A metformin hatása a glükagon-szerű 1-es peptidre (GLP-1) és a leptinszintre elhízott, cukorbetegeknél

Absztrakt

CÉLKITŰZÉS- A metformin glükagonszerű peptid 1 (GLP-1) és leptin szintre gyakorolt hatásainak értékelése.

KUTATÁSI TERVEZÉS ÉS MÓDSZEREK- Összesen 10 elhízott, nem cukorbeteg férfi beteget vizsgáltak egy 14 napos kezelés előtt és után, 2,550 mg/nap metforminnal, és összehasonlították őket 10 kezeletlen elhízott kontrollal. A 0. és a 15. napon a leptin és a GLP-1 (7–36) amid/(7–37) szintjét értékelték egy orális glükózterhelés előtt és után egy euglikémiás hiperinsulinémiás bilincs alatt, hogy elkerüljék az inzulinémia és a glikémia variációinak interferenciáját a GLP-re. -1 és a leptin szekréciója. A metformin GLP-1 (7–36) amid degradációjára gyakorolt hatását humán plazmában és dipeptidil-peptidáz IV-t (DPP-IV) tartalmazó pufferoldatban is tanulmányozták.

EREDMÉNYEK—A szájon át történő glükózterhelés nem befolyásolta a leptinszintet, és a metformin-kezelés után sem módosult. A metformin jelentős (P 30 kg/m 2), 18–45 éves, normál éhomi glikémiás és normális glükóztolerancia-betegeket indukált, akiket az anyagcsere-betegségek osztályának ambulanciájára irányítottak, Careggi Általános Kórház, Firenze, Olaszország, elhízás kezelésére. A női betegeket kizárták, hogy elkerüljék a nemi hormonszint ingadozásainak interferenciáját a leptin szekréciójára (19). Az ismert gyomor-bélrendszeri betegségben szenvedő betegek; pajzsmirigy alulműködés; vagy máj-, vese- vagy légzési elégtelenség nem szerepelt a vizsgálatban. Ugyancsak kizárták azokat, akiknél a szérum kreatininszint> 1,2 mg/dl, a tirotropin> 4,0 mU/l, az éhomi plazma glükóz> 6,3 mmol/l vagy a plazma glükóz> 7,7 mmol/l volt 120 perc múlva 75 g orális glükózterhelés után . A vizsgálatot megelőző 2 hét alatt egyik beteg sem részesült farmakológiai kezelésben. Valamennyi beteg írásos beleegyezését adta a felvétel előtt. A vizsgálati protokollt a firenzei egyetem etikai bizottsága hagyta jóvá.

Kezelés

A betegeket vagy az aktív kezelési csoportba, vagy a kontroll csoportba soroltuk. Az aktív kezelési csoportba tartozó betegeket 1450 napig 2,550 mg/nap metforminnal kezelték (850 mg naponta háromszor reggeli, ebéd és vacsora után). A kontroll csoportba tartozó betegek a vizsgálat ideje alatt nem részesültek kezelésben. Az aktív kezelési csoport és a kontrollcsoport nem különbözött szignifikánsan az életkor (46,3 ± 10,9 vs. 48,2 ± 11,2 év), a BMI (34,8 ± 3,1 vs. 34,6 ± 3,2 kg/m 2), a derék kerülete (116,5 ± 10,9) tekintetében 115,8 ± 14,3 cm), éhomi és 2 órás postload glykaemia (5,5 ± 0,6 vs. 5,5 ± 0,7 mmol/l és 6,2 ± 1,0 vs. 6,1 ± 1,3 mmol/l). Mindkét csoportban a GLP-1 és a leptin szintjét a 0. és a 15. napon vizsgálták, hogy ellenőrizzék a metformin terápia által kiváltott változásokat.

A betegeket a járóbeteg-szakrendelés első látogatásakor vették fel, és egyik vizsgálat sem részesült az elhízás kezelésében (pl. Diétás recept, oktatási programok stb.) A vizsgálat ideje alatt.

A leptin és a GLP-1 szint értékelése

A leptin és a GLP-1 szintjét a 0. napon (a metformin terápia megkezdése előtt az aktív kezelési csoportban) és a 15. napon értékeltük. A plazma leptin és a GLP-1 szintet éhgyomorra és orális glükózterhelés után mértük; az értékelést euglikémiás hiperinsulinémiás bilincs alatt (20) végezték el, hogy elkerüljék a metformin által kiváltott vércukor- vagy inzulinváltozásokat, amelyek zavarják az eredményeket.

A GLP-1 lebomlásának gátlása in vitro

A metformin in vitro GLP-1 (7–36) amid lebontására gyakorolt hatását egészséges önkéntesek összesített humán plazmájában értékelték, a korábban leírtak szerint (21). Az emberi plazmát 11 (6 férfi és 5 nő) egészséges, sovány (BMI 2), nem cukorbeteg önkéntesből nyerték, 25–42 évesek. Egy éjszakán át tartó böjt után 8: 30-kor vért vettünk 10 ml EDTA-ból kiürített csövekbe, 500 NE aprotinin A hozzáadásával (Trasylol; Bayer Farmaceutici, Milánó, Olaszország). A plazmát azonnal elválasztottuk 4 ° C-os centrifugálással, és az 1 ml-es mintákat 37 ° C-on 30 percig inkubáltuk 110 pmol/l szintetikus GLP-1 (7–36) amiddal (Peninsula Laboratories, Belmont, CA). 0,1 mol/l Tris-HCl [pH 8] és különböző koncentrációkban (0, 0,01, 0,05, 0,1 és 0,5 μg/ml) metformint (Molteni Farmaceutici, Firenze, Olaszország) 0 és 30 percig (n = 6 minta) minden kísérleti pontra). A reakciót 20 μl DPP-IV inhibitor LC0014 hozzáadásával leállítottuk.

