT reagenskészlet felhasználásával szintetizálták genomi DNS-sel (Takara) a gyártó protokollja szerint. A PCR-t SYBR Green valós idejű PCR Master Mix (TransStart Top Green qPCR SuperMix, TransGen Biotech, Peking, Kína) alkalmazásával ABI 7900HT Fast Real-Time PCR rendszerrel (Applied Biosystems, Inc.) végeztük. Az adatokat PCR-ciklus után kaptuk; a génexpressziós szinteket a 2 -ΔΔCT módszerrel számoltuk, és párhuzamosan mértük a β-aktinná. A primer szekvenciákat az 1. táblázat tartalmazza.

ASZTAL 1. A vizsgálatban használt qRT-PCR primerek.

Western Blot elemzések

Az összes fehérjét fehér zsírszövetekből izoláltuk proteázzal és foszfatáz inhibitorokkal kiegészített RIPA (Solarbio Life Science, Peking, Kína) puffer alkalmazásával. A fehérjekoncentrációkat fehérje vizsgálati reagenssel (Beyotime Biotechnology, Kína) határoztuk meg, és egyforma mennyiségű fehérjét (60 μg) töltöttünk minden egyes lyukba egy 8% -os nátrium-dodecil-szulfát poliakrilamid gél elektroforézis gélt. Miután a fehérjéket egy polivinilidén-difluorid membránra vittük, a blotokat 5% -os szarvasmarha-szérum albuminnal blokkoltuk, majd éjszakán át 4 ° C-on inkubáltuk a következő elsődleges antitestekkel: anti-AMPKα (23A3), anti-phospho-AMPKα (Thr172 ), anti-ACC, anti-FAS és anti-CPT1α (Cell Signaling Technology, Egyesült Államok). Három TBST pufferrel végzett mosás után a blotokat megfelelően hígított torma-peroxidázzal konjugált szekunder antitestekkel inkubáltuk 1 órán át szobahőmérsékleten. Az immunblotokat fokozott kemilumineszcencia detektáló készlettel (Tiangen Biotech, Peking, Kína) tettük láthatóvá. A fehérjeszinteket a tubulinra normalizáltuk terhelés kontrollként.

Szérum lipidek és széklet lipidek kimutatása

A vért a belső kantuszból vették, és heparin-nátriummal mikrocentrifuga csövekbe vették. A vérmintákat 3000 fordulat/perc sebességgel 20 percig centrifugáltuk, és a plazmát az elemzésig -20 ° C-on fagyasztva tartottuk. Meghatároztuk az összes koleszterin (TC), a TAG, a nagy sűrűségű lipoprotein koleszterin (HDL-C) és az LDL-C szintjét. Minden vérminta-elemzésre a kunmingi második kapcsolt kórházban került sor.

A székletmintákat 18. héten gyűjtöttük, -80 ° C-on fagyasztottuk és fagyasztva szárítottuk (FD5-6, Sim). A TC, TAG, HDL-C, LDL-C és szabad zsírsavak (FFA-k) szintjét a vonatkozó készletek (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kína) segítségével mértük a protokoll szerint.

Statisztikai analízis

A kísérleti adatok statisztikai elemzését az SPSS 17.0 és a GraphPad Prism 6 alkalmazásával végeztük. Az adatokat átlag ± SEM-ként adjuk meg. A csoportok közötti különbségeket egyirányú ANOVA alkalmazásával elemeztük; P ∗ 0,33 - 1000/testhossz (cm)]. Megállapítottuk, hogy a Lee index szignifikánsan magasabb volt a HFD egerekben, mint más csoportokban, és az EGCG is szignifikánsan csökkentette az egerek elhízását (1D. Ábra). Meghatároztuk a szubkután zsírtömeg és a testtömeg (SFW/BW), valamint az epididymális zsírtömeg és a testtömeg (EFW/BW) arányát is (1C, D ábra). A HFD és az EGCG csoportban az SFW/BW szignifikánsan magasabb volt, mint a kontroll csoporté; az EGCG beadása azonban nem csökkentette szignifikánsan a szubkután zsírgyarapodást a HFD csoporthoz képest (1C. ábra). A HFD csoportban az EFW/BW szignifikánsan magasabb volt, mint a többi csoportban (1D ábra). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az EGCG beadása csökkentheti az elhízást és az epididymális zsír felhalmozódását egerekben.

1.ÁBRA. Az EGCG csökkentette az elhízást és a zsírsúlyt egerekben. (A) Az egerek testtömege 20 hetes etetés után; (B) Lee index; (C) a szubkután zsírtömeg és a testtömeg aránya; és (D) epididymális zsír súlya a testtömegéig. Az adatokat átlag ± SEM-ként tüntettük fel (n = 6/7 csoportonként). ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P § P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P § P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗∗ P ∗∗∗ P Kulcsszavak: EGCG, elhízás, fehér zsírszövetek, génexpresszió, AMPK

Idézet: Li F, Gao C, Yan P, Zhang M, Wang Y, Hu Y, Wu X, Wang X és Sheng J (2018) Az EGCG részben csökkenti az elhízást és a fehér zsírszövet nyereségét az egerek AMPK-aktiválásával. Elülső. Pharmacol. 9: 1366. doi: 10.3389/fphar.2018.01366

Beérkezett: 2018. április 26 .; Elfogadva: 2018. november 07 .;
Publikálva: 2018. november 22.

Adolfo Andrade-Cetto, Universidad Nacional Autónoma de México, Mexikó

Marcia Hiriart, Instituto de Fisiología Celular (IFC), Mexikó
Adriana De Siervi, Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME), Argentína

† Ezek a szerzők egyformán járultak hozzá ehhez a munkához