Annak igazolása, hogy a metformin hatása a GLP-1 (7–36) amid degradációjára in vitro képes-e közvetíteni a DPP-IV gátlásán keresztül, 110 pmol/l GLP-1 (7–36) amid (Peninsula Laboratories) 0,1 mol/l Tris-HCl-t (pH 8) 0,06 U/ml disznóvese DPP-IV-vel (Sigma, St. Louis, MO) inkubáltunk, és különböző koncentrációkkal (0,01, 0,05, 0,1 és 0,5 μg/ml). metformint (Molteni Farmaceutici) 0 és 30 percig (n = 6 replikátum minden kísérleti pontnál). A reakciót 20 μl DPP-IV inhibitor LC0014 hozzáadásával leállítottuk, és az inkubátumokat -80 ° C-on tároltuk a vizsgálatig. A leptin meghatározására szolgáló vérmintákat kiürített gélcsövekbe vettük 500 NE aprotinin A (Trasylol) hozzáadásával. A szérumot 4 ° C-on végzett centrifugálással elválasztottuk, és a vizsgálatig -80 ° C-on lefagyasztottuk.

Laboratóriumi vizsgálatok

A GLP-1 (7–36) amidot/(7–37) GLP-1 (aktív) enzimmel kapcsolt immunvizsgálati készlettel (Linco) mértük. Ez a vizsgálat egy bevont mikrohullámú lemezen rögzített monoklonális antitesten alapult, amely megköti az aktív GLP-1 NH2-terminális régióját. Az aktív GLP-1 koncentrációja arányos az umbelliferon által létrehozott fluoreszcenciával, amelyet az alkalikus foszfatáz (anti-GLP-1 monoklonális antitestekkel konjugálva) és a metil umbelliferyl-foszfát reakciójával állítanak elő. A legalacsonyabb jelentett kimutatási határérték 2 pmol/l; a jelentett teszten belüli variációs koefficiens (CV) alacsony és magas koncentrációk esetén 8% (4–76 pmol/l tartományban), a teszt közötti CV pedig 12% 4–8 pmol/l és 7% 28 –76 pmol/l. Ellenőriztük a vizsgálaton belüli és a CV közötti CV-ket, amelyek 12,5, illetve 15,5% voltak 8 pmol/l-nél, illetve 9,5, illetve 13,5% voltak 76 pmol/l-nél. A vizsgálat keresztreaktivitása 100% a GLP-1 (7–36) amid és a GLP-1 (7–37) esetében, de a GLP-1 (9–36) amid, a GLP-2 és a glukagon esetében nem mutatható ki. A szérum leptint egy kompetitív radioimmun vizsgálati készlet segítségével mértük meg az emberi leptinhez (Linco). Az inzulint immunvizsgálattal mértük IMX System analizátorral (Abbott Laboratories Diagnostic Division, Tokió); A C-peptidet immunvizsgálattal mértük Immulite 2000 analizátorral (DPC, Los Angeles).

Statisztikai analízis

Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki, a nem normálisan elosztott változók kivételével, amelyeket mediánban (25–75. Percentilis) fejezünk ki. Kétfarkú párosított és párosítatlan Student-féle t teszteket alkalmaztunk a változók átlagainak normál eloszlású összehasonlításához, ahol ez megfelelő volt; Wilcoxon és Mann-Whitney U teszteket alkalmaztunk nem normális eloszlású változók, például keringő inzulin esetében. Kétirányú varianciaanalízist (ANOVA) alkalmaztak több mint két minta összehasonlításához. Kétirányú ANOVA-t alkalmaztunk a GLP-1 szekréció összehasonlítására az ingerek során a csoportok között. Az összefüggéseket Pearson módszerével értékeltük.

EREDMÉNYEK

A metformin hatása a leptin és a GLP-1 szintre elhízott betegeknél

Az aktív kezelésben és a kontrollcsoportban lévő összes beteg befejezte a vizsgálatot. Senki sem tapasztalt súlyos nemkívánatos eseményeket. Az aktív kezelési csoportban két beteg enyhe és átmeneti hasmenésről számolt be, amely nem határozta meg a metformin-kezelés leállítását.

A metformin hatása a GLP-1 (7–36) amid degradációjára in vitro, amelyet a GLP-1 (7–36) amidkoncentrációk mutatnak (% eltérés a 0. idıtıl), 30 perces metforminnal végzett inkubálás után humán önkéntesek összesített szérumában ( A) és DPP-IV (B) tartalmú pufferoldatban, hozzáadva 110 pmol/l GLP-1 (7–36) amidot. Az adatokat átlag ± SD-ként fejezzük ki. * P c.rotelladfc.unifi.it .

2000. július 13-án érkezett közzétételre, és felülvizsgált formában elfogadták 2000. november 10-én.

HÁROMSZÖGELÉSI PONT. tagja a dán Novo Nordisk GLP-1 analógjaival foglalkozó nemzetközi tanácsadó testületnek. Honoráriát kapott a Molteni Farmaceutici-tól (Firenze) és a Bayer Farmaceutici-tól (Milánó, Olaszország), amelyek jelenleg metformint forgalmaznak Olaszországban. E. M. a Molteni Farmaceutici fizetett tanácsadója.

A szám egy másik részében található táblázat sok anyag hagyományos és Système International (SI) egységeit és konverziós tényezőit mutatja